Como preparar
• Meios comerciais devem ser hidratados
• Primeiramente devem ser pesados
• Tansferir para um frasco
• Hidratar em pequena quantidade e misturar
• Depois deve-se acrescentar o restante da água
• Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos não precisam estar esterilizados previamente
• Esterelizar em autoclave por 15 minutos e à temperatura de 121ºC
• Distribuir o meio após a autoclavação - tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias estéreis
• Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor
Classificação dos meios
• Meios para transporte e conservação
• Meios para cultivo e isolamento
Transporte e conservação
• Cary Blair
• Salina Tamponada
• Meio Stuart
Cary Blair
• Microrganismos intestinais patogênicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio.
• ƒA carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação dos microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles. • Utilizado para transporte de material fecal e
Salina Tamponada
• Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável.
• Usado como meio de transporte de amostras biológicas.
• Contém NaCl, fosfato dipotássico anidro, Glicerina bidestilada e água destilada.
Meio Stuart
• A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles. • Usado para transporte de diversos materiais e
consequente conservação dos microrganismos.
• ƒConservação de microorganismos patogênicos como: Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp. entre outros.
Agar Nutriente
• É um meio relativamente simples, de fácil preparação e barato, muito usado nos procedimentos do laboratório de Microbiologia.
• Usos:
• ƒAnálise de água, alimentos e leite
• Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a exames bacteriológicos
• Isolamento de organismos para culturas puras.
• Observar esporulação de espécies de bacilos Gram positivos.
• O uso mais frequente - conservação de culturas em temperatura ambiente, para os laboratórios que não dispõem de crioconservação (freezer à - 70ºC).
Cultivo e Isolamento
• Ágar TSA • Ágar Chocolate • Ágar MacConkey • Ágar Sangue • Ágar CLED • Ágar Salmonella-Shigella • Ágar Manitol (MSA)• Ágar EMB
• Ágar Mycosel • Ágar Sabouraud
• Ágar Verde Brilhante (BGA)
• Caldo Tioglicolato com indicador • Caldo Tioglicolato sem indicador
• Caldo BHI
• Caldo Selenito
• Caldo Tetrationato • Löwenstein Jensen
• Meio bifásico: Löwenstein e Middlebrook,
Tryptic Soy Agar (TSA)
• Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar
• Também chamado de CASO Agar (Casein-peptone soymeal-peptone agar)
• É recomendado para o cultivo de bactérias não fastidiosas – uso geral.
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus
Caldo BHI
• Brain Heart Infusion – meio enriquecido
• É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose.
• Fornece fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas.
• Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos.
• Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos
• Realização de teste de coagulase em tubo • Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C • Teste de motilidade em lâmina.
Agar Sangue
• Meio enriquecido e diferencial
• Compra-se a base comercial, depois de autoclavada e resfriada, adiciona-se sangue.
• A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos.
• Diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.
Bacillus cereus -hemolítico Estreptococcus -hemolítico Enterococcus faecalis Não hemolítico ()
Agar Chocolate
• Meio de cultura enriquecido
• À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes.
• Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.:
Neisseria, Haemophilus)
• Alguns organismos que não crescem em meios comuns são capazes de crescer neste meio
Neisseria gonorrhoeae
Staphylococcus
Agar Thayer-Martin
• Thayer-Martin Chocolate é um meio rico seletivo
• É superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria
meningitidis
• Contém em sua fórmula antibióticos que inibem o crescimento de Neisserias saprófitas e outras bactérias, evitando contaminações.
Agar Salmonella-Shigella (SS)
• Seletivo e diferencial
• Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram positivos.
• O meio possui lactose, que permite diferenciar bactérias lactose positivas e negativas
– Lactose positivas- produzem ácido que na presença do indicador vermelho - formação de colônias de cor rosa
– Lactose negativas- formam colônias transparentes. • ƒPermite a detecção de H2S - formação de colônias de
Agar MacConkey
• Seletivo e diferencial
• O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos.
• ƒ A concentração de sais de bile é relativamente baixa, por isso não é tão seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS.
• Usado para isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose.
Pseudomonas aeruginosa
Escherichia
Meio Hektoen
• É um meio seletivo e diferencial
• Utilizado para detectar a fermentação de lactose e produção de H2S
• Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactérias não-entéricas
• Fermentados de lactose - amarelo ou salmão • Não fermentadores - sem cor
Escherichia coli Salmonella enteridis
Agar Sal Manitol
• Meio seletivo e diferencial
• Utilizado para selecionar Staphylococci, que crescem em altas concentrações de sal
• Diferencia Staphylococcus aureus de outros Staphylococci
• Após o crescimento, Staphylococcus aureus é amarelo (fermenta o manitol), outros Staphylococci são brancos
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus
Agar CLED
• Cystine Lactose Eletrolyte Deficient – Seletivo e diferencial
• A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus.
• Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina.
• Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.
• ƒColônias lactose positivas: cor amarela/ negativas: cor azul.
Staphylococcus aureus
Proteus
Agar verde brilhante (BGA)
• É um meio altamente seletivo, usado para o isolamento de outras salmonelas que não a S. Typhi, existentes nas fezes e em outros materiais.
• A presença de extrato de levedura e duas peptonas fornecem os nutrientes
• A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de fenol, fornecem um sistema de diferenciação de fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).
• Salmonelas não produzem ácido a partir destes açúcares.
• O verde brilhante é o agente seletivo que inibe a flora de acompanhamento.
Escherichia coli
Salmonella sp.
Agar Eosina Azul de Metileno
• Agar EMB é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo
• Utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outros bastonetes gram-negativos).
• Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactérias gram-positivas num determinado grau - diferenciar os fermentadores
• Coliformes produzem colónias pretas-azuladas
• Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente, não fermentam lactose
• Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à rápida fermentação da lactose
Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella enteridis
Meio Löwenstein Jensen
• A base do meio é constituída por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactérias
• O crescimento é satisfatório para o teste de niacina (que é positivo para Mycobacterium tuberculosis)
• Utilizado para isolamento primário das micobactérias
• Crescimento bom a excelente (colônias amarelas) -
Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium
Mycobacterium tuberculosis
Agar Mycosel
• A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para selecionar dermatófitos.
• O cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias e alguns fungos filamentosos.
• Usado para isolamento de fungos patogênicos, principalmente dermatófitos, a partir de material de investigação contaminado.
• Crescimento bom a excelente: Trichophyton verrucosum, Candida albicans
• Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candida
Agar Sabouraud
• Meio com nutrientes que favorece o crescimento
de diversos fungos leveduriformes e
filamentosos.
• Cultivo e crescimento de espécies de Candidas
e fungos filamentosos, particularmente
associados a infecções superficiais.
• Caracterização macroscópica do fungo
filamentoso (colônia gigante).
Candida albicans Sporothrix
schenckii
Microsporum canis
Meios para identificação
• Ágar TSI • CaldoTSB • Meio SIM
• Ágar Citrato Simmons • Ágar Fenilalanina
• Ágar base uréia • Caldo Triptona • Caldo Nitrato
• Caldo Malonato • Ágar Bílis-Esculina • Ágar Sangue
• Caldo base de Moeller
• Ágar Dnase • Ágar Esculina
• CTA – Cystine Tryticase Agar • Meio base para oxidação e
fermentação - OF
• Base de nitrogênio para leveduras