EDER PAULO BELATO ALVES
EFEITOS DA SUPLEMENTAÇÃO COM L-GLUTAMINA 2% SOBRE OS NEURÔNIOS ENTÉRICOS E MUCOSA DO JEJUNO DE RATOS COM
DIABETES CRÔNICO INDUZIDO POR ESTREPTOZOOTOCINA
Orientador
Professor Dr. Marcílio Hubner de Miranda Neto
EDER PAULO BELATO ALVES
EFEITOS DA SUPLEMENTAÇÃO COM L-GLUTAMINA 2% SOBRE OS NEURÔNIOS ENTÉRICOS E MUCOSA DO JEJUNO DE RATOS COM
DIABETES CRÔNICO INDUZIDO POR ESTREPTOZOOTOCINA
Tese apresentada ao Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas (Área de concentração - Biologia Celular e Molecular) da Universidade Estadual de Maringá, para obtenção do grau de Doutor em Ciências Biológicas.
Dados Internacionais de Catalogação-na-Publicação (CIP) (Biblioteca Central - UEM, Maringá – PR., Brasil)
Alves, Eder Paulo Belato, 1973-
A474e Efeitos da suplementação com L-glutamina 2% sobre os neurônios entéricos e mucosa do jejuno de ratos com diabetes crônico induzido por estreptozootocina / Eder Paulo Belato Alves. -- Maringá, 2009.
96 f. : figs. (algumas color), tabs.
Orientador : Prof. Dr. Marcílio Hubner de Miranda Neto.
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Maringá, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas, 2009.
1. Neurônios entéricos. 2. Diabetes mellitus - Neuropatia - L-glutamina. 3. L-glutamina - Neurônios entéricos. 4. Mucosa. 5. Miosina-V. 6. Peptídeo Intestinal Vasoativo (VIP). I. Miranda Neto, Marcílio Hubner, orient. II. Universidade Estadual de Maringá. Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. III. Título.
BIOGRAFIA
Eder Paulo Belato Alves nasceu em Maringá/PR em 20/09/1973. Possui graduação em
DEDICATÓRIAS
A Deus Pai Criador A Jesus Cristo Salvador
Ao Espírito Santo - Amor do Pai e do Filho - Santificador A Ele ....toda a glória
Ao meu pai, Fernando Marques Alves
E a minha mãe, Terezinha de Lourdes Belato Alves
Que, sem medir esforços, sempre me apoiaram e amaram incondicionalmente
À minha esposa
Angela Maria Pereira Alves,
Pelo amor, companheirismo, apoio e generosidade sempre constantes em minha vida...
Aos meus filhos: Daniel Pereira Alves e Alexandre Pereira Alves
AGRADECIMENTOS
À Universidade Estadual de Maringá, e ao Programa de Pós Graduação em Ciências Biológicas da Universidade Estadual de Maringá pela seriedade e comprometimento na realização deste curso de Doutorado;
À Universidade Estadual do Oeste do Paraná, pela oportunidade de ascensão;
Aos professores Programa de Pós Graduação por sua colaboração fundamental em favor de minha formação no Mestrado e agora no Doutorado;
Ao Prof. Dr. Marcílio Hubner de Miranda Neto pela amizade, conselhos e orientação segura;
A Profa. Dra. Jacqueline Nelisis Zanoni pela disponibilidade, atenção, sabedoria em orientar;
Ao Prof. Dr. Roberto Barbosa Bazotte pela sugestão da suplementação realizada nesta pesquisa.
A Profa. Dra. Rosângela Geritana Santana pelas sugestões e ajuda quanto à análise estatística;
Às Professoras de Histologia do Departamento de Ciências Morfológicas, Ângela, Elaine, Eneri, Luzmarina, Marli, Nilza, Raquel e Juliana pela acolhida e pelo apoio. Aos técnicos dos Laboratórios do DCM, pela ajuda indispensável no tratamento, morte dos animais e utilização dos equipamentos de análise de imagens;
A minha amada esposa Ângela Maria Pereira Alves, pela paciência, amor e ajuda fundamental para a conclusão deste trabalho.
Aos funcionários do DCM pela prontidão em ajudar;
Aos colegas de pós-graduação, pela convivência agradável, amizade, troca de idéias e experiências;
A todas as pessoas que participaram direta ou indiretamente para conclusão deste trabalho:
APRESENTAÇÃO
Esta tese é composta de dois artigos científicos. Inicia descrevendo os efeitos da suplementação com L-glutamina na sub-população de neurônios submucosos VIP imunoreativos e nas varicosidades mioentéricas VIP imunoreativas no artigo “Análise dos neurônios e das varicosidades VIP imunoreativos do jejuno de ratos diabéticos suplementados com L-glutamina”. Tem continuidade com o artigo “Efeitos da suplementação com L-glutamina sobre os neurônios mioentéricos miosina-V imunoreativos e mucosa do jejuno de ratos diabéticos” que descreve os efeitos da suplementação com L-glutamina na densidade e área da população geral de neurônios mioentéricos miosina-V imunoreativos e na mucosa do jejuno de ratos diabéticos. Em consonância com as regras do Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas, os artigos foram redigidos de acordo com as revistas: Nutritional Neuroscience e BMC Gastroenterology.
1 - Eder Paulo Belato Alves, Jacqueline Nelisis Zanoni, Angela Maria Pereira Alves Marcílio Hubner de Miranda Neto. Análise dos neurônios e das varicosidades VIP
imunoreativos do jejuno de ratos diabéticos suplementados com L-glutamina. Página 11
1.1 - Eder Paulo Belato Alves, Jacqueline Nelisis Zanoni, Angela Maria Pereira Alves Marcílio Hubner de Miranda Neto. Immunohistochemical study of VIP enteric neurons in diabetic rats supplemented with L-glutamine. Este artigo foi aceito para publicação na revista Nutritional Neuroscience (NN 64009) em 09 de agosto de 2009.
Página 32
2 - Eder Paulo Belato Alves, Angela Maria Pereira Alves, Marcílio Hubner de Miranda Neto, Jacqueline Nelisis Zanoni. Efeitos da suplementação com L-glutamina sobre os neurônios mioentéricos miosina-V imunoreativos e mucosa do jejuno de ratos diabéticos. Página 52
diabetic rats. Este artigo foi submetido à apreciação, visando publicação na revista BMC
RESUMO GERAL
das criptas, altura dos vilos e freqüência de células caliciformes. No grupo D a área do corpo celular dos neurônios e das varicosidades VIP-IR aumentou em 39,35% e 36,4% respectivamente em relação ao grupo N (p < 0,05). A suplementação com L-glutamina provocou no grupo DG redução da área do corpo celular (4,55%) e das varicosidades (28,9%) quando comparadas aquelas evidenciadas no grupo D (p < 0,05). Nos animais normoglicêmicos, a suplementação promoveu um aumento da área do corpo celular dos neurônios VIP-IR (8,49%) e varicosidades (21,3%) em relação aos controles (p < 0,05). Os neurônios miosina-V imunoreativos nos ratos do grupo D apresentaram “aspecto empalidecido” em relação aos outros grupos. A análise quantitativa demonstrou redução de 23,6% na densidade dos neurônios dos animais dos grupos D em relação ao grupo N (p<0.05). A suplementação não alterou a densidade neuronal entre os grupos N e NG. Os animais diabéticos suplementados (DG) apresentaram uma densidade neuronal 15,4% superior ao grupo D (p<0,05). A análise morfométrica revelou aumento de 8,8% nas áreas médias dos corpos celulares dos neurônios mioentéricos miosina-V imunoreativos do grupo D em relação ao grupo N (p < 0,05). O grupo DG apresentou áreas neuronais semelhantes aquelas verificadas no grupo D (p > 0,05). A suplementação não alterou a área neuronal entre os grupos N e NG. Nos quatro grupos estudados a profundidade das criptas, a altura os vilos, o índice metafásico e freqüência de células caliciformes da mucosa não apresentaram diferenças significantes (p>0,05). Verifica-se portanto que a suplementação com L-glutamina 2% teve uma repercussão positiva no diabetes crônico o que é evidenciada no grupo DG pela maior densidade de miosina-V no corpo e nos prolongamentos celulares dos neurônios mioentéricos, pela redução das áreas dos neurônios e varicosidades VIP-IR e pela manutenção de uma maior densidade de neurônios miosina-V positivos. Contudo não se verifica alterações na mucosa do jejuno dos ratos com ou sem suplementação com L-glutamina nos diferentes grupos.
GENERAL ABSTRACT
(p<0.05). L-glutamine supplementation decreased the areas of the cell bodies (4.55%) and varicosities (28.9%) in group DG compared to those observed in group D (p<0.05). In normoglycemic animals, supplementation promoted an increase in the area of the cell body of the VIP-IR neurons (8.49%) and varicosities (21.3%) relative to the controls (p<0.05). The myosin-V immunoreactive neurons in the rats of group D showed a “pale aspect” compared to the other groups. The quantitative analysis demonstrated a decrease of 23.6% in the density of the neurons in the animals from group D relative to group N (p<0.05). The supplementation did not alter the neuronal density between groups N and NG. The supplemented diabetic animals (DG) showed a neuronal density 15.4% higher than group D (p<0.05). The morphometric analysis revealed an increase of 8.8% in the mean areas of the cell bodies of the myosin-V immunoreactive neurons in group D compared to group N (p<0.05). Group DG showed neuronal areas similar to those of group D (p>0.05). The supplementation did not alter the neuronal areas between groups N and NG. In the four groups studied crypt depth, villus height, metaphasic index and incidence of calyciform cells of the mucosa did not show significant differences (p>0.05). It is therefore verified that the supplementation with 2% L-glutamine had a positive effect on chronic diabetes, as evidenced in group DG by the greater density of myosin-V in the cell body and extensions of the myenteric neurons, reduction in the areas of the VIP-IR neurons and varicosities and maintenance of a greater density of myosin-V positive neurons. However, alterations in the jejunal mucosa of the rats, whether with or without L-glutamine supplementation, were not seen in the different groups.
