Estudos bioquímicos e fisiológicos da diferenciação de estruturas de infecção da ferrugem do café (Hemileia vastatrix Berk e Br)

Texto

(1)ESTUDO::;. BIODUIMICOS. F. FISIOLOGICOS. DA. D I FFECNCT f-'<C1�D. (Hemileia vastatrix Berk & Br.>. ARY CORRFA JUNIOR Biô1oqo. Orientadora: Profa. Dra.. Walkv�i� D.. C. Moraes. Di •::-�:::-Prtr.:1i;::�\o .::.,pi•-e!õ,-E�nt;:�dr::t /1 E�=,.c.o} e. ElLtr:E�í-�·:i. CJt' ctr:: (.�q�---i CLt} t:.t3:,.·,�z ''L.Lti �-:· etc;; e} i::\ tJ r··, i \/ r:· �,.. �::. i cl .'::·t c:t (·? d t::· -�:J l� Ct () Lt E' i ti" i.::i :-:'. '' � F'at.tl<:):1 f:3t�"i:i-·r:·; c)1:::r·!_·•t:�r)ç:·�(cr t±cs. t·1tt_ 1!·::; cJc-:< c:k Cor; centraç�o: Microbiologia Aqricol2 1. p I R A. e. I. e. A B A. Estado de S�o Paulo - Brasil ,Junho ..... 1990.

(2) Ficha catalográfica preparada pela Seção de Livros da Divisão de Biblioteca e Documentação - PCAP/USP C824e. Corrêa Junior, Ary Estudos bioqufmicos e fisiol�gicos da diferencia ção de estruturas de infecção da ferrugem do cafe (Hemileia vastatrix Berk & Br.). Piracicaba, L990, 146p. Diss. (Mestre) - ESALQ Bibliografia. 1. Café - Doença 2. Ferrugem do café - Bioqufmi ca 3. Ferrugem do café - Fisiologia I. Escola Supe rior de Agricultura Luiz de Queiroz, �iracicaba. CDD. 633,73.

(3) E�=;rt..lD[I�;. E<IDOUIMICU'.:J. E. F1�:.\IULfJf3TCO'.::;. Dh. DE ESTRUTURAS DE INFECÇAO DA FERRUGEM -00 CAFF. Ary Corr@� Junior. Aprovado em 02/08/90. Comissào Julgadora. Prof. Dr . Avelino Rodrigues de Oliveira ·- f. UNICtJ'lF'. F'l'·o+. Dr- .. D0.ú-Ty f'\iir-tin'.::, cL�\ 1:,tlvi:=<. I n º-'· t .. F'ro+é.'\,. B :i u l . / '.:; . P.. Dr·c,1. �'Ji:,1lk·yTic� bueno dc- CcHliiJt'·qo i"lur,:·1f:•�::. Or- i f.�n t ê\d ur- ,':,.

(4) :i. i. Dc�d í.. t.

(5) úi. A G R A D F r. I M F N TOS. o. c" orienta~ào. e auxilio durante o perlodo deste trabalho.. Avelino Rodrigues de Oliveira. de. .-,. t:1 f 'leo . ,._.lf~n·.. da. UNICAMP. pelos. moment.os. De~;envoJ. vi rncr-.to.

(6) 1 ".'. L. H;T{~. DE F 1 FiLJHPI~; ••••• " ••••. •. ". •. ... •. ". ... ... •. •. •. •. •. •. n. ... ... •. ". •. •. ... •. ,.. •. n. •.".. 1 :I.. n. •. ... •. •. •. •. ". ". •. ". ... ;'. 1 :1.. ... 11". ". ~. •. ... ". .... ... .... ". ". LISTA DE TABELAS .. ~: E!3 U !"! O.. .. • • • • • • " • • • • .. • • " • • • .. • • • " • " " " • .. • • .. • . •. SU1'H"·IAF:Y •...••.••••.••.. " ..... ". "'. ". >: ] \/. 1... I t·,.lTF:ClDUÇPrO ................ " . " .'" ... " ... " . " ..... " ,. " • " ........... ,. 1. 2... PE\)J. :2. 1.. :::;f.~D. DF L I TFFf.YTUW·i. ". n. ......... ". ............ ". ,. •. Biologia do fungo H,. 2 .. 2. Desenvolvimento em fungos ,causadores de ferrugens em vegetais ... 17. MATERIAL E METODDS •...•... .::.. 1.. Plé.',ntd~:.. ut:i.li::·:~Ddi=.lr::,. ............ " .. " . . . . " ,....... " .. 3.2. Coleta e estocagem de uredinosporos v a 5. t. at v'" i. x' .. ,. " " " .. " " .. " • .. " ..... " ........ , " .... 3.3. Germinaçào e djferenciaçào. H.. de c. ..... de apressórios em. ':'. FI. .. ...., \',. ... ". ,.. 't. ". ... ".:' ••}'. ". ... .... ...... .... lO. li. 3.4. Germinaçào e forma~ào dF! infecçào em urediniosporos de H. vastatrix sobre êgua~ folhas destacadas de cafeeiro cv . t'1 L\ r-i d ('I l"·.! Cf \,/ C) ~ ffi r? ri r Lt ~r' ~::'t i", ':::t :::~ eJ 1::..::' p Cf 1 i C:'~~" -L:i t'" S,PiTi j" <'.'tnh UI'" c:l cC; F! Int?mbl'" arE~ ~,; e!c:' C cl ód:i.. E·:' r"f C) .. C: C \. C: Cri'!. O. n\. 61eo de parafina . . . . .. .... 3.5. Efeito de vapores de compostos volêteis da ç}. t:·:; r rn 1. r i ·d ~~ à c:. H .:),,'~'.. 11'. {-'as t.at:r i ) (. f:;n~'il:i~::.f.·:·:·. dos. p. d 3.. t?! ... li. ". +f.~:· t· .. E! r ". ... 11. bic!quiífricc:(. li. -t. ". di",!. n~o-qerminadDs. folha. c: i tf. C·". !õ,C:,ili. p. ". ~::'t ~;: (:j' () ". li". ..... do. c~ f:?:" "". li". fi. ". c! '.:::. ::~, ~:) (" "i.. ....... ft. ul'''pd:i.r!:i.u~::.por''O::::;. de H.. ~. ~. J. cafeeiro na. ~i f.) r ..... 1<. ... ". It. C) ~::. /li. fi. t"·:, :"\! .,. ". .... ". .{~.~~~. L!f.:·(·ininD·····. vastatrix ........ " . . . . .. ~5.

(7) v. ::'\.6.1 ... Uupbr' i:\ dF!. \.\1'" pd:i. ni o~,-.pOtr Ci,õ dE" t.1"'·:ix •••••••• " • • • • • • • • " •••••••. 'dos ém urediniosporos H.' ~:~. li. {" \. li. :~~;... [)t,t E~ r"f t.. t. :i. c. i cj .::{ (j f:?!. t ()'L ,':~'t 1 cJ F·!. O~:".·. 01:.< ~;:·L~!-· V ::i.C1D:::;.. qerminddo~. qprmjnadD~. Ç.fc.~5t:at.r:i.){" C~ ~"=' r". I'. ....... t.::! Cf i cf t" ê:l t. (":'rn. Lil'"'. n~o. e. " • . . .. " " " " .tu" I.:::.c,n; ç) ._.. Ct:::. pc! i n:i. c ;;:'. p c:."- o":. e n00 germinados de H. vas...""."""...""". :'.'; (). t a t v··:r. :;:'.. " , .. " , .. . .. • .. .. .. • .. • • • .." 3 .. 6,,4.. Carhoidratos de parede de truturas de infecc00. dI Oll.i'f;:;~~··;. C"~" cl\::, H. VêX'S"" corn. f 1 u cw e~õ·c er'd~. (-:,,:,..... " ............. " ...... " .......... " ...... ,. :::; 1. 3.6.5.. :~). u. tJ. II. 4.2.. r, \;'. E: ;.~ t. ~r' {:7\ ç: ~;: CJ cl f2 rn'" CJ t t:? j. l-t ê"t ~:. S C'i 1. E·:·: i c!:i r'f i C) ~~:.f.} c,r" C~ ~:::. '.J E~f" rfI i ri {::~ c~ C) ~~. d (7:! H.. t~.. t;:E::3ULTl:';DO~:;.. 4.1.. Extraç~o de proteinas de urediniosporos nàó germinados de H. vastatrix . . " ...... " ••••., " ..... " •• " " • " ........ " ...... Germinaç~o. e. Germindç~o. e diferenciaçào de. ... ". d E::. vas t •. ". ". LU"-. õ-. t::- -._.. t. r i )( . " .. ....... de apress6rios de .H. vastatrix ~obre água e na presença de CGmpostos exógEnos ....... .. i=tV-. H. t i f i c: í. i:?, i. de. r::; ............................. " ••. r:'E'v'min,,:,;;;:ijo e \/E\pOi'-f:>::o-. estruturas. N. -fDv"nL:i;;;:~iO. diniosporos de H. de .i'3--·j. ". de-:> r::ipl' .. ~:::':c".:;('-it·:i.D<.::. em Ul' ,:., ... na Drçsenca Ce. c(r"[c,r",,,~ ~_. J. "'l"lof'f3r"lol ~2feeiro. Ec-. ... 4 .. 4 ... Percentaoem de quebra de uredjniosnoros de H.. L! " ~::i... f) Lt ;::t n t i ct \'::'; c,l f-: cl f:: 1 i r:.{ 1. cf [,~, C~\ ::::<. niosporos e H V as t: r.i· t: r .i .">:."" K. Carboidratos niosporu r e vastatv~i. ... .~:; :... vastatrix. emanaoos por folhas de. 4.6". ~'~,{::\. diferenciaç~o. C) F:. 4.3.. <. ~:.. ~~. L, -::~. c: f" \/ ;;'; cJ () ~::' ,~.:: ~'I t ' ; f' . C~ t."~ 1 ...... estruturas de :i.nfecçào de C). I.. recuperados de estruturas de infec~bo. som~ticos. uredide H.. x .......................................... " " .... </1.

(8) 4.7.. C~rboidratos p~:t.t· utur·· ,,:i ":,. de parede de>. de. i n+ ec ,;: ~jo. evidenciados por lectinas 4. B". Pro üt.f:~:i n. Et 1:::.. truturas. r·· F:C uper· i3de:, ~:". de. in+0c~àD. ured~niosooros. +1 UCT E2'\,".cE~rYl pc; ... dE' ur·· c-e:! i. 0. H.· vastatrix. de·. fi. i. Ci~;;(). or· D~:::·. _ " ........ f·'. r::'~:. de H. vastatrix.......... .... .10?. 5. DISCUSSAD .... . . . . . . . . . . . . 6... C[)NCU.J~;ClES. ................. .. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ... . ..... !::?:!.

(9) \/:i i. LISTA DE FIGURAS. f:'er'cpr',tuEíl dE-' ur'Fd:i, n:i cr~::,pD!'''O'::: qF"r"rn:i ni,'lclu':c, df," vB:s'tat.r.i x .que d:í. +C'I'" F-:'r'íC i dt- ;'::,in '"'1':'1''' F"::':':;ÓI'- I De: após 1? h de j nCt.lb-::íç;:,~\O n'd Pi'-f':':ocnç,::"í di? di l' cr" F'f"! t F:':, c on c ETI t. (' ,::\G;: i::ié''''':; c:l c' :l. ..... n u:..., -:,(1"1 e:. l • • .. • ,i:,1. H.. ,~\. .. ( UF:) ::. .f.:'.,. (TG)~. (~3T). f::;,f.."pto. E'. tubo ~':ípr'e~:,,,:,tir"iC:1. dE:!. t F' i }~. +c.'; t' ro {:-\ c! c::, ~:. 5::- C) Lt j,' f::·! fi: F:! rn h (' E:-: r"1 t:':"{ ~:::. poliestireno com ranhurss ............... . V. F:i, <JU!". PPI'- t:: c:rnt. õ:\. fi.. a5 t a. r.:l'}f:'m Qcrmin~rlos. 'vastatrix. C}PI~ f(li. (A>=. n "'IÇ: ~!(c •••. Fi qur'é.:i 4:. urediniosporos pCJr~. :;~.q. h. H.. de. vastatrix incubados. .l\~.lL\,:·;tJ!. '.:::.C:bl'-f.::. J. n;(:~frbt···C:{r·'.::\t.:::.. de.'. poliestireno com e sem ranhuras e co16dio c: Ci!Ti {:-:! !::; E! (fi f) 1 E~ rJ (i F~ rJ E{ i'~' {:=:'~ +i ri i-i r'f i?\ r:J ir' E~ ~~, E': r ~ ç: I':), d E: vapores d'àgua~ l-nonanol, B-ionona e compostos emanados por folhas de cafeeiros. r.::". tt. ,..J ..-. PC~'F' C (:",,1'1. dE?. t. C\{J E'In. de urediniosporos. germinadcs. H.. a p t- F! "::. !::;. Ó Ir i O ~;", ap6s 24 h de iricubacào~ m'!.':' m!.::! r" a ri C', ''::, de poliestireno com c r' i:,n h Ui'" C'\ ~> C) t '"{. C) n i~~. 'I. "::·F!in. c.1 (-;'. f'. parafina na i. 78. presen~a. 1 ~,.' r"f () r', t:."t r'l () 1.. f?.'. de vapores d"àgu2" C C) rfl p Cf !:~. t. C) ::::'. f:?~ rn ,;':-; ri -::( cJ () ~:;. P-. r{ CI ('. folhas de cafeeiro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 i". 11. \,_, n. Percentagem de quebra de urediniosporos de fi' ~ v ti' :5' t: L:;t' ~~: r .i )~' i rUi c ;. ( t') ,':':{ tJ c' ~:::' rr c:( r' I") f7! 1 r"~ f::" fi f ,~\ c'; t .t .: i. 1:1. qui du. 1 rn c:d: \::H' :i. ::. <'". c:c)rn. 1 '; qu :i, LI (.. .. 81 F:iç;lUlrd. de lipideos recuperado de urediniosporos n~o germinados 1,/ ast at r i x, <':'q:-:< (':,~::' Eí c::': tr" EtC;: ,:Xo pOr" cf i pf:Tíoc:lD~-:;. eft' étET. de. H.. +cr' Pf'rt, L".':'.. etílico ••••••••••••••••••••• BC?.

(10) Uuant:l cldc!(;" ur E'ct i. n i C)'é'T,tOI' p () t'- cJ i f f:' t·~ 0:! r-f:t CCt}. \~~)(J:i. C). CC:tCj"r. lipideos recupprado5 de de H. vastatrix incub~dos. dF~ O~:~, f·:, ~:.. i)l. ()u ti r,'t, i di:" d C, c}p Pl"' (':~c: i p i t ",dD,. ~) f:~ r" E:()". i () eJ Cj ~;. ::;:. C) Lr t"" f:~. .... " .... " '" ". ... lO. ". . . .:. frt (~':' ~Tl ~::r Ir I~":'t r'l i·-·~ ~::: ". ". ... {'"f f .:-. ". i. c! l"' ,::1 t C, ~:; r" F'C U ~:,' c't i';' cJ c. ~:' c:! rI rJ E' Ui'" Pc!:i. n:i ":'DPOo" O~: 1'1 ~':' CI'". C ,::\ r"[:' O. r""". germinadas de H. vastatrix, ao6s par v~rios periodos em etano} àqu;::\" ... " " ... Figura 10: Quantidade de carboidratos recuperados do preCIpItado P2 de urediniosporos de H. vastatix mantidos sobre membranas d~ co16dio com 61eo de parafina por diferentes periodos de extra~à6 em etanol 80 % e àgua .. v. ••. ". o. Figura 11: UrediniospDros com lectina de. +1 UDi'·(:'s:,cr,nt[~.. FigLu-E~. 12: ,Tubo. ••••. Germe. " " ............. ... germinativo de H.. fluorescpnte" . . . . . . . . Figura 13:. Célula-m~8. (l-O. " c'Ii. di:'!. de. ~. .... .. (eM) e. h2U5t6~io. haust6rjo. V'às:tat:r i ) {. fluoreScente . . .. o. cc)rn. .. J UI. •••••••••••••••. Figura 14: Quantidade de proteína recuperada dE 100 mg de macerado de eSDoro de H. vastatrix C\~)<:):::,. E!>~. t. (" ç~'t;~ ~:tC:i,. rc{:Jl''''. c}. i ·f E~'i'-. E:n '~:. t i. '.:::_. f) F:(- :l. C;{J c:' ~:.:' ~I. tampào Tris-HCl nH 8.0 50 mM + CDTA 50 +- ~3D~~~ 1 ~i~ + ~': de S .... rnr?'t'· c: ""(pt C:'(:::-f', Ed'l o 1 •. i ri c: u!;:, ~:\do~:;, vast.atri x~. p C! Ir' i c" Li O ~:::. sobre membranas de (') 1 E' C) cH,,? p e:i l''' a -r- i ri ;,;,. • . . o. •. •. •. •. •. o. •. •. [~fn. mM 1. (; :":.

(11) LISTA DE TABELAS. F'er-centuc;il dE: gr?!"'mi n<:\I;;,~jD dF'! UI"'F'd:i, r'li u~"por-u~:: dI"! H. ~/astdtr-ix :inc:ubdd,::<~;:, por" 1=;~ t'l rio e~"cur--o em c:~'\tni::n"'i:'I ôini dcl (:1.00-:: ele: U. F"I I"Ic:\ Pl"'(:,';;cnçcl elE? c::c)(nc:,o~;to~:, E};I")CF:::'nD~:;,u" .... """"."."".. ~;/-). Percentagem de germinaçào de urediniosroros df?!. germinaçào. " ••••.•.•.•.. Percentagem de urediniosporos germinados- d2 H, ~!a st: atr' i x- qu e :F Dt"- m,,~r" EoTI ap'''' c~::,'::"ôt":i o~:, ~":,()I:):'" cdi f Tr.:d~1el. a. '-1:. t"!I"-. ~. ... 3. n. ~::,ur~) ()f"' t. PCo::-" • • • • • • • • • • " •. u. ". u. ..... ". ••. ". ••. ". •. ". ... hh. Percentagem de apress6rios de H. vastatrix, que desenvolveram vesicula sub-estomàtic0 s.cJt) Ir- E~. 1:;'-. en t E'~". Li:i. +E'ito< {:~r'~ t. E~ ~:.. ',::;'{J f.) C~q:·. t. {:-=:~~;. c1 r~. (;t t-::'$'· in i n .:~~ ç: K c'" ... 'I. ... ( : ) .. ,.,. H. vastatrix mantidos sobre êgua na presença d,:.':' "/clpCt-' E"S:' d' "'lqUE:, ~ B-- i onor'I<{ ~ l-"'nDf"L''1n c 1 F: compostos emanados por folhas de cafeeiro C\".. 1'1unclo Novo"".""""" .. " .................................... ,"7:t Percéntagem de qerminaçào de urediniosporos de H. vastatr-ix mantidos sobre membranas de p r" E:::' E' r'l r;;: i:~. compostos C:V.. 1'''lunc:lo. emanados por. elr:'. J -"'nc,rl ;;;{n() 1 folhas de cafeeiro. 1\10\/0 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . "" ...... u " " . " ... ". "'1 ") 01. ,I. .,:.-. F'F:'r-cent,;:~rJe,n cle C}F'I'--m:i. !"'IC:'~:~~(o dE' ur'cd:i no::q:::.urD'" de H. vastatrix mantidos sobre membrana~ de poliestireno CDm ranhuras na presença de. qEr-tni r'lc?.<;: [.':-io df,:; UI" r::::di, ri1. C'::,c<Cl"CJ::: d E:l H" \oI' C1 :5 't~ r:1 t .r i);" in Et rf t. i ci Ci ~:::. ~:=. Ct t:; ~... f..:.! rn E,:' ffi Lr r' ,'~:\ r"l ,::'( ~:: ci (:~ c01 ôd:i u com 6100 na presença c:lF: Vc'''PC)\''F:::'' e c:ompo~::,tD~;:i B--j, onon;::\ ~ l--nClr"I~:{nol c:l' ltqU<'i,. F'cl'''CEntdqerr; df". emanados por folhas de cafeoirus". " •.. " ._.u .,,75.

(12) F!t?\,,,, c:pn t ct9 F!m de qf?I'" mi n,:$;: ao de UI''' E'~d i fi i oS:pCli'" O"'> de H. "..'asf-atrix fflc':\r"ltidoc.::, ~:.ohf"e rficomt:H"ani::\~:: de co16dio sem 61eo na presença de vanore~ d' àquc,' ~ , H -" i OI"! 01''', é'~ ~ 1. -',f"! on nn 01 (.,,:' c:: DlfI$ c ~.•, toco:. emanados t'1()\/f.) .. " " ". por folhas de v. ". I<. n'". •. .,. ... li!. n. ". OI. ......... cv.. c::afeei~o ,.. ... '". ... ". ... ti. .,. tt. ..... ". Mundo ... 11. ••. H. ... U. .... '~7 .,::). ....... :7(~{. ... .,. Tabela 10: Percentagem de urediniosporos germinados de H. vasf-at,rix, fniH"lt:i.do~::', 'é'.obr'p ;'~:CIU,<,( nd 1 -" [i-":i, onond ~ presença de vapores nonélnol p compostos emanados por folhas de ( . .• , •. .. "1' 11'''\ C".0..{"I I","\i"", 'L-'S (1i \ " \ c, C1'; {,,-. ,""::\ f,,,,. '" ', "". '. o '. C~:, .. ""." ~ ".' v , '." ,o; L I'" _'.! \....l' c:\." I''" d" i'1\ V". 0 ". I. ,,,.. I. af,:tr' f:.~~s;Sc)r· J ClS .. ., ...... ,. •. ti. ..-. ........ Q. ............ .-. '7> "'.. C"O ....( ,"". ......... Ir.". .... li". _. Tabela 11: Percentagem de urediniosporos germinados de H. vastatrix mantidos sobre membranas de co16dio sem óleo de parafina na presença de '\;'êlç-H;r' es· d' ~\gUi:~ ~ B -":i. Dnona, 1 ""'["IC'f"\ é,nu 1. C~ compostos emanados por folhas de cafeeiro CV. Mundo Novo que diferenciaram. Tab€·:la. 12~. F'1..?F·centaqem dE urE!di.nío!!'.:.pc:;.,f'OS C}E'Y'rnin<':'\dos de H.. vastatri:>(. m"~l"·ltido<.:.. ~".C)br"E. ele. mEí'nbr"'c:\f"iE\f:::.. colOdio com óleo de parafina na presença de VéipOf" E';!:;:, d;' i::"qú,:~ ~ .1]",,,1. Di"IOni:i, :l. "'''non,,:\f''!C) 1 co> compostos emanados por folhas de cafeeiro cv. Mundo Novo, que formaram apress6rios •.... 81 tlas·t.at.r i } ( mantidos sobre membranas H. poliestireno sem r~nhuras, na p r" t·: !::;. E·; n ~;: ';oI \/ i:t PC) t' E', s. ct. :>. l:i -.- i () r-f () 1""1 ~:'l. i':~ {'J l.t i::'i.. ,. ~. :l.. dc" d ::':'. ""'r'IDn<~r'lol. C~. compostos emanados por folhas de c ,'::: +E:' c . j d:í +f~l" {'?1~ ::. :í, to,!' cv. Mundo Novo que Tabela ja·. t·". e::,. ,,'!ih. Percentagem de urediniosporos germinados rir H.. vast.atrix. poliestireno. íf,é:\f"d:,idc,':;. <.;c"hr"Ii:'!. de·'.. rnf::rnt:.r"<::Ü"lc:!:::;. com. ranhuras na prpsen~a de VapOI'''E'~:;' d' ~tçJUf.:\ I' .F--i onona, 1. ""'nor'f';-:I["{O] E' cDmpD~;tos {';'íni':in c'cl os:· por'" +o,li hi'.i~::. dt', C i:',\+ E'c,i (" C) cv. Mundo Novo que di+erenciaram. Tabela 15: Fluoréscência nào--qer"mi nc:(c!C)~:> E! gf?r'rl'li r"radCr5 por" é.ipÔ~; o -t:.r"ed:c:Hfrpnto com f]. uor" P~:;.C t.,.:rd.: E'~,," • • • v. •. ". •. •. ••. •. ;". •••• '. :::. ~ 6 c:. <:;>. 1 ect i. lI, ('r,::,:;';. ............. ". ". •. C/h.

(13) ::-: l. FI. h. UDI-PS:-c:í~'nc:i". C~} 1 u. 1 ;:\"-ii'lf;lc:'. d [-. va:stat,--i x f 1 UOl'''r::'~:,cE'I''!te~:::.•. •. ~:, P 1'''. i"i :< t' ':'. v,,,, d ,:.-{. t (:)I''':í c.'. E'iIi E'. ,'Jpi'- pc"=,,,(:::.!",,. h au !~:, t C)i'- i o. corn. elE' J l'C:: L. i.. o",-~,. fi • L f'\,:(~::. . " .. " .. :t ()().

(14) ESTUDOS. BIOQUJMICOS. ESTRUTURAS. E FISJOLOGICOS DA. DE INFECÇOO DA FERRUGEM DO CAF[. o. objetivo. de. trabalho. vastatrix sobre. foi. o. SUpD~tps. germina~ào.. carboidratos,. di::\':::. estruturas fungicas desenvolvidas. dE!. deste. bàsi~o. de estruturas de infeccào de H.. de. U/€milcie;:. & Br).. vastatrix 8erk. artificiais. DE. DIF[REN~lAÇAO. .. .i~. n. . .. v1. 't y'{j. H.. +oi. urediniosporDS mantidos em. ~gua. de~tilada.. •. [i~,::. p i". D. t. C:' C. U. 1 Cf!":.

(15) >: i :i. ·i.. Ob",.pr·vou"··':::.P. CC~fn. ,. formaç~o. .. .. de apressOrios em urediniosporos germJnados de H.. vastatrix.. estimularam a. ~:;.Dl Ui;.. E'1n. germina~ào. .?:1u} ,. do fungo.. lipidica e 19 % a carboidratos. germinacào e n:l. veio s:.. elonqa~ào. dc,. t.ubu. ele. diminuiram, enquanto durante a diferenciaçào do apress6rio foram os ni0eis de lipirleos que decress0ram.. ao. observada a diferenciaçào de sobr"e do. desenvolvidas em folhas de cafeeiro sido. inf~ctadas.. Cji.tE'. ;'i~'j("i. t.E [,de. observado qualquer desenvolvimento. fato talvé2 se deva a exaustào das reservas ffiplabóllcas do UI'''E'di. ni. O::;·PDI'''C:'~.

(16) >~. RUST (Hemileia vastatrix. Ber~. to obtain the. ln. infection structures. 0~. &. Br.'.. differertiation. i !:'.ol Dt :i, on. 1 :i. \) i d ~,.. ·rUl'f'::ri::\J. developed 1n vitro.. These. p~otocols. funqi. The. rate. ot. qerminatlon. ~~. in. i nCUbc:itf?d. V,li::'(t,t,'I" ". stimulated the urediniospores germinatior.. the. nature. c+. the coffee leaf rust on artificial. lt.. structures. :I. \/. of germination supports. used.. will.

(17) >~. \/. Lipirls and carbohydrales were isolalerl. Df and. the total weight Df the spore corresponded 19 % to carbohydrates.. lipidt::. During the germ-tube. leveIs decreased, were used at lhe beginning Df lhe development. thE,t The protein content decreased during the qermduring the appressoria t.ei. membranes was observed.. no further developmenl.. Thus;.E'. d2velopment~. i t..

(18) I. I .......i·...-·r=<C)I.yLJÇ~D. 1. _. um. processo. patogênico,. ocorrem modiflcaç6es. patbgeno como no hospedeiro. o. Estas modificaçdes. estabelecimento da molêstia.. incompat:lvEl.. t··.!c, [) i . r' :i \/ i 1 f:-:~C) .. C)\~(. {). r \ . ! (;. resultaram. estratégias. di !:;:·p"ir Elndu ClUi'olndo. clu. contrapartida.. a seleçào natural. a. de reconhecerem mas nào serem. C:i3.pac:idad{?. privilegiou oatboenos com reconhecidos.

(19) PP1D. ho<;::,pr,?clF.yi )ro.. Com o uso.. de variedades vegetais. campo~. condi'çbes para a seleçào mais ràoida. estabeleceram-se. ,;',1. ls:,to. hos:,pecJei ç-'o<::;". no. di:;-. tõ,<,. leva a necessidade do \/F:qC:'. desenvolvimento I::. ",\1. ". C:i:impo.. conhecimento do0. IJm. interaç~o. e deienvolvimento da hospedeiro. poder~. pat6geno d":". cfr-t\'Dl \li dc:,~::,. estrat~ºias. de controle de nat6genos.. desenvolvidos imoactn no camoo~. melhores. protoco]o~. de contro]p. ambiental e Que permitam o controle da por maior oeriodo.. a. interacàn entFe. em veQetais e seus. funUD:::,. fIOV"',":;'. C 1ft.

(20) '-,. .,:'. no. especificidade pelo. o. Ht'.:,7ltile,iõ'. +un<-;lD. vastatri,:,' Per'\-::.. ser estudado finalidade.. Este fungo foi. no pais em 1970. no. .':,-. Ht. com. pela primeira. ve~. caracterlZBOo. no estado da Bahia.. (MEDEIROS~. hoje pode ser encontrado em todas as regi6es que. cu} t i v;:;rn. iS.. cafeicultura nacional. H.. (VALLECILLO,. 1980 e. vastatrix pOSSUl descrita aDenas a fase. c () fn C) dC!~:,E'nvoJ \./1. mE'nto. DOS. parte abaxial da folha do OU. c{. ca~eeiro.. mais tubos oerminativos.. urediniosDoros.. com a formacào de. O tubo oerminativG encontrando (). Ufn. que. de uma vesicula subestomàtica,. máe que,. um. de hauslórJo..

(21) formarà intracelularmente um haust6rio.. Corno. cil i i. o. infpctivo dividido em três tases.. ê.{.. fOI~fflaç. ti. dE'". +;:~ S.F!. I.. C,5 i. n 2\} i;::. EIC iÉfC:,. ~::·E-?. II •. i:\o. c! fé cc:!{'n. haust6ri[).. Estas fases. est~o. relacionadas a três processos. aue sào demarcados por tr0s processos diferencia;ào celular Que corresoondem apres5~-io~. da c~lu}a màe de haust6rio e do haust6rio.. 05. fatores que levam ao estahelecimento do. de reconhecimento nestas. como. bi DClUl mí cc',,;. os; s~o. dif:ícu.lté!{. um. du. c: C)fnf). tr~s. p. alnda totalmente conhecidos.. Cl\lti\!c:.. ele;. +unqc. <.::\\1. "Lu:"",.

(22) do. ~:,'E:m. possibilitando assim a purificaçXo. o b '0; E:' !~ ".' i:', {.', ,,:\ c.. dr-2. comportamento. do fungo diante de compostos. D. E'~::, t.r' ut. p. ar' t í f1. c:i. 3. vastatrix sobre. í ,:; ~. do. de. ri:i.. 'S. t r' r:i do::;. objetivo deste trabalho foi. de infecçào de H.. ur ,,:1':::,. 2, cl In i. elo. carboidratos e. lipídios.. os mec3nismos celulares de. substratos contE'údo.

(23) R·EVISPíO. o. L. DE. I TERA-r-URA. processo infectivo de. fungos causadores. ccmp 1 E.~>: u. ele. dos. al~m. prÓprios. tii ccui mi. process8s. do. por exemplo.. plé.~nta.. penetram pelo em. cone! i. (.:",. oarasita.. reconhecimento por parte do oat6geno de alcumas d,,~. CD';::,. estrutura~. no caso das ferrugens que ,,1,-,. estbmato~. \. ~~ÓF..'s. o. ... \ ... ~. apress6rio somente. +ol-'mado. a extremidade do tubo germinativo encontra o sitio prbprio de. penetra~~o.. estomàtica, somente se. Subsequentemente~ +orm~rà. na cavidade suh-pstomàtlca,. e o haustório apenas intracelularmente.. aquI r-E'conhc'c 1 rflento.. três processos que deoendem ciD. em. do. de. i ncornp,::\t:1. \/(;::·1 ,.

(24) o. melhor conhecimento dos. mec~nismos.. UUP. reconhecimento pat6gpno ao estabelecimento de estratéoias de. impacto ambiental! ser utilizadas pelos melhoristas de v2getals cl c·:,='·envo 1 vi. ment.o. ppr"mj. de. de) caracteriza~ào. inibidores especificos pat.óqenn. no. -\:indu. [1 eiS::. na. F.?. de melhores indutores de resistência.. funqc.,!:::. sào. ri CJ]. um bom modelo neste tipo de. ::~.. alta especificidade por fases durante o seu df:?. D"õ. diferenciaçào celular nestc c. pc::'c:!c'ro. também ser considerados como marcadores do oat.6geno x hospedeiro.. Em Sf?('. Lttil. ri f.~~; t. (.:;,. nossas condiches um funGO tipo de pesquisa. ~. quP cid. ferrugem alaranjada das folhas do cafeeiro. H. vastatrix..

(25) -{ Fi"l'UOpn,. (SACCAS. para. &. CHARPENTIER.. 1 Cil] 1) ... ser examinado por BERKELEY &. pesquisadores por. concluíram um. novo. Este da cafeeiro.. que se tratava de género. oartes. 1. B7F;,. Java em 1879.. e Madagascar em. ferrugem. um~. fungos esp~cie-tlpo. alaraniada. Das. ,i uI 1'),:\,;. do de'. Ber~. do mundo.. Ilhas Mauricio em 1882,. Ilhas. Filipinas. 1886~. Samoa e. [amaróes. de. material constitui a. Hemileia vastatrix. vãria. BROOME. Novas. H~bridas. R~uniàG. p. Born&o. em 1894.. e Libérla em 1951,. chegando ao Brasil em 1970 (ROSER.. uma. epifitotia. da. moléstia.

(26) diminuiu 3000. a. produ~àD. de 42000 tDneladas/ano para. cerca. dF:'. toneladas/ano de café em apenas 4 anos.. p 1 an i: ). o. +0:1. produçào de chb e seringueira (CRAMER.. da molêstia serem menos severos,. eVALLECILLO.. 1980;. AKUTSU,. 1957).. a ferruaem do cafeeIro se. 1981). O fungo H. vastatrix foi. pela primeira vez constatado inféctando cafeeiros na Bahi2. em todas as regi6es cafeeiras do rais.. (:1.::<. foi. estudada. por vàrios. pesquisadores. como:. NUTMAM & ROBERTS (]970)= l) IJ Pá:: T [. E~t.. correlacionaram. (:lei/h}. com a diminuiçào da. Cll.tC:'. ~rea. Lato5sintétic2. C). P.

(27) 1U. da. o. mol~stia. funoiC::lcld~~. tratamento dos cafezais. C:ÔL!I'-ICD~:. os. mais. eficlentes. ZAMBOLIN & CHAVES.. (ALMEIDA. 1974:;. et. ZAMBOLIN et alii.. CY7';" • ) I .... J, 1. Outra. estrat~gia. para o controle da ferrucem do cafeeiro é a variedades resistêntes á. mol~stia.. b. introdu~~o. que vem sendo. de. tent~do. desde o século passado.. Em 1870. o orimeirocultivar resistente foi. na. mol~stia. regiào. de. Coorq,. c:\ cw i c: LI 1 t_ Cit--. resistente. seu nome. selecionou á. moléstia em sua prooriedade. (BETTENCOURT.. Err:. 00tro na. 1911.". cuJ ti '1,:0,1'-. regiào. de. 1.981).. No. resistentes. caracterizadas no Centro de Investigaçào. das.

(28) :l.1. Ferrugens do Cafeeiro, F·PrZ\.JULI. Portugal.. et cll i i. (1974):;. P{':)UL 11\ICl. ALMEIDA et alii dI. E't. 1 1. (1'~?7 1.\. ) :;. HDOGSTF:PITEI,!. var'i i='lbi l:i c3":!clE,, selecionaram. dentre. para. em nossas. produç~o. elas,. et. aI i i. demonstraram .t.. cafeeiros. condiç~es_. >::1. CfT?} ;. a possibilidade de se obter uma resposta a. in+pcc:ào. genétic~mente. as~ersào. suscetiveis? através do tratamento. Berliner,. "Bacil1a,S'. suscetiveis. pelo fungo.. Tc::·dDS bF,nef i c: i. de. tornam resistentes cafeeiros que sHo t.otalment.e. infec~ào. abi6ticos.. da folha do cafeeiro com filtrados C::CHü. thuringiensis. de. com H.. das folhas com diferentes indutores bi6ticos e a. 1 é:< j. recentemente.. Mais BEF:ETTr-~. pc.((?r·'L. cif". L. (ir, ti" e:o l. (..:.. :i. <:Im. mecanismos de reconhecimento pat6geno x hospedeiro. Assim, i ndut e'j"c.'!,,·. partir do conhecimento dos aç~c~re5. presentes na parede da célula. m~e. reslduos. de haust6rio. de e.

(29) que devem ser os responsàveis pEla resposta de incompatibilidade. c-t "".}. i:i.. !;:;.pclundo. (:I. qtl~.::). ". IfIE;l. nc:{ E'!Spf=~C. i ·F j c os. conheci mc.:.>nto hospedeiro mf~l hOl~. de'.. {~1.. c onhcr. 1. (f,f:". I. de. desenvolvimento. d C). hcw. s:i. Dl oC}i ,o.'l.. do. pat6geno.. clt<.. podpria. o. i s.ta ~. introduzidas no hospedeiro, no. aumento do tempo de vida 6til.. du. cultivar melhorado.. 2.1. Biologia do fungo H. vastatrix. BERKELEY. p. BROOME,. mi:':\nch'::i~:.. "pequend~'.. dI In:i. nuto',; t.u-fos:,. de. E!S.p C.' 1'- os. fit.as. <:::.ub'·-. tipo. voltada para u floco.. A. por~~o. superior da folha acima da. t c,. do.

(30) •. nas folhas do cafeeiro. caracteristicamente se. potlE'in. bem que esporàdicamente,. partes da planta como observou THIRUMALACHAR ;. fun[Jo. aparecem nos cotilédones e. f. out r' ai",. NARASINHAt1. frutifi~a~Np~. (1947) em Coffea libericca L .. Eventualmente elo. em. t'''t\t.CiC,::.. peclolos de plantas infectadas.. do. flexuosos em fasciculo5 de L,uJ Ler. Jà RAJENDRAN. tE~ci. do.. se. bem que rara,. e. que. (1967),. emercem sem. I'''uptttl'';o':,. t.:i pc. c otn. dn. consideram a possibIlidade.. de urêdias subepidêrmicas. do par0nquima lacunoso, da folha do cafeeiro.. H. vastatt~·fx. mcdindo. de! p<~I". C.. dimensbes médias de 35.75 x 21.22. d. {i.1)) ... \.:"'.

(31) 14. x 22.7 um. Em C. arabica as. dimens~es. mêdids. e~am. de 30.25. x 22.5 um e em C.. foram estimadas em 30.55 x 22.0 um.. germinaçào. dos. urediniosooros. obrioatOriamente. na presença de àoua no. mas. imersào. a. completa. processo (MAYNE,. dos esporos. 1932; SACCAS. ( 1 8f:3::::) •. prejudicial. é. CHARPENTIER,. ~. liqUIdo.. ~stado. 1971)_. obser"vou a formaçào. de. até. \.'astatri x.. nOmero. mais. frequênte,. desenvolvimento pleno. apenas. dois. de apenas um. chega~. Para DELACRDIX & MAUBLANC. (19111.,. tubos germinativos eram formados. opostos do escoro.. após. o contato do esporo. com. àaua. no. estado. u. liquido. de Após. entre. 2-4 a 6-7 h a 23. c.. o. período minimo. 30. um.. pudesse. ser. luz até um comprimento do tubo germinativo de o. periodo. sensivel. ... 1 "_.. i..J t-:'. J u::":~. apressôrio. ainda.

(32) fOI"'ffi2\dC!n. liquido.. A temperaturas abaixo de 15. germinaçào. nào se processava. o. observando-se um 6timn CJ. A te~peraturas acima de. qer'mi ni..~4~i?,Ci diminuí -. 24. i3... '. HUCK I ",H3. luminosas e correlacionando-as com a urediniosooros de. germina~àode. que. ta~a. dp. H.. intensidades luminosas maiores de 21528 lux. necessàrias. para um màxlmo de germinaçào. '''1. .,::.. h segulda da incubaçào. obscuridade resultava em inibiçào da germinaçào.. germinaçào se inicia com o de uma pequena protuberênria cilíndrica.. incolor e. que rapidamente evolui para q(':Tmi. f"t.:d: i. do ~. \.'0. ci, 11 ndt-:i, cu. in~olta. um. tubo. que. protopJasto do esporo sobre o poro germi.nati.vo (SACCAS. CHARPENTIER,. 1971)..

(33) ló. Quando. germinado. sobre. àgua 14. dF.!. hi·fa.. est~. 250 um e observa-se a. varia. de 120 a 450. pre5en~a. u~. .. ., l. ~. ovbide. ou. ~. secundárias. observa-se.. piriforme. 15-18. x. 1971).. CHARPENTIFR~. de apress6rios.que tem a forma de. dt:>. 1 ;-;-7 .\. por volta de 95. ramifica~6e5. (SACCAS. Ocasionalmente. sacular. 1 i -l-O. com ramificaç6es. vezes chegam a quarta ordem. forma~~o. de. c.. 0. m~dindo,. 8-14 um. uma. ap6s. 6-8. h. de. (SACCAS. \. .\. I ". Sobre folhas de cafeeiro,. formaram apress6rios sobre os estbmatos da tolha. 14. pareceram penetrar sem a. diferencia~ào. enquanto. dp. estrutura especial.. Após. a. forma~~o.. responsàveis. pela. do apressõrlo, penetraçào. do. fungo. no.

(34) iJ, '.., I. por parte do fungo. atrav~s. cio. bstio. estomàtica, onde ÇJlobosa. ele um. ou. "pE'q". dF:~. in+pct.;~~D. qUI:",. p2i,s':;;,~ndo. do estOmato.. ocorre~à. i"-ITlPbbi ele. a. diferehciaçào de uma estrutura. como. CHARPENTIER (1971), ou em forma de êncora como afirma RIJO. & RODRIGUES (1978>. ou ainda com vàrias morfoloqias como. cita MARTINS (1988).. As pelo. primeiras células dQ cafeeiro fungo. Bubsidiàrias do estOmato. a. sào.. serem Cf.?l uI a<:". (RAJENDREN. .,,10'0 i::{. tJ. septaçào da vesícula sub-estomàtica que, parede das células. vegetais~. ~m. contato com a. penetra no interIor da célula. e diferencia um haustório.. (RIJO & RODRIGUES.. formam após o aparecimento do primeiro haust6ricl. penetrarem. na. célula formam um seato e. ~j i. +E'!'" r."r; c: i. uma estrutura semelhante a um dlSCO na contato. entre. (RAJENDREN.. 2. 1967).. c~]ula. antes dE <":Im. 7002. 1,.1 m i3.. de.

(35) IH. micblio intercelular, ~(. que foram classificadas por MACCAIN nutl'" i 1. i. HEI\!NEN. com. Vd~:;;·. E'. se caracterizam por terem. d~. médio de 3.5 a 4.5. di~metro. 1. nutritivas ou alimentadoras. 4.7 a 6.2 um de diametro.. apresentarem muitos. a 7 por 10 células hospedeiras). (6. e por. serem observadas. tanto no parénquima lacunoso como no paliebdlco. normalmente unem um. que n~o. apresentam haust6rios e. s~o. ~ouco. ~~otossoro. a. outro.. septadas.. Eln. umidade:, urediniosporos de H. vastatrix na face inferior das folhas dE:. a. Ü. h. 14 h.. e ob é::· e I". \/ a d. duas semanas ap6s a. inoculacjo. manchas clor6ticas na face inferior da. a ~:",. i nDcul c:H;: ~\o. de 1 ElFl2) •. urediniospor05 nas lesbes clor6tlcas. fel. ht~. ...

(36) 19. H. vastatrix, parece ser dependente das condiçdes ambientais. da. idade. RAYNER.. da folha e do cultivar. 1961; ESKES,. utili~ado. 1983).. do. grande. nómero. envolvendo o desenvolvimento do fungo relativamente. H.. de t,last:at:rix~. raros os que se dedicam'a bioquímica ao. e. 05. ,..,,!-_, \.~!~; ;l- ""<-t'.. , c\ c:! I c'· ... I_",. estruturas do hospedeiro.. 2.2. Desenvolvimento. e. Diferenciai~o. Celular em Fungos. Causadores de Ferrugens em Vegetais. o fungos. causadores. processo de. adequadas umidade.. de. esporos. de. ferrugens em vegetais. depende. de. de. de germinaçào. temperatura.. Urediniosporos de P.. tem a por. 1 umi. nc<~=,as,. trit.ic:i,. graminis f. germina~ào. ac::í. ma de 10(>00 1 Ui':. injbic:li:'~.. (SHP:Fr:". F:,t.

(37) GIVAN &. ,:\lii~. L\JCri~3. Et. V1\1 I GI···nS. alii~. que se a por. 19h4b;. BRONFIELD~. mais. de. germinativo. c:ei nci. df':~. uma. germina~àD. com o. pPt·'. inicio. o. h. se estender continuamente parcIal. recupera~~o. o. ocorre.. da. inibiç~o.. 24. irradiclç~o. periodo. de esporos dE. do. pe.dei". senslvel. ferrugen~.. pela. i odo. da. fermaçào. do. tubo. germinativo. interrompido presença de luz. Ju~.. o. pela. (CHANG et alii.. KNIGHTS & LUCAS, 1980),. A presença de auto-inibidores de em. germina~ào. fungos causadores de ferruqens em vegetais ê. muitos. compostos. caracterizados. à. com esta propriedade foram. s~o. 1974;. ALLEN,. isolados. e. 1976).. so10veis em àgua.. pois alêm embebiçào.. e. partir de urediniosporos dos. 1977; FOUNDIN & MACKO,. germinaç~o. comum. do. oro:esso. de. a àqua & necessària para a retirada do composto. autoinibidor da ~erminaçào do esporo. desta propriedade & impedir a. Outra. germina~ào. consequência. de urediniosporos.

(38) 21. quando. de. agrupados,. pois a. esporos (ALLEN.. l. .. p -'YL.,";' I.• .l- ,. que a ideais~. dur'ante. concentraç~o. do autoinibidor da. õ:d i oermina~ào. imoedindo. o. [~::tc'(';. 1 •. ocorra. ressecamento. do. funno. di, rni nui ndo. ét. intraespecifica pelo sitio de infecçào.. Muitos. dos auto-inibidores. cis-3-4-dimetoxicinamato, ferrugens do feijào,. inibe. girassol,. 1971b;. 1972~. 1974).. !I. metil-cis-ferulato. ferrugem. do trigo,. interrelacionados.. e o meti!. (MACKO et ali1.. ( 1 ci7~,:,:;). do. da inibiçào das enzimas. responsàveis pelo processo.. das. (metil-cis-ferulato).. 1977= FOUNDIN & MACKO,. através. germinacào. gprmina~ào. milho e amendoim,. cis-4-hidroxi-3-metoxi-cinamato obtido da ferrugem do trino. a. de. por' CI. digestivas. Como a lavagem dos esporos da. também prevenia o efeito lnibldor.

(39) poro germinativo s6 se dava poderia lndicar i.nibic;:~lo. da. CJpt"mi f":ciçao. QU0. nào ocorreria sobre. digestivas do poro qermlnativo ou seu substrato.. encontr"r::\das e'. e. nas. que lhes conferem. 'sào. tt~mbf."':;m. estimulac;:ào da germinaçào dE algumas ferrugens. nonanal estimula a germinacào da ferrugem do triqo (FRENCH mi 1. hD~.. 1ç,'~.::i7) ~. feijào. é.tl. a1i i. guns.. girassol.. amendoim. ~,. autoinibidores end6oenos de germinac;:ào. c in Einlal dE'}.. podem. aI qurOiit''''.. explicar ê"S. (STAPLES & MACKO.. o. do~!. como compostos naturais em fatos. como f!:,. p1 ant.i3.':;. 1984).. efeito estimulador de germinacao sobre P. t:rit.ic i,. alta densidade de rea~~o. esporos~. mas nao foi. constatada qualouer. entre o estimulador e o autoinibidor de. germina~ào..

(40) Ap6s a germinaçào,. ,crescimento. relaç~o. ao ponto de. ferrugem rela~~o. orientado. do. trigo. da. hif~. infec~ào.. cresce. sobre o. substrato.. o tubo germinativo da. Assim~. formando um. ànaulo. reto. em. as nervuras das folhas de trigo segundo. LEWIS. ~. DAY. ordenada de cristais de cêra na. disposi~ào. epiderme. das. que se dispbem paralelamente ao. graminis. r".p.. Comportamento similar de crescimento ordenado em. trit:ici.. relaçào. ao substrato é observado em outros patossistemas. exemplo. comportamento. deve. na ferrugem do. patbgeno. e. plàsticas de. a. da. cuticula. E'piderme de. res~duos. pela maximizaçào. da. encontrar o sitio de penetracào. (LEWIS & DAY,. no hospedeiro. feijào. ser o reocnsàvel. possibilidade do pat6geno. livres. +.. do. 1972).. hC)~~.pE'c\P3.. folhas. da planta,. de. ro.. trigo,. que urediniosporos de. P..

(41) ::: .; graminis ·f.. qerminativos. ordenadamente e. perpendicularmente ao. molde. como apress6rios~. sobre os moldes dos estOmatos.. Vàrios eventos t.ubo. germinativo. sobre. de crescimento orientado do. substratosartiflciais 1934) e DICKINSON. riLLFN :l. 971. l'::;'49b,. umidad~.. CO. ~. 1972}. ~. evidencia~am.. e luminosidade.. 2. BALLS (1905) demonstrou. sobre membranas de borracha. perf0radas~. hidrotropismo. elongaçào do tubo germinativo de P.. positivo. glumarum.. durante J~. a. ROBIN~ON. P. caracterizou riPC]êtti. vo,. eventos. de. heliotropismo. e. hidrotropismo. correlacionando estes eventos a um gradiente de. gàs carbOnico ou oxigênio.. \. trl"!. gradiente. de. pH na superfície da pelo. evento. de.

(42) compol"tament.o. o. fotot.roplsmo negat.IVO, GETT!<:rlh!üT. f:!'::· t F'. +. :i pc<. CHANG & CALPOUIOS (1973), tubo. germinativo funcionaria como uma. Como. neste. caso,. luz inibe o crescimento. ê:<.. celular e o resultado. lente. ~. cilindrica.. da. parede. um crecimento curvilíneo oposto. á. 1 u;·:.. Este efeito parece ser mediado pelos comprimentos de. onda. vermelho e wermelho extremo,. observado na plúmula do um sistema fotorreceptor et ali1,. feij~o,. de maneira similar. aD. indicando á existência de. (CALPOUZOS & CHANG,. 1975; SCHNEIDER & MURRAY,. 1979),. modificaçNes no conte6do total de lipideos, u'l':. i 1 i z aç àCi ~. parte da ferrugem do. trigo~.. dos. àCldos. palfilltic:o,. REISENER & JAGER.. et.. alii. (1967> ,. al~m. de modificaçbes no metabolismo. de. ljpidpos, no. padrào de carboidratos e. de trealose, manitoJ. àlcoois,. e arabitol.. com o extenslvo uso.

(43) · qPI'lnl f l d t. urediniosporos de U. 1971b). (1971 a~ di mi nui. ~:~D. appendic<j.1 atas,. ni 'lei s,·. Entl'-etr:'\nto:r fosfolipideos correlacionaram degrada~ào. apbs 3 h de. aumentavam estas. inicialmente. fosfolipideos. d!-?. de. LANGENBACH & KNOCHE. observaram que ocorria. do!:;. iv'c!. presentes. germina~ào~. 05. autul~e~:;. processos. de. urediniosDoros da ferruqem. do. altera~bes. os. no. nivPls de. consideralmente. com. uma. e s!ntese de membranas:. dos. durante a germina;ào,. apresentarem ribossomos com c: c:c:nc). ele demonst~aram. STAPLES do. et. esporo. ·Oi 1. i :i. mantem-se. constante. durante. evidenciando que a síntese de novas proteinas desempenha n:;:DC1-H~. Sr:. C CH1 t.f.?údo. um DPILY total. papel secundàrio durante. o. processo.. (1970) mostraram um aumentn de de. Após. proteínas 90 min. os. tubos. aobs. germinativos. 25. %. Já. no. o. dos. func.J::.:r<:::.. causadores de ferrugens em vegetais se localiZ3rem sobre o S3. tio. de. extremidade do tubo germinativo,. a divisào dos n6c]eos no. 'f'.

(44) a "mi9raçào destes. n~cleos. do. dependência de diversos fatores,embora WYNN. (1976). a+lrm~. a topografia do substrato seia necessàrlo para .J.. o inicio da diferenciaçào,. .... ". em P.. .c. <.:;p •. ". \o-rl \..lC."l.. li. HOC H ferrugem. do. feij~o~. pode estimular a formaçào de aoressOrlOS. ~:; :i.. rfl u 1.. o. i::\. tamanho da borda das um. dic3("io. tu.bo. do. ~iclo. de divisào. nuclear. E·:. morfolOgicamente perfeito.. induzir'. gr"amin:i:. 5. ·f •. sp.. t.ri"t.:ici 19H7b) •. 1978),. substancias isoladas da cuticula da. ····r.

(45) ~:.·:B. & REISENER.. (SRAMBOW. +01 hé"-. cicl1CO (PI!"IPc). (~;·r~~F'L.E~:;. et 2,1:ii. 1983a,. da form~dos. uma. ap6s o choque. se~ào. normal. & STAPLES,. do. diferencia~ào. H'1ACKO et i:t1 i i,. ferrugem. do. 1987).. P. t?iH. K. 9 r-a.1Ji:i 1):i .:::. +.. 1978}". sem. a. diferencia~ào. tratamentos com inibidores da. aumentam. os niveis de AMPc;. ap0essórios normais. despo1imeriza~ào. de. do +os+odiester~se.. induzem a. formaçào. de. (HOCH & STAPLES, 1984'.. microt~bulos.. come:. o. choClue. gríseofulvina. etc. divisào. tt·· j co. podem apresentar ma15. t~rmico,. apress6rio.. mas. de. que. 1983c).. de divisào nuclear,. (HOCH. Entretanto,. 1983b,. tE~t"mi. C()". induzem a. do nócleo,. e<.::.tel:ljli:;:çi'~:~\D. clCl~::.. miClr·Dti:)huJ.D~:;.. C.C)lflO. t"a>:cl. F. Li D:, o',). .L. [::F·r·nlitc'rn.

(46) do apressbrio,. form0~~o. Indic~ndü. Que apÓs o estimul.o. nescessàrio. ê. a. estabilid2d~. m:i c::rotübul O~;, transmissores do sinal da ponta do tubo 0prminativD núcleos. CHOCH & STAPLES.. tigmiodiferenciaçào,. como. 0t~. os. 19ECb,. ~. diferenciaç~o. de estruturas de. mecl :í. i?-Li 1':\ quimiodiferenciaçào. como. a. di+erenciaçào. mediada. por. compostos quimic::os.. folha do hospedeiro por. oarede qerminativo do fungo.. Tratamentos com pronase 1"'-.. .. do. tubo. .,:. i ndu:z:i do",:,. inibem a formaçào do apress6rlo. Pronasp F. ativa. nào altera a germinaçào ou a. elonq0~ào. do.

(47) i ndu,,·, ~\Cl. i::t. tiqmiotrôpicamente.. 191:l7 } germinativo. O!3. ocorria uma desordena;ào dos microt0bulos. mi cFTd:,úbul o',:; enquanto. que. c~lulas. em. .. induzidas. da. oara. R. os mesmos estavam disoersos na extremidade do tubo germinativo (STAPLES & HOCH.. a. entre. formaç~o. eventos. dos apressbrios se inicia com a. estruturas. extracelular. 1987). seuuência dp. 3. leva. 1982,. pr9teinase-sensiveis. =,_ubs t.i"· c~t D". da. appendiculatus com a. U.. de. interaçào. Intera~ào. matriz. topografia. do. resulta a. microtúbulos da ponta do tubo germinativo o que resultaria na. formaç~o. do. do apress6rio. nücleo~. Neste intervalo ocorreria dc:,. que. citoesqueleto do tubo germinativo. (HOCH & STAPLES,. secundàrios envolvidos no. processo,. intracelulares de càlcio e AMPc foram ( 1 CjlB7) t.ubos. isoladas. e. germinativos de U.. de. diferenciaçào. como. os. nivejs. (HOCH et alii.. caracterizadas por aceptoras. de. 1987)". cálCIO. appendiculatus,. LJiC:CE.iT 1. E't.. i:, 1 :i.. j.

(48) um. na. ferruqem. quando. da. proteinas. aumento da sintese. cI [",. Ol'l(.:\. do feijào. induzida. diferencia~ào. ~endo. tigmiotr6picamentc.. '... \in. sintetizadas.. a. diferenciaç~o. induzida por. c:hC.qUi·?. um t.pndo. CDifi i.~fflpl. i f i. c:acli:'~'::,.. choque tór·m:i. cc,_. CC)fn. hospedeir~. MENDGEN et alii. que::. durante a fase de. elongac~o. ~I. do tubo ger'minativo,. observam algumas modificaçbes. na planta hospedeira. Neste.

(49) o. per~odo. suporte. de. germinR~ào. do. pat6geno. substituido por membranas artificiais. pode. que~. o desenvolvimento 'patóCjpno,. ocorre. Algumas germinativo alguns. a. normal. de,. do. dife~encia~ào. estruturas da superfície. do. tubo. podem servir de elicitores para a sintese. compostos de estresse da planta (YAMAMOTO et como. ser. a produçào de etileno (PARADIES. &. de. alii~. ELSTNER.. 1980) ... ferruge~. do feijào,. o desenvolvimento do tubo oerminativo. intrafoliarmente. cl (). C.OlflO. <;)PI'''rn:i.nc:\ti vo~. também. é. capaz de elicitar. fitoalexinas em diversos hospedeiros DARVILL & ALBERSHElM,. contato. da. vesícula. tubo. 1984).. (YDUNG et alii.. 1982;. Nesta fase observam-se apenas. sub-estom~tica.. paredes celulares do hospedeiro.. Deste contato resulta,. no.

(50) caso. de uma. intera~ào. compativel,. dos compostos de estresse do. hospedeiro~. (J. OC:Ol'''l'-am. da interaçào (MENDGEN et alii,. 1988).. da soja Phakopsora pachirhizii. 2. do trlo0.. contêm quitina na superfície externa da parede ce]u16r tubo. germinativo. (KAPOORIA & MENDGEN. infectiva. aP0s a. diferenciaçào do. apress~rio.. 1985>. destes. também evidenciado neste trabalho que, nc). do. pel'''{:í 1. algumas. altera~~es. de carboidratos eram relacionadas. dc,. ;; :!. 9Uf3} c <:ir- boi dr" é:t t. D~::·. de alguns compostos envolvidos nos mecanismos. 1.1 (>.

(51) e:diI.. atividade dessas enzimas.. em. preparaçbes microscópicas normaIs,. Este material. ~. obtido. de uma solucào infiltrada. & MARTENS (1987),. mr::,todc<] c: n:;. ;::ç. P.,. (FINf:::. et. :i. nl 1.:- :i,. <::ü i :l ,. PCdt":'IH. f'. L'. a1i. j. ~_.

(52) lS'UE:l) • \. penetraçào. do. parasita. no. do. com a supressào das respostas psoe=ificas. protoplasto da. Estas. planta~. com a. formaçào de. v~rias. du. camadas de. estruturas~. com. menor nível de ester6is (HARDER & dife~ente. afinidade CDI"'antps. (LITTLEFIELD. &. da. MLNDGFN,. normal. HEATH~. i; L. 1FT! .. Fi ! FI ... U. BRACKER, 1972; SPENCER-PHILJPS & GAV.. 1981. qtt:::'. ho~pedeiro. (MENDGEN, Llm. que. permitem. 1981).. r'v'. mE·ll··,ci\'·. o desenvolvimento do patbgeno. P. C.tel:-',I" '--', .r l .". 1 ri: I.) (.} c.l F Iií. I.IJ.

(53) '::,31. i. 1"10(' (Ji~\n. e alccais.. :i, coe::, ~. Afe~lu-se. comportamento da germinaçào e diferenciaçào de de. uredinfosporos CCirn. 3.1.. tamb~m. c" Q. apressõllo~. (} (). f:?:. sem a presen;a de. Plantas utilizadas. L". portadora do gene de. L..C:l'IF'. c\" ". ~esist@ncia. SH5~. pertencente ao grupo.

(54) .. ::-. fi r;:,iolÓÇ1ico. que. sào. o qual é suscetível á malorla das. ~:,:~. as mais comuns (CARVALHO,. As sementes de C.. 196U. ". raça~. de. f<ETTI::::r.ICDL1Pr ". aratlica. C\/u. foram obtidas da Se~ào de Genética do Inst~tuto AgronOmJco de. Campinas. e da Coooerativa dos Cafeicultures de S.P .. A semeadura foi. germinadores as. (110 x 80 x 60 cm). sementes. de. foram. até. em. casa. atingirem. recebendo. transplantadas. di~metro". de. por. 30. para. em. de. i::'\1 tUl',,":\,,. vegetaçào,. 8 pares de folhas. adubaçào. mensal. soluçào. de. sulfato de am0nio !. cloreto. de. potássio (250 g. água. ondr::. c.. entào. em de. 11. mantidas. ambiente. vidro.. e. calcàreo calcitico e cloreto de potàssio (250 ]. !. foram. com tampa de. co~tidh. per"maneceram. plàntulas plt-l"€.;tieo~",". feita em areia. Garça. I. 50 g !. (+. pc:w. 100 g). em 100. 1. de. (p/p/p/v) para cada 3000 mudas.. foram. utili2ada~.

(55) pai'". e ',.<'. e~::;tDcagem. !'. de. H.. éi:.:.t at:r i .)(. .. .1 .. -. C ~ \::.'. cl E,:'. regibes paulistas de Campinas, .• 1 ..••. Lll:::. criogênicos. plàsticos. n. imersos em nitrogênio liquido. uti 1.. 1. z'ac~D!,. +Di'''c.:\m. ~:,uL,mE't:í. do~::,. [:) ". é.:-\. ChL,!(:~U+=':. t,f"I'''if;:i cc< pel('. l() ((,i. ri. d. c'. \!:l.. ;::íbi 11. di::,dc' +eri. qF:r m:i.. ndclD~;. de.

(56) viabilidade foram feitas em triplicata.. CDlfI. bi.oquimiC:''':I ... e presen~a. diferencia~ào. f.-?m. de compostos exOgenos. Amostras de urediniosporos de H. j". ponta. eCDI h i d c.:< <,cc.. de uma aaulha. lêmina escavada contendo uma levedura. vastatrix,. ~oluçào. (nas concenlraçdes de. de amido.. O~l. C}/inll,. azida s6dica. sulfato. De. sacarosp. càlcio, l-nonanol e. R-ionona. U 't :! •. uI/mIl. em àoua destilada e. c: \! •. 10. v~V0. 1"1\.\ r', de, Nc,\!c::.. cl i:,'. forradas com pape]. de filtro umedecido.. cu,. ,.1 ..... t. ~. 1-::'.

(57) 40. +C'I'" ê:\1ll. "f' C!Uc:\S ,. t. r-. :i. p 1 í. c i:'i. t. ioi ~::'. ( 1. ()(}. ~~d to?. Ol:::!:::.er· vOU-·:::·F'. de cada. l..l. F{" ) ". m:i. c: r'- c ~::. c c! n i. E:m. prepara~~o. p. +o:i. DE'. i,':\. o percentual. clc.",:t e',>. 100. -foi. por~ào. com. da epiderme. 22U1. aba~ia1. foi. destacada,. de algodào em lactofenol. e montada em. ~qua. láminas de vidro para observaçào em microscopia ótica.. A através do teste t. análise estatistic:a das médias foi ao nível. de 5 %.. feita.

(58) 41. 3.4.. Germinaç~o. e. formaç~o. urediniosporos de H.. de estruturas de infecçào em. -vastatrix sobre àgua, folhas. destacadas de cafeeiro cv.. 1'1undo Novo,. de poliestireno com e sem ranhuras e membranas. de. colOdio com e sem Oleo de parafina.. dE. poliestireno. foram denominadRs suportes artificiais de. com. gerffilna~jo.. preparadas a partir de placas de petri plàstll.as acetato +ini:.~.}. "/. In. I,. d~. etila para uma. Quatro mili litros. a camada de polipstlreno que {cw-rnou. foi cortada em. peda~os. posta a'flutuar sobre àgua,. de 1 em. {-:~. em placas de petri com 7 cm de. o preparo de 19minas de inic:iêil. +Cf}. poliestireno.

(59) c;. tal sort.e a odo rompe-la.. em petl-l ". co16dio elàstico,. &ter etilico e etan01. previamente lavadas com enxaguadas com acetona. 2. membrana de colbdio em? e. +01. se formou foi. posta a flutuar. aorescontada,. de membranas do co16dio.. em agitador. q~e. de tubos. 2.

(60) ll __ >. c: \/ " .destilada foram aspergidas.. o • r.::~.,. (1UO '>;'. ...::.\.J. Tode). 3.5.. Efeito. U.F:"j •. o. de vapores de B-ionona,. l-nonanol e. postos volàteis da folha do cafeeiro na e. d". diferenciaç~o. de apress6rios em H.. Urediniosporos de H.. c:om-. germinaç~o. vastafrix. vastatrix em. suspens~o. Todas as amostras C). 6~. 12 e 24 h a 25 :!. ····nDni':\nD:l.

(61) +1 \.1tu,e:\!'. 1,5 cm de altura onde foram postas a. i:',!. E C'. tampas dessas placas foram deposItadas internamente de. 25 uI de B-ionona, cor) t. c~to. t.c,dc<. Para aferir um possivel pfeito de de,. c: e:, r"l t. ;,;( t o. c. (J(')':. :! UO. vt::"t". J.. +:i, C::O\,,\"'!",C:'. o.

(62) Os. 3.6.. experImentos foram. feito~. em triplicata. Anàlise bioquimica de urediniosporos germinados n~o-germinados. de H.. e. vastatrix.. C,I. H.. a quebra dos urediniosporos de a recuperaçào de. carboidratos~. Procurou-se. 3.6.1. Quebra de. proteinas e. lipidlos. também. urediniospo~os. de H.. vastatrix. miligramas de urediniospcros pOl'. de'O';1;::i :I dei,,;. precipit.ado. q ". obtido. 11 qu:i. de,,,. foi. macerado sequndo 4. :10. m'!. u.

(63) destilada. fOFam. t. !'". i t UI' dele"". 'f. Cl. de 10 uI. foi. retirada da soluçào T.oeln,,:;. 6b~2rvados. int0gros. foram. contados. D~:;. e. percentagem de quebra estimada pela seguinte euuaçào. apbs o tratamento NA médio. =. nOmero médio de. urediniospoFos. antes do tratamento.. 3.6.2.. Quantidade. total. urediniosporos. de lipídios. germinados e. c!.::;;. n~o. observados. em. germinados de. H.. aspergidos sobre membranas de colbdio com 6100 de parafina.

(64) pl,,\c,;,,~::. Em. de·:, pF:t:r:í. corn. J.~':'. em dE:' r.:!:í,\imF?tl'"O c. :i.nCl.Ü:idclo,-:.. ro'C)/"". recolhido. +cli. o. , ... :-. ... J o... <c.:. o '::'4 11 a. 2~:.oi. o. material. 5000 9 por 20 min e o. (2. (::,t. :1 1 :i c (). 9 por 30 min,. e o. sobrenRda~te. o. L" +c~:í. fra~ào. (82). evaporado sob pressào. sobrenadante evaporado assim J. ruI. obtldo. de clorof6rmio. lipidica de H. e. +CJl. utilizaio para a. ácido palmitico.. +C):r, 0.1 0.1. d(':!. (Til. ml. ele. H..

(65) o. sulf8rico concentrado.. :::~·:C!. triplicata. e. rfI J n ". Esta solucào foi. Após. este. as m&dlas analisadas. aquecida. período. ~. 100. a. estat~sticamente. pelo.

(66) Esquema 1: Procedimento. no. dE.'. carboidratos s~lGveis de H.. vastatrix.. 100 mg de urediniosporos de H", vd_-.::t.a·t:r·i.1(. oerminados ou nào sobre fnpmhi'- <:;·tr·,i,}!:~. cl E' c: c,l ócl:i o. c oro i::)1. Cunt:.l'- :i.. (:'!D. +. f.,",. Macerado (Carbu. E>:tr'" ?~,. 4.. Cpntl'-. 1. OU rnq. r,'. em Ó, j,. +.. + N2. (}. lU In1 dt? LtEt· 1 ::::-, 1 H E :?4 h. :2. E: \l c:\ D. () f~ ê::'; C~:. ij () E> t,(. b ~. Et.D!..·1 EC)'.>:: :l :7:' '" 1 FI e :'?4:. tij t.(!:,tc'. t:'1ll. ~:;1. Fraçào LiDidic3 de /l.l- ~/riw<;tttt:r· i ) (. C"·. ~J. E>: 'tt·-·.. -:'-. '.,:-. l"'iIl. PI(JLtE:\. 1 P, 2·Q, h Cf.-?ntx" :SO: 1 ::~OOO (J. Carboidratos. EVi':tp.. {2,j u::éte. 1 ml. Carboidratos So10veis ?~t':J t ~ i::'\. E: \/ é;~ Ft C') I". i';\~: ;:~ C). {:;j U~:",tF'. p/. Sol6v~is. r'/ 1. c:n"o+óf'ni:Í.. D. m}.

(67) 3.6.3. Quantidade. -t.qt.01. ObS€:?I~vadc!5:.. cacboi dl'":r.'\t.O'.".:,. df.:?. em uredin*osporos germinados e. germinados de H.. vastatrix.. l () ,. et. i:tnO 1.. C::'-. temoeratura ambiente. centrifuGado. por. I.. "t. Ap6s este perlodo,. 15000 9 por. 30. ffiln. Cf. foi evaporado a em. 1 m1. atrav~s. _J. u (-:'. f·':t. ~O. E:{ r-{ c'. '! J.. f~(). .. I;?. c:~u.. ,::; r", {... l,. -r. I.. ... i-::"{ Li Cr. c. 1 c:! , ... 1 í(};:':'::. I··. r-. J. I. ;:":'! {ff " i' ". ,. \. f'. da l'eaçà3 com antrona.. A,·,. F.'. ._1. i"::. 1 :;' '.. '). amostra. nm. da. foi rea~ào. m1. feita atravês da ffipdida da entre 0.1 ruI. absorh~ncla. da soluçào que se queria. a.

(68) 10 . m:\n. 100. 'Tc:.clo';;. tr-:i.pl i. F,'ífl. FJcl. CiJtiéi. 3.6.4. Carboidratos de. infecçao. pare~e. de dE?. 13.1 i c: i n ~:;.. 5. ,!:7. c: o: J E-ri t. (J. algu~as. vastatrix evidenciados com. H,. lectinas fluorescentes. ens-:t for'm:i:. de. D. l.r!. Triticulll CC<fí"í. ~3t. ".

(69) Foi. observada a possivel. llg~çào. de. CDn-A~. nàc'C:<. germinados e germinados em àoua por. [: no. (,:'(f{. com. 0,2 my/mI. de lectinas f100rescentes por. com Cun-A foi. centrif0gados vezes. novamente. acrescentado. (1000 9 por 5 min). d(:='. e. ::::~. com tampào barato 10 mM pH 6,5.. epifluoresc&ncia MPZ2 em vàrios comprimentos de onda.. Para aferir a especificidade da ligacHo.. as. de carboidratos especificos para cada lectina e observadas novamente ao microscópio de epjfluoresc0ncia.. WGA, uma soluçào de N-acetil-B-glicosamina e para SBA. solu~ào. uma. de N-acetil-B-galactosamina.. ~::.c' q u:i 1'1 t.. not ,oi ç: i'\n::. e. pouca fluoFesc0ncia,.

(70) (++). m~di2. fluoresc0ncia,.e. incubados. (+++. ~obre. membranas de. D f) C). F:::~,C. \11' CI.,. 1 (). de. epifluorescência.. secç0es de folhas do. HS. lêminas foram trat,adas. (0,2 mg/ml). soluçó?S. das lectinas ~. tampào borato 10 mM,. oH. epifluorescencia.. u. E\ \'",. t: (é', ir:i.. L' Ir'. mr:: n t. C'. ca~?pitc. 6~5. vezes. por. 5 min. o observadas ao. CC'I,:. mlclos~6pio. de.

(71) 3.6.5. Extraçào. ~rediniosporos. de" proteinas de. germinados de H.. vastatrix.. proteinas urediniosporos. de. H.. cet.Ôni do. a. partir. di':'!. +cri. vd:-:ta·t.ri)t. é:l f·,:'. urediniosporos. nào-. CO.. funQo foram macerados em almofariz 1 1 clu:i cio D. ressuspendidos o!:::.t:i do. em. acetona gelada. u. miO,.. e estocado a. 1H. (-18. t. Ci-'. i. i:'<.1. +oi. e:,. em temperatura ambiente,. sob. v~cuo.. ··7 ~. C". r::~ :~. ~". .. :r. 7,0 e 8,5 e tampào Tris-HCI pH 8,0 50 mM,. 100 mM,. 500 mM e. 1 M.. +cfi centrifuQado. precipitado. por. 20. min. a. 15000. 9. e. o. com sulfato de amOnio a 50 % de. sobrenadante satura~ào. e.

(72) n :i.ncul:);:~dCi. por·. 1~~:. de. tampào. dializado. ,,:{.<:}. c.. o. precipitado foi. recolhido por. a 15000 a por 20 min e ressuspendido em 0.5. centrifugaç~o. rol. h. Tris-HCl 50 ruM. contra. 1. o. elE:. pH. 8.3. destilada. ~gua. h. obtido. t.Cit i':i 1. Para a. por. quantificaçào de proteinas 0,1 ml da. com 2 % de carbonato de sódio em 0,1 N de NaOH e 0,1 % sulfato Esta. de. cobre em 1 % de tartarato de s6dio. mistura. ambiente. foi. 10. de. potássio.. min. e em seguida misturada viGorosamente com 0,1. {\. foi. mI. c::c:w. espectofotbmetro. c\. 7~'!O. rim.. Como. padrào. utilizou-se. foram feitas nos. tamp~o. Tris-HCI 50 ruM pH 8,0 com a. adi~ào. de EDTA. 10~. 30,.

(73) Mercaptoetanol 0,1, SDS e. Oi I.. 1% de B-Mercaptoetanol.. Tampào Tris-HCl 50 mM pH 8.0 + LUTA 50 mM + SDS 1 % + B-Mercaptoetanol. 1 % também foi. utilizado para a. extraçào de proteinas após a incubacào por 1. C",. 12. 24 h. e. a. C de,. 4. recuperaçào e. 100 mg de pó cetbnico.. quantificaç~o. de proteinas.. dE.;:>. prot.eínas. "sol üvei s. ureelíníosporos germinados de H.. 24 h sobre membranas de co16dio com. 61e0. de. ele. vastatrix. para"Fina. a. {). foram solubllizadas em centrifugadas. liquido. por. 5. min. precipitado. 5000. carborundum.. ~. por 3 ve2es.. f'1f:?:r-c dr)t00',t éü-, o 1. f:'?. 5 min. e. u. Amostras de 100. foram ressuspendidas em 5 rol. HCI 50 mM pH 8,0. ror. o. f{)i. acetona oelada e centrifugado a 5000. em. ressusp~ndido. 0. a. mg. de tampào. 50 mM de EDTA + 1 % de SDS e o nlant:icL:;\~:, E, 4 r~ por L? h. ~". do. ôl ti. 9 iflC:J. Tris-. 1 % de. B-.

(74) Fessuspendido em 0.5 ml Tr i. (~.·-+-lCl. dp. tamDào dC2.

(75) 4_. RESLJL.-r'(~DOS. e. diferenciaçào de apressOrios. ~;:,.obre e>~Ogenos. àgua e na presença. c: omp O!;:; t. C') Só·. •. Amostras de urediniospoFOS de H. C.1 F.'. concentraç6es De. Que a observada para urediniosooros lncubados em aguB.. o !' (lO 1 nào. CJ ./. 1.. ~. alteraram. 2. taxa média de germinaçào de H.. ao observado sobre àqUB. (Tabela 1).. para. :t ncuL'é',dc!<:,-.

(76) 1:. Ti:d:.·'[cli'.'1. F'C?I'··cF'nt.. ui:'d. \/astat,F':i:x. clr~. ClF'I"m:ír'!tlçUo. pCI-'. i.ncu.bE\c}O!ó.:.. c! F'" U('ed:nlC<i>C'1 U:.': clt;; H. nc! c:::,·cI...u·u F'Ii' ct,n'i:Ü"',,:(. 1.'2 h. (100 % de U.R.). 0mid~. C/::-! {:~:{ (J E'~ r"l' c::r::-;. :::: c:::: ::::: :-.:.:: ::::: ::::: ;:::; ;:::: ::;:: ;:,.. ~ ..- ::::: :::: ::.":.: :;',;; ::::" ""0. ••. .,~ •••• ,-. _.-. ::::: ;::.: :::: ::.:-,.; :::::: :::: ::-..:: :::: ::::: :.:: ::::; ::::: ::::: ~::.:: ::::: :::::. CU!V1F'D~;T(J. _'"!:: :-::::: : ::::; ::;;: ::.:: ::::.. ~.;;:. ::.:: ;.::: :::: :. DILU}Ç~if:J. :1./ :I. (). :l. F:XOhENC.I. ~; ~::. . c E\ r" Cr ~::. E?. ::::::::: !t. O, 1 t"'i. 1/ J 00. ~::. (:!~. .<'1·,0) b :?·q,6. (::!:. :2,~:i). 1 ~:.;.~". ::::~. 1.:>. ~:.::.'. ( ·,t". ). 1'/ , (> l,,::.~). (+. (''-:~.'. ~;/:' (! ). b. b <:;; 1. é;, c: t (}~, 1 1"1. C) ~=.; F'. ~;?~). (:~:. , (). 19,0. J \:). :::!;, o ). (+. :1. ~ ~"). :i,,0). ( +,. ~~:; ~ t) :~.!'. () .>. c: P~rn i. l.lI-!l {). d{). (:!::. O,:t {J/ml. (),~5). (+.. l·····r·íDnE,nol 1:1~) uI/rnl. .-1--. G}. i c:: c)~·f'i :lo ~,O I'!. () !\. (.-t.. r,'). n. O. .~.. ,,:". !I. ... .'. 4. O). .'. ,.. ~~. i, \ "-','. /1. \::~. "-;-". ;::~. :,_. '....'. ,,:::. i), ~::.f ). .'.... j. .( "-;r". 17" O. 1 ::., ., ::\. () ~t. ••••. ({- :::" U:>. ri ("...)!. Sulf.. Cêlc::io. 0,1 M. 0,6 (+. 0,5). ~. /! ;\ (: .+. :'I? ~ i.~} ). ,.~. \,j. ;::;l...tJ +" CC!:H E: (},:i !...!. L. ~~:,~ ~ (). (+. .I.. ••'!\. '?~O). (~.~:. .. :~ ',,'. ():- ~~:j). (+.. ~?. ,i. O). d ~~!t (). 1 ~(i uI l/n:!.. (+. j) E' ~,; t. i :::~:. ::;: ::.-::. J, ;::, ). (+,. ::':~ ~. ;.:.:,;). ~ .. !. J. 'l. () ). 1':), (I. ?iC]lJc:\. ;-::. (~:. s ~ (). l}_ ~ ~::t. J , {:). l~O). (±. 1 "'l c! i::(. ~::::. ::::;,::;; :::.; :-;::. ~;:: :::::::~. 2~O). ::::::;: ::;:: :;.:::::: :::;:: ::-:;; :;:;; :::::::::-.:. ;::::_:.::~:. ~,,.{ f> d i Er~:::· c. C) rn in {:.~ !.~~ IH a J f::! t l- r~=t. , nivel de 5 % (Teste-t). :::::::.::: :;::. ::.::: ;:;::: ::::: ;::;:::::: ;::: ::::: ;:.:',. : ;::.:: :;::; .::': ;:::: ::::: ::::: ::::; ::;:: =:::: ::::-:: : ::::: ::::: ;;:: :-:;: :::;. "M_ '0'0. ...... ~, • • • _ .. _ •• _.

(77) t.t rfi ç\. i. .\. significativamente. clu. mE?nc)l~. urediniosporos mantidos sobre. Observbu-se. concentra~aes. testada~. ~qua. destilada. (Tabela 1).. total. (dados nào mostrados na tabela 1).. {- 01. germinaçào observada foi. nas. u1/fül. (ú:::.i :, O. (F:t q!..wa l).. de. 32~3. ~.. amostras de urediniosporos de. Z). ~. O~l. {[:l/Inl. (h4,:S. hd~,. '.:'~). c' 0,01. H.. ul/ml. (1"'1:,~~;. ., ,. / .. .J.

(78) ·. t .. 70. q. ..--... ~ o. ""-"'. (fj. O L-. O. 40. (j) (l). .<1). ~O. L. o... <t. 10. 1. 1/10. 1/100. 1/1000. 1-Nonanol \ul/m!). Fjgu~a. 1: Percentual de u~ediniosporos germinados de H. vast ai: r i:< que d i f'el cn c i êll r am ;-:tP 1'- esséw i os ap ÓS 12 h de incubaçio na presenç~ de diferentes concent~aç6es de 1-nonan01 r. 1.

(79) diferenciaçào. ar-ti f i ci ai. de. Vél.5t:ó.. t-.ri .'x'. de. i nfeq;:ao. de S:.Obl'''(?. s.. o ). nc li L, é.ii~. :~o. +c)i. ." l.. ":;l.. _ ~,. .,. (}. ,_1\ .. >. .' ". ". confian~a. :~:~.i~.. , (>. i. C.\i.li:i. tI/ ;. .. !'. 1.. ...•.. ("':. C~. !i. .... ,.. "<. f.~:,.. ":;' L .... '\. ...•. ". ~.. !. "/ ... '.. ; t· o-. ,. \. ~-. i. ! 'i. ...... fi'; ~.:~ r t~ ". n iJ D. (Tabela 2) ... formados soore folh3 de com ranhuras. pol i E!:cti. (:::, ). p. co16dio com. d 61~o. de. i"PliO. sub-estomàtica estào mostrados na Fioura 2.. o. germinados que diferenciaram. aprpss6rios~ UiTié.\. C:~.

(80) 2:. Perc~nt~gem. de germinac. H. :~:. võ's't2;·t:r-i. 11. c,c.nbr··q. ::-.: ::::; ::::. :::; :.::; ::::-..: ::.:: :::;: ::::: ;:::: :::;: ;:::: :::: ::::: ::::: ::::: ::::: ::::: ::::: ::.:~ :::. ::::: :::: ::.:.:. :::: ;.:;; ::.::: ':::: :::.:: ::::: ::::: ;:::: :.. .de. ur2d~niQs~orQs. ti.i +Fl"E'rd:c':c;. . ::;;: :::: :'::: :::: :::::. :,~::. ;';;. .... ,,: ::::: ::;;:. "'lq·'nt·: \:":.. ::~::. ::::: .:::: ::::. PERIODO DE INEUBACAO ",. .,.,'. I. c~. (. h. 1 I. :'. .+ !: ) :!. 1 Li :/. ,,). ~:.; ). :l. ( ._. -I. ~. :,~: j. (} .. (. ... ..> ). , ,(:'-.l. ":;'. ( 'l' ..... "'?. ". :: t·..'·. FoI h,:;, de C,':l f CE?1. 1" Ct. :t Li (. +.. :';? :I ,. :/ O. .-'~,. 01::. !í \::). ). (. + .q. ~1? f.). --f. CCjrn. (. Co 1". .~. com. (nC!O. .,. ,i ( +... Col". .[. .. j.. !,:,E'1n. DIEu. ... 1 .1::. ., .~. l='c31 ". lê .:::~. •....r. ( -I-. ":!'. ''':... : ' •.!. ~,. :1. y. ~~:. 'I. () :>. (. " ' (}. ". ·t. r). P~.. o,:". ~SO. H. ). ( + .. .... .~:;. ~:~:~~). (+ ...... 4. (. ". .. ~. ~. (. ~i". 1.. \o ••'. :>. (. I. ( j }. ":! ~. .... t:~ j. ,~::>. -} .. ..:. ,. ..··.i. ..::\{::}. (::~. , () ). Ci. ::::: ..::... ~ >. .:::~. r·... .L •.. /~. .....,. , .... ). ~!. ,I:!. :r + '".-. (} ... :~. ~?::':'~. 'I. ,. (. ... .. + ....' /) ). ... 1 ::~~ ~) (+ 1. O >. >. L,. \. oi:: .1.. ._.~. ). ~:.:.~. (} ... b. ,. 1 li , () ( ~t- 1 '! 1 ). ~.. ~~~ :~~t. t:~. (. + 4. '. ." ~. :~::l. n. !::;.~. >. ... )' ). ::~~ FJ~,. (::~~~. ... :~:;~! (». ================~========~====~====~===~~~~~,. 1'1r:-d i a~::·. dE'. t'1f:~C}:l. C Dm. cl E:''"'\/J. D p.,o."cli' i~C) Pri t I'" e p "H' E:'r! t f?~:; '1. c:. ,,:1 HH:":'~"·{i[f::\ 1 (~:t t· i,,, ~I eiO c Ci 1 t In d ~::; V F~i' t i c i,"; i '"' n ;':(D cf:l -{ er E,stõ,ti<:::ticé:\íflE'fl.t.C ,:':\ nivpl elE' :':i ~': '(·Tc\!?ot.e···t)n. i". ~";. ~::; I~ Pp f.:,t i ÇÓF:\~~, ~. C:'ín.

(81) "'..1. li. LJ(·E-:d in j. ~::. (-:.:.: p -l.": c~. cJ~~~.pC)I'"·c;. ':. ~:~ T. ). ~I. ( LJF;::> ~ c':\P t· E' ~:.':',i.':fl'·. "1::. \Jb Cj. :I C<. t c. fn ~:~.~ t·. i C Ei ~::. polie s tireno com ranhuras. [.! ~~.. \ (i F'. ). (J E:.·!···· in i r··1 <:.~. t. i \/c~ ;::.' \/ C:' ~~· i c:: LI::' d !:',. ('TE). ::. ~::ul::<·····.

(82) o que nào foi. sIgnificativamente diferente. do. para os urediniosporos mantidos sobre membranas df:::. CJ E' Ir- fi< :í_. do. r-I c~ 1'- c: rn. este valor nào foi. ~. observado. estatistlcamente diferente. nas amostras mantidas. poliestireno com ranhuras. (4~,3. %).. Para os urediniosporos. germinados sobre membranas de col6dio com óleo de parafina o. percentual de germina;ào. m~dio. observado foi. de 28,0. %. Morfoloqicamente sobre. todos. os. s~portes. com tamanho similar ao tamanho. ~3cht-. colócliD. pol i F,<,,-t:_:i. e. sem óleo e sobre. ~gua,. Ir-. el c:,. cno h. c!F2. i ncubaç:ao d 1. -f Cl i u_ r. -. estatisticamente.. desenvolveu vesiculas. sub-estom~tica. dF2. foi. ele 36,0 % e sobre. membranas de colódio com óleo 30,3 % (Tabela 4)..

(83) diferentes suportes.. =====================================================~~===. FERIODO DE. SUF'[;hTE DE GEF:;:f'I J N{iç:l~iiJ. 12. ,. ( --l-'. Foi hi:.'1 ele Ci:ifer"i 1'''0. FoI... F'Dl.. ( -I--. Co} . com f'nf"O. ( .-t-. _... "'-, ,1::. ... ~:). }. (. (. +. ( -I--. (} ). (}. .. (>. ,O. ,. O () ). ,. (. + -. i). >.. , () 'I. :~~~. :~:~. :'. 1:::: + -_. .'1 , ...• ) \. ) + - ::? . O. + O :' O ). ~,~:F5. (+ ...... ::) (. ,r"f. ( --t-.. __o. .{.. ,O. + 1 O) ~. ~<;. /~ ). , é~. :::::. .. C',,,' ). oi::. (. +-. + ..... ..::. ( -I...... 9 :l. (. ":1'. ,. 1 , t:::' \...! ). (. -+-. "7 I. ~. ,. h. O) ê::'t \:~. , ~) ). , --, , ) ''')'. ~). .,). c.'t. C;. .: +-. ,. 1 {) .q ( + 4 ~ 1). C'). 4\). 7 6 ( "t·. . o;. b. , -._'". , ~~~ ). ~~:~. 4:? , \::.\. ",:\. H. '''i. \. .,;,. ... ... (. ,. r::- '\. r.o\. _.,. ""1 , -... (-J. .,::.. -:,. C~· - ) ~,}. ,. , (> (> ). ( -I-._.-. -:~. , (> ). O +- O ~. ~. O :' O (. El 1 ... , ....'. O (> ( + O, O ). O O (. (. (}. 1. 4. O !' O. Co1. sem f.JIE'D. :? ... - , t-). cC<in. F:ó'~nhur ;:;\~:;. O Ü .. O . c1 ). Cf. ~;·E'm. f;:i:",inhul'" ê~ c.;. INCUBAÇ~O. c~. .L.. ::~[1. (. +. '-'. -I::.. .. ,. "'1'. .~:\. ~:.:.;. ,O ~. ). C. tJ ). ===============================~==========================. de 3 repeti~ae5, desvio padrào entre parentesis com a mesma letra, em colunas verticais nào diferem estatisticamente a nivel de 5 % (Teste-t).. M~dias M~dias.

(84) Tabela 4:. Percentagem de apressOrios de H. Vt~~" J. cu:l. ü !:",uh '''P~;'· t. ulni\\. :1 diferentes suportes de germinaçào.. dE~S-f.?riVO 1 \lel" ",\m. c E,. ===============================================~==========. PERIODO DE. SUPURTF DF m::::Ht'l I N(!(j':iD. :::::. INCUBAÇ~O. 1 ~:?. C). h. r.'~. ( ±-,. O? () O !' O). (+ -._.. O,. O. (). O). ~-. (. -{,. --. () . ~ () .. },. ~. ~. (). O). " + ...... ~. ). , ::.. ,~. ~. :~; ). E\. Perl". Hi:~nhur-- c{~"-. FoI. CDfO F:'::inhuy- d ~:;:,. r-I '-' !' O. O!, O. S-PITí (. +. (l. ~,. O). (. -+,. O, O ( -I-. O!!. O). (). , O). C~. (. !' + (,-) ;.. ,. O () (. + O, O). ;'. ( + _... :~:~. (. ). () ). (. O~ O (l) + --- O ~. ~. b ,O 4 ;. O). :~)\S. ;' \~~\. () ). ( -j-. ...... é:'\. Co1. soem OlE'o. Co}.. Olt:-?o. CDm. (> (. , (>. + O, O ). O, ( + O,. ( -I-. O , O). +. O !' () O !' O). O () ). (. (>. O ;. O. O~ O. (. +. (+ ...... () ... ,O). 1 ~? :'. 1:."). ,,). ~,;. "r. ,. (. +. , ::::~. (} ;.. ::i). _o, ~~;() :' .::' ). ( -I-. b. :t ;. ::,i). =====================~===================c~====~:=========. Médias de 3 repetiç6es, desvio padrào entre pBrentesis Médias com a mesmd letra, em colunas vegetais, nào diferem estatisticamente a nivel de 5 % ~Teste-t)..