,leA l
Ana Lucia Costa Darini .
A genetic study of a
Staphylococus aureus
plasm id
involving cure and transference
Discipline of Clinical Bacteriology
Department
of Clinical, Toxicological and Bromatological
Analysis
College of Pharmaceutical
Sciences - University of Siio Paulo
H ig h fre q u e n c y tra n s fe r a n d e lim in a tio n o f d ru g re s is ta n c e m a y in d ic a te a n e x tra c h ro m o s o m a l in h e rita n c e o f g e n e tic d e te rm i-n a i-n ts . T h is s tu d y s h o w s th e c u re a i-n d tra i-n s fe r o f a s m a ll p la s m id a n d te tra c y c lin e re s is ta n c e in Staphylococcus aureus 1 0 3 0 (5 5 )T e tR s tra in s . S e v e ra l m e th o d s a re a v a ila b le fo r p la s m id e lim in a tio n . W e u s e d e th id iu m b ro m id e , a n a g e n t th a t b in d s to D N A , a n d th u s in h ib its D N A p o ly m e ra s e . T h is c a u s e d a h ig h fre q u e n c y o f lo s s o f th e s m a ll p la s m id a n d re s is ta n c e to te tra c y c lin e . T ra n s fe r o f te tra c y c lin e re s is ta n c e w a s d o n e in a m ix e d c u ltu re a t a fre q u e n c y o f 1 0 -6•T h is ty p e o f s tu d y is v e ry im p o rta n t to p h y s ic ia n s a n d e p id e m io lo g y in v e s tig a to rs a n d p ro v id e s b e tte r k n o w le d g e o n a n tib io tic -re s is ta n c e m e c h a n is m s th a t m a y o c c u r
in vivo in a h o s p ita l e n v iro n m e n t.
U N IT E R M S : S .aureus. C u re . C o n ju g a tio n . P la s m id s . T ra n s fe re n c e .
IN T R O D U C T IO N
S
b a c te ria ,e v e ra l c rite riaw h e th e ra reth e rea v a ila b lea re g e n e sto d e te rm in e ,fo r re sista n c einto a n tib a c te ria l d ru g s in p la sm id s o r in
c h ro m o so m e s. O n e c rite riu m is th e tra n sfe r o f p la sm id s
b e tw e e n b a c te ria , w h ile a n o th e r is th e in sta b ility o f o n e
o r m o re b a c te ria l'p h e n o ty p e s, w h ic h w o u ld m e a n th a t
so m e g e n e s a re lo c a te d o n p la sm id sl. 7 .8 .
In tra n sfe r e x p e rim e n ts, it h a s b e e n n o te d th a t
re sista n c e d e te rm in a n ts e n c o d e d in p la sm id s m a y b e
Address for correspondence:
Ana Lucia Costa Darini
Departamento de Analises Clfnicas, Toxicol6gicas e
Bromat6rias - Disciplina de Bacteriologia Clfnica
Faculdade de Ciencias Farmaceuticas - USP
Ribeirao Preto/SP - Brasil - CEP 14040-903
tra n sfe rre d in m ix e d c u ltu re s a t h ig h fre q u e n c ie s a fte r
a n I8 -h o u r in c u b a tio n p e rio d . G e n e s fo r re sista n c e in
c h ro m o so m e s m a y a lso b e tra n sfe rre d , a lth o u g h a t
sm a lle r fre q u e n c ie s6 . 7 .
In 1 9 8 0 , L A C E Y p ro p o se d a n a lte rn a te , m o re
e ffic ie n t m e c h a n ism o f g e n e tic tra n sfe r, re fe rre d to a s
p h a g e m e d ia te d c o n ju g a tio n b e c a u se o f th e n e c e ssity
o f a p ro p h a g e in th e d o n o r a s w e ll a s th e re c ip ie n t
stra in s, a n d re q u irin g C a + + a n d a n in c re a se in b a c te ria l
p o p u la tio n d e n sity5 . T h is m e c h a n ism d iffe rs fro m tra n sd u c tio n sin c e th e d o n o r d o e s n o t n e e d to b e
ly so g e n ic , a n d th e tra n sfe r is n o t m a d e fro m a p h a g e
d o n o r a fte r ly sis. L ittle sp o n ta n e o u s p h a g e a c tiv ity is
fo u n d in c u ltu re m e d ia , a n d th e filtra te s d o n o t
n e c e ssa rily c o n ta in a n y tra n sd u c tiv e p a rtic le s. T h e
n a tu re o f th is n o n -tra n sd u c tio n m e c h a n ism is su p p o rte d
b y th e d isc o v e ry th a t th e tra n sfe r o c c u rre d b e tw e e n
d o n o r a n d re c ip i.e n t c e lls w h e n b o th su ffe re d a
ly so g e n iz a tio n b y a m u ta n t p h a g e in c a p a b le o f fo rm in g
S a o P a u lo M e d ic a l J o u rn a l/R P M 1 1 4 (1 ): 1 0 6 8 -1 0 7 2 , 1 9 9 6 D A R IN I, A .L .e . - A G e n e tic s tu d y o f aStaphylococus aureus
p h a g i c h e a d s . A l t h o u g h t h e e x a c t n a t u r e o f p r o p h a g e
i n v o l v e m e n t i s u n k n o w n , L A C E Y s t a t e d t h a t
b a c t e r i o p h a g e s c a n b e c o n s i d e r e d a s a n " i n s t r u m e n t "
i n t h e a l t e r a t i o n o f t h e c e l l 's s u r f a c e , i n c r e a s i n g c e l l
g r o u p i n g a n d a l l o w i n g t h e p a s s a g e o f p l a s m i d D N A
d i r e c t l y f r o m t h e d o n o r t o t h e r e c i p i e n t s . 6 .
I n e x p e r i m e n t s w i t h p h e n o t y p e i n s t a b i l i t y , t h e r e
a r e m e t h o d s w h i c h d e s c r i b e s p o n t a n e o u s o r i n d u c e d
p l a s m i d c u r e . W h e n t h e c u l t u r e i s s t o r e d a t r o o m
t e m p e r a t u r e f o r s o m e m o n t h s , a p l a s m i d c e l l - p o s i t i v e
p o p u l a t i o n c a n s p o n t a n e o u s l y r e v e r t t o p l a s m i d
-n e g a t i v e w h e n t h e s e l e c t i v e a g e n t ( i .e . a n t i b i o t i c ) i s
r e m o v e d f r o m t h e m e d i u m . W h i l e u s i n g i n c u b a t i o n
t e m p e r a t u r e s t h a t a r e d i f f e r e n t f r o m t h o s e t h a t a r e i d e a l
f o r b a c t e r i a l g r o w t h , a p l a s m i d c u r e m a y o c c u r . T h e
r e c o m m e n d e d t e m p e r a t u r e i s g e n e r a l l y 5 - 1 O ° C a b o v e
w h a t i s r o u t i n e l y u s e d , w h i c h s t i l l p e r m i t s b a c t e r i a l
g r o w t h . P l a s m i d c u r e m a y a l s o o c c u r w h i l e u s i n g
c u r a t i v e a g e n t s s u c h a s e t h i d i u m b r o m i d e .
T h e p u r p o s e o f t h i s s t ~ ? y i s t o d e t e r m i n e t h e
r e l a t i o n b e t w e e n t h e p r e s e n 'c e o f p l a s m i d s i n a
Staphylococcus
aureus
s t r a i n a n d i t s r e s i s t a n c e t ot e t r a c y c l i n e . I t a l s o d e m o n s t r a t e s t h e i m p o r t a n c e o f
s t u d y i n g p l a s m i d g e n e t r a n s f e r m e c h a n i s m s i n S .
aureus
s t r a i n s .
M A T E R IA L A N D M E T H O D S
D o n o r a n d r e c i p i e n t s t r a i n s w e r e i n c u b a t e d
s e p 1 a r a t e l y i n 2 m l L B m e d i u m a t 3 7 ° C . A f t e r 1 8 - 2 0 h o u r s ,
2 0 0 m l o f e a c h c u l t u r e w e r e t r a n s f e r r e d t o a 5 0 m l
E r l e n m e y e r w i t h 2 m l o f C a C I2 0 .0 1 M a d d e d t o 2 0 m l o f
L B m e d i u m . T h i s c u l t u r e w a s i n c u b a t e d a t 3 7 ° C u n d e r
c o n s t a n t a g i t a t i o n o f 1 0 0 r p m f o r 1 8 - 2 0 h o u r s . A f t e r t h i s ,
1 0 0 m l s a m p l e s w e r e p l a c e d i n 1 2 9 0 n m P e t r i d i s h e s w i t h
M u e l l e r - H i n t o n a g a r c o n t a i n i n g d r u g s c a p a b l e o f s e l e c t i n g
t r a n s c o n j u g a n t s b y a c t i n g o n d o n o r p l a s m i d s . A c o n t r o l
w a s u s e d d u r i n g e v e r y s t e p o f t h e p r o c e d u r e .
T h e s t u d y f o r p l a s m i d e l i m i n a t i o n w a s m a d e
f o l l o w i n g t h e B o u a n c h a u d e t a l . m e t h o d u s i n g S .
alireliS
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR s t r a i n s3• C u l t u r e i n c u b a t i o n w a s c o n d u c t e d
w i t h e t h i d i u m b r o m i d e . T h e i d e a l c o n c e n t r a t i o n f o r t h i s
c u r a t i v e a g e n t i s t h e h i g h e s t c o n c e n t r a t i o n p o s s i b l e w h i c h
d o e s n o t i n h i b i t b a c t e r i a l g r o w t h .
C u l t u r e s w e r e p l a c e d i n a n u t r i e n t m e d i u m w i t h
e t h i d i u m b r o m i d e i n p r e v i o u s l y e s t a b l i s h e d
c o n c e n t r a t i o n s o f 3 a n d 4 m g o f e t h i d i u m b r o m i d e p e r
m i l l i l i t e r o f c u l t u r e m e d i u m . A c o n t r o l c u l t u r e w a s
a l w a y s i n c l u d e d .
I n c u b a t i o n w a s a t 3 7 l I C f o r 1 8 h o u r s . A f t e r w a r d s ,
t h e c u l t u r e s w e r e d i l u t e d ( I O - s t i m e s f o r c u l t u r e c o n t r o l s
a n d 1 0 -2
f o r t h e o t h e r s ) , s e e d e d i n M u e l l e r - H i n t o n a g a r
a n d i n c u b a t e d a g a i n u n d e r t h e s a m e s c o n d i t i o n s a s a b o v e .
T h e c o l o n i e s w e r e t h e n t r a n s f e r r e d t o o t h e r d i s h e s
w i t h M u e l l e r - H i n t o n m e d i u m c o n t a i n i n g 5 m g / m l o f
t e t r a c y c l i n e p e r c u l t u r e m e d i u m . C u r e r e s u l t s w e r e
g i v e n i n p e r c e n t a g e s .
R E S U L T S
R e s i s t a n c e l e v e l s o f t h e s t u d i e d s t r a i n s t o
t e t r a c y c l i n e a n d s t r e p t o m y c i n a r e l i s t e d i n T a b l e I .
* M IC - m a xim u m in h ib ito ry co n ce n tra tio n (Ilg o f d ru g p e r m l o f cu ltu re m e d iu m ).
** D a ta p ro vid e d b y L A C E Y (1 9 8 0 ). S in d ica te s su sp e ctib ility to stre p to m ycin .
T a b le 1
R e s is ta n c e le v e ls o f S .
aureus
1 0 3 0 (5 5 ) S to te tra c y c lin e a n d s tre p to m y c inS tra in s C IM (Ilg /m l)*
T e t. S m
S **
1 0 0
32
0 .1 2 5 S .
aureus
1 0 3 0 (5 5 ) T e tR S .aureus
1 0 3 0 (5 5 ) SF o r p l a s m i d t r a n s f e r t h e m e t h o d e m p l o y e d h e r e
w a s c o n j u g a t i o n m e d i a t e d b y p h a g i o r " m i x e d c u l t u r e ,"
d e s c r i b e d b y L A C E y6
. T h i s s t u d y w a s c a r r i e d o u t w i t h
d o n o r a n d r e c i p i e n t s t r a i n s o f S .
aureus.
T h e s e s t r a i n sw e r e b u i l t b y L A C E Y f r o m S .
aureus
1 0 3 0 , w h i c h i sl y s o g e n i c a n d s u s c e p t i b l e t o a l l a n t i b i o t i c s . F o r t h e
c o n s t r u c t i o n o f t h e d o n o r s t r a i n , p l a s m i d g e n e s w e r e
t r a n s d u c e d t o t h e w i l d s t r a i n S .
aureus
1 0 3 0 , w h i c h t h e nr e c e i v e d a n e w d e n o m i n a t i o n : S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR S . T h e r e c i p i e n t s t r a i n , S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) S , w h i c hi s a l s o l y s o g e n i c f o r P h a g e 5 5 , s h o w s c h r o m o s o m a l
r e s i s t a n c e t o s t r e p t o m y c i n ( S ) .
F o r t h e d e v e l o p m e n t o f t h i s m e t h o d , i t w a s
n e c e s s a r y t o d e t e r m i n e t h e l e v e l o f r e s i s t a n c e o f t h e
d o n o r s t r a i n (S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR) t o t e t r a c y c l i n e
i n o r d e r t o p r e p a r e t h e c u l t u r e m e d i a w i t h a d e q u a t e
c o n c e n t r a t i o n s o f t h i s d r u g . F o r t h e r e c i p i e n t s t r a i n
(S.
au reus
I 0 3 0 ( 5 5 )S ) , t h e m i n i m u m i n h i b i t 0r yc o n c e n t r a t i o n f o r s t r e p t o m y c i n w a s o b t a i n e d b y
L A C E Y s .
D A R IN I, A .L .C . - A g e n e tic stu d y o f a Staphylococus aureus
p la sm id in vo lvin g cu re a n d tra n sfe re n ce
1 0 7 0
P la sm id tra n sfe r fro m d o n o rs to re c i p ie n t stra in s
w a s a lso c o n firm e d a fte r d e te rm in in g th e re sista n c e
F ig u r e 1 - E le c tr o p h o r o g r a m s o f p la s m id D N A o n S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) s tr a in 0 .8 % a g a r o s e g e l.
1 - S tu d y o f p la s m id tr a n s fe r : A - S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR• B-S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) S . C - S .aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) S T e tR•1 1 - S tu d y o f p la s m id c u r e : 0 - S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR - Cg • E
-S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR• F - S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) S T e tR - C '2(- ) (- ) (- ) (- ) ( -) (- ) ( + ) (- ) (- ) ( + ) (- ) (- ) (- ) (-) (- ) (-) (+ ) ( + ) ( + ) ( + ) ( + ) ( + ) P r e s e n c e o f
p la s m id s * *
4 4 4 4 4 4
32
4 432
4 4 4 4 4 432
32
32
32
32
3 2T e tr a c y c lin e r e s is ta n c e le v e ls
S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR
- C
l
- C2 - C3
- C 4
- C5
- C6 - C7 - Ca - Cg
- C l0 - C l l - C 1 2 - C 1 3 - C 1 4 - C 1 5 - C 1 6 - C 1* - C 2* - C 3*
- C /
- C5*
- C /
C * c o n tr o l in c u b a tio n s tr a in s * * : ( - ) a b s e n c e o f p la s m id
( + ) p r e s e n c e o f p la s m id T a b le 2
R e s is ta n c e le v e l to te tr a c y lc in e in s u p p o s e d ly c u r e d S .
aureus
1 0 3 0 ( 5 5 ) T e tR s tr a in sle v e l o f S .
aureus
1 0 3 0 (5 5 ) S - T e tR• F o r th is re c ip ie n t
stra in th a t re c e iv e d th e p la sm id (tra n sc o n ju g a n t), th e
M IC fo r te tra c y c lin e w a s 3 2 m g /m l. A fte r c o m p a rin g
th e se re su lt,s to th o se sh o w n in T a b le I ,th e sa m e le v e l o f re sista n c e o f th e d o n o r stra i n w a s o b se rv e d a fte r
tra n sfe r.
T h ro u g h p la sm id e x tra c tio n a n d a n a ly sis in
a g a ro se g e l, th e p la sm id p ro file s o f d o n o r, re c ip ie n t
a n d tra n sc o n ju g a n t stra in s c a n b e se e n in F ig u re 1 .
F o r a p la sm id c u re , th e n e c e ssa ry e th id iu m
b ro m id e c o n c e n tra tio n in th e c u ltu re m e d iu m is th e
h ig h e st c o n c e n tra tio n w h ic h d o e s n o t in h ib it b a c te ria l
g ro w th . In th is stu d y , e th id iu m b ro m id e a t 4 m g p e r
m illilite r o f m e d iu m c u ltu re sh o w e d th e b e st re su lts.
T h e re sista n c e le v e l to te tra c y c lin e a n d th e
p re se n c e o f p la sm id s in su p p o se d ly c u re d stra in s a re
II
=
3 .5
X1 0 -
6F
D E
B C
A
F re q . o f tra n sfe r = 4 6
1 .3 x 1 07
A c c o rd in g to T a b le 1 , se le c tiv e m e d iu m s u se d to
se le c t re c ip ie n t a n d d o n o r c e lls c o n ta in e d , re sp e c tiv e ly ,
1 0 0 m g /m l o f S m a n d 2 0 m g o f te tra c y c lin e p e r m illilite r
o f c u ltu re m e d iu m . F o r tra n sc o n ju g a n t c e lls
(S.
aureus
1 0 3 0 (5 5 ) S - T e tR
), th e se le c tiv e m e d iu m c o n ta in e d
b o th d ru g s a t th e a b o v e -m e n tio n e d c o n c e n tra tio n s. In
th e c o n tro ls fo r m u ta n t d e te c tio n , n o iso la te d re c ip ie n t
o r d o n o r stra in re sista n t to te tra c y c lin e w a s iso la te d .
T h e C F U (c o lo n y fo rm in g u n its) c o u n t o f d o n o r
a n d re c ip ie n t stra in s w a s c o n d u c te d tw ic e a t th re e
d iffe re n t d ilu tio n s, a n d w a s d e te rm in e d fro m th e m e a n
n u m b e r o f c o lo n ie s a t e a c h d ilu tio n a fte r P e tri d ish
in c u b a tio n a t 3 7 ° C fo r 2 4 h o u rs. T h e to ta l n u m b e r o f
c o lo n ie s in th is e x p e rim e n t w a s 1 .3 x 1 07 fo r d o n o rs
a n d 3 .4 x lO ll fo r re c ip ie n ts.
T h e re w e re 4 6 c o lo n ie s o f tra n sc o n ju g a n ts
(S.
aureus
1 0 3 0 (5 5 ) S - T e tR), d e te rm in e d b y m e a n g ro w thin 1 2 P e tri d ish e s c o n ta in in g a n tib io tic s (S m 1 0 0 m g /
m l a n d T e t 2 0 m g /m l), a fte r 2 4 h o u rs o f in c u b a tio n .
A c c o rd in g to L A C E Y , th e fre q u e n c y o f p la sm id
tra n sfe r is c a lc u la te d b y :
F re q . o f tra n sfe r = n u m b e r o f tra n sc o n ju g a n ts
n u m b e r o f d o n o r c o lo n ie s
s a o P a u lo M e d ic a l J o u r n a l/R P M 1 1 4 ( 1 ) : 1 0 6 8 - 1 0 7 2 , 1 9 9 6 D A R IN I, A L e . - AG e n e tic s tu d y o f aStaphylococus aureus
sh o w n
in T a b le
2 , w h ic h
lists
1 6 stra in s
th a t
w e re
su p p o se d ly
c u re d
b y e th id iu m
b ro m id e .
T h e re
w e re
o n ly tw o (5 .
aureus
1 0 3 0 (5 5 )S - T e t
RC
7a n d C
lO )w h ic h
d id
n o t
lo se
th e ir
re sista n c e
to te tra c y c lin e
a n d
th e
p la sm id s
w ith th e g e n e s
re sp o n sib le
fo r th is re sista n c e .
A ll
six o f th e c o n tro l
stra in s
w h ic h
w e re
su p p o se d ly
c u re d
lo st n e ith e r
th e ir
re sista n c e
n o r th e ir
p la sm id s.
T h e lo ss o f th e p la sm id
o f th e stu d ie d
stra in ,
a fte r
tre a tm e n t
w ith th e c u ra tiv e
a g e n t, c a n b e n o te d in F ig u re
I
(II).A s a re su lt o f th e a n a ly sis,
th e p e rc e n ta g e
o f c u re
o f th e p la sm id
o f th e
5 .
aureliS
1 0 3 0 (5 5 )T e t
Rstra in
w a s c a lc u la te d
to b e
3 .5p e rc e n t.
DISCUSSION
E th id iu m
b ro m id e
b in d s
to
D N A ,
c a u sin g
a n
a lte ra tio n
o f m o le c u la r
c o n fo rm a tio n
w h ic h
a ffe c ts
th e
sy n th e sis
o f n u c le ic
a c id s
a n d le a d s
to th e e lim in a tio n
o f p la sm id s.
T h e re su lts
sh o w th e lo ss o f th e p h e n o ty p ic
c h a ra c te ristic
o f te tra c y c lin e
re sista n c e
a n d o f a b a n d
re la te d
to
th e
p la sm id
w h ic h
is re sp o n sib le
fo r
th is
p h e n o ty p e .
T h e
stu d y
o n
re sista n c e
e lim in a tio n
a n d
p la sm id
c u re
sh o w e d
th a t
th e
re sista n c e
m a rk e r
w a s
lo st in h ig h
fre q u e n c ie s.
P la sm id
c u re
th ro u g h
a n y o f th e a fo re m e n tio n e d
m e th o d s
g re a tly
a id s
e p id e m io lo g ic a l
stu d ie s
o n
b a c te ria l
h o sp ita l
in fe c tio n s,
a n d
is a lso
im p o rta n t
to
th e stu d y
o f a n tib io tic
re sista n c e
tra n sfe r
m e c h a n ism s
in a h o sp ita l
e n v iro n m e n t
2•T h e re
d o e s
n o t
se e m
to b e a n a g e n t
w h ic h
c a n
c u re
e v e ry
p la sm id
in d iffe re n t
b a c te ria .
T h e re fo re ,
in th e se
c a se s,
se v e ra l
m e th o d s
sh o u ld
b e a sso c ia te d .
T h e
in c a p a c ity
to
d e m o n stra te
th e
in sta b ility
o f
a
m a rk e r,
w h e th e r
in a n in d u c e d
o r a sp o n ta n e o u s
fo rm ,
d o e s
n o t
ru le
o u t
p la sm id
in h e rita n c e
in a b a c te ria l
p o p u la tio n
x.S ta p h y lo c o c c i
p la sm id s
th a t p a rtic ip a te
in a D N a se
-re sista n t
tra n sfe r
sy ste m
w h ic h
re q u ire s
c e llu la r
c o n ta c t
a re u su a lly
tra n sfe rre d
in h ig h
fre q u e n c ie s.
T h is
w a s
c o n firm e d
in o u r e x p e rim e n t
b y a fre q u e n c y
o f 1 0 -
6•T h e
sta n d a rd iz a tio n
o f th e se
e x p e rim e n ts
is o f
fu n d a m e n ta l
im p o rta n c e
fo r th e
stu d y
o f c o n ju g a ti
v e
p la sm id s,
a n d th e
m e c h a n ism
o f c o n ju g a tiv e
tra n sfe r
in vivo
m a y
b e c o n d u c te d
in so lid
o r
liq u id
m e d ia
c u ltu re s
c a p a b le
o f su p p o rtin g
th e tra n sfe r.
T h is
stu d y
h a s
g re a t
im p o rta n c e
fo r
e p id e m io lo g ic a l
stu d ie s
o f
h o sp ita l
in fe c tio n s,
b e c a u se
it
m a y
e n lig h te n
re se a rc h e rs
a s to p o ssib le
tra n sfe r
m e c h a n ism s
th a t m a y
o c c u r
in vivo
o n d ry (c lo th in g ,
su rg ic a l
m a te ria l)
o r o n
h u m id
su rfa c e s,
su c h a s v a p o riz e rs,
in c u b a to rs,
d ia ly sis
e q u ip m e n t,
a n tise p tic s,
o r in b o d y
flu id s.
RESUMO
A tra n s fe re n c ia e a e llm in a < ;:a o d e re s ls te n c ia a d ro g a s , e m a lta s fre q u e n c ia s , p o d e m e v id e n c ia r h e ra n < ;:ae x tra c ro m o s s o m ic a d e d e te rm ln a n te s g e n e tic o s . E s te tra b a lh o m o s tra a c u ra e tra n s fe re n c ia d e re s is te n c ia
a
te tra c ic lin a e d e u m p la s m fd io p e q u e n o , n a lin h a g e m S .aureus
1 0 3 0 (5 5 )T e tR• S a o v a ria s a s m e to d o lo g ia s d is p o n iv e is p a ra a e lim in a < ;:a o d e p la s m id io s .E m p re g o u -s e a te c n lc a d o a g e n te c u ra g e n ic o b ro m e to d e e tid io , q u e s e in te rc a la n a fita d e D N A , in ib in d o 0 D N A p o lim e ra s e .
o
re s u lta d o fo i p e rd a d o p la s m id io e d a re s is te n c iaa
te tra c ic lin a e m a lta fre q u e n c ia . 0 e x p e rim e n to d e tra n s fe re n c ia fo i re a liz a d o e m m e lO d e c u ltu ra Iiq u id o , e a fre q u e n c ia fo i d a o rd e m d e 1 0 .G.E s s e s e s tu d o s te m g ra n d e im p o rtE ln c ia e m e s tu d o s
d e in fe c < ;:6 e s , d a n d o a o s p e s q u is a d o re s e c lin ic o s e s c la re c im e n to d e p o s s iv e ls m e c a n ls m o s d e a q u is i< ;:a o d e re s ls te n c la a a n tib io tlc o s q u e p o d e m o c o rre r ta m b e m in vivo, p rin c ip a l m e n te n o a m b ie n te h o s p ita la r.
D A R IN I, A .L .C . - A g e n e tic s tu d y o f a Staphylococus aureus
p la s m id in v o lv in g c u re a n d tra n s fe re n c e
1072
REFERENCES
1 . B a c k N A , L in n e m a n n C C , P fa lle r M A , S ta n e c k lL ,
M o rth la n d , V . R e c u rre n t e p id e m ic s c a u s e d b y a s in g le
s tra in o f e ritro m y c in -re s is te n t
Staphylococcus
aureus:
T h e im p o rta n c e o f m o le c u la r e p id e m io lo g y . lA M A
1 9 9 3 ;2 7 0 ( 1 1 ) : 1 3 2 9 - 3 3 .
2 . B a rg N L . E n v iro n m e n ta l c o n ta m in a tio n w ith
Staphylococcus
aureus
a n d o u tb re a k s : th e c a u s e o r th ee ffe c t? In fe c t C o n tro l H o s p E p id e m io l 1 9 9 3 ; 1 4 :3 7 6 - 8 .
3 . B o u a n c h n a u d D H , S c a v iz z i M R , C h a b b e rt Y A .
E lim in a tio n b y e th id iu m b ro m id e o f a n tib io tic re s is ta n c e
in e n te ro b a c te ria a n d s ta p h y lo c o c c i. 1 G e n M ic ro b io l
1 9 6 9 ;5 4 :4 1 7 - 2 5 .
4 . B o y c e 1 M . M e th ic illin -re s is ta n c e
Staphylococcus
at/reus
in h o s p ita l a n d lo n g -te rm s c a re fa c ilitie s :m ic ro b io lo g y , e p id e m io lo g y a n d p re v e n tiv e m e a s u re s .
In f C o n t H o s p E p id e m io 1 9 9 2 ;3 :7 2 5 - 3 7 .
5 . L a c e y R W . E v id e n c e fo r tw o m e c h a n is m s o f p la s m id
tra n s fe r in m ix e d c u ltu re s o f
Staphylococcus
{lureus
" inv itro ." 1 G e n M ic ro b io l 1 9 8 0 ; 1 1 9 :4 2 3 - 3 5 .
6 . L a c e y R W . T ra n s fe r o f c h ro m o s o m a l g e n e s b e tw e e n
S ta p h y lo c o c c i in m ix e d c u ltu re s . 1 G e n M ic ro b io l
1 9 7 2 ;7 1 :3 9 9 - 4 0 I .
7 . L y o n R B , S k u rra y R . A n tim ic ro b ia l re s is ta n c e o f
Staphylococcus
auret/s:
g e n e tic b a s is . M ic ro b io l R e v1 9 8 7 ;5 1 ( 1 ) :8 8 - 1 3 4 .
8 . S ta n is ic h V A . Id e n tific a tio n a n d a n a ly s is o f p la s m id s
a t a g e n e tic le v e l. In : G rin s te d 1 , B e n n e tt P M , e d s .
M e th o d s in m ic ro b io lo g y , 2 e d . L o n d o n :A c a d e m ic
P re s s , 1 9 8 8 : 1 1 - 4 8 .
