TÍTULO: CARACTERIZAÇÃO DE ESCHERICHIA COLI PRODUTORAS DE BETA-LACTAMASES DE ESPECTRO ESTENDIDO (ESBL) ISOLADAS DE PSITACIDEOS
TÍTULO:
CATEGORIA: CONCLUÍDO CATEGORIA:
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE ÁREA:
SUBÁREA: Medicina Veterinária SUBÁREA:
INSTITUIÇÃO(ÕES): CENTRO UNIVERSITÁRIO DAS FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS -FMU
INSTITUIÇÃO(ÕES):
AUTOR(ES): BEATRIZ ALVES DE ALMEIDA AUTOR(ES):
ORIENTADOR(ES): MARCOS PAULO VIEIRA CUNHA ORIENTADOR(ES):
COLABORADOR(ES): TEREZINHA KNOBL COLABORADOR(ES):
1. RESUMO
A criação de aves (psitacídeos) como animais de companhia é comum no Brasil; justificada por hábitos culturais, facilidade de aquisição e manutenção destas aves em ambiente doméstico, incluindo áreas urbanas. A saúde desses animais depende da adoção de manejo adequado e tem como principal desafio o controle de infecções intestinais por Enterobactérias. Este trabalho avaliou a presença de Escherichia coli (E. coli) em amostras de suabes fecais de 178 psitacídeos mantidos como animais de companhia. Foram identificadas 63 estirpes de E. coli, dentre as quais 6 (9,52%) apresentaram fenótipo de resistência estendida aos β-lactâmicos (ESBL). Estas estirpes foram positivas na PCR para o gene blaCTX-M, e o sequenciamento mostrou
que todos pertenciam à variante CTX-M-8. Estes dados confirmam a presença de E. coli ESBL em aves de estimação e alertam para o risco zoonótico de transmissão de patógenos resistentes. Considerando que essa espécie não faz parte da microbiota dessas aves em vida livre, nossos resultados reforçam a hipótese que o cativeiro tem um impacto negativo na microbiota dessa família e, ainda, que há um risco zoonótico na manutenção destas aves em ambiente domiciliar.
2. INTRODUÇÃO
Psitacídeos estão entre as aves de companhia mais comuns, devido a docilidade e inteligência apresentada por essa família. Na natureza, a microbiota entérica dessas aves é composta exclusivamente por cocos e bacilos gram-positivos, sendo a colonização intestinal por bactérias gram-negativas um fenômeno associado ao cativeiro e condições sanitárias deficientes (MATTES et al., 2005; SAIDENBERG et al., 2015).
A manutenção destas aves em ambiente doméstico certamente representa um benefício social e psicológico aos proprietários, mas pode implicar em um risco de saúde pública, quando há colonização intestinal por cepas de Escherichia coli (E. coli) virulentas ou multirresistentes (GIOIA DI-CHIACCHIO et al., 2016; PONTES et al., 2018).
A resistência antimicrobiana apresentada por E. coli de origem humana e animal tem evoluído para um quadro preocupante nos últimos anos. Estima-se que 60% das doenças infecciosas humanas são transmitidas por animais e que uma a cada cinco infecções causadas por bactérias resistentes tenha relação com ingestão de produtos de origem animal ou contato direto com animais de produção ou estimação (CDC, 2013).
Os β-lactâmicos representam a classe de antimicrobianos mais utilizada na medicina humana. No entanto, vários mecanismos de resistência aos β-lactâmicos foram descritos, com destaque para a produção de enzimas denominadas β-lactamases. A produção de β-lactamases de espectro estendido (ESBL) têm grande importância clínica, pois confere resistência às penicilinas, cefalosporinas e ao aztreonam (SILVA et al., 2013). Estirpes de E. coli com fenótipo ESBL podem ser isoladas do ambiente, de pacientes humanos em infecções nosocomiais ou comunitárias, de alimentos de origem animal e de animais de produção ou de estimação, incluindo cães e gatos (SILVA et al., 2013). No entanto, a presença destas bactérias em psitacídeos selvagens e exóticos mantidos como animais de companhia tem sido pouco investigada.
3. OBJETIVOS
Os objetivos deste trabalho foram: pesquisar a presença de E. coli em fezes de psitacídeos mantidos como aves de companhia; identificar e caracterizar os determinantes moleculares de isolados com fenótipo de produção de beta-lactamases de espectro estentido (ESBL).
4. METODOLOGIA
Amostras. Foram coletados suabes de fezes de fundo de gaiola de 173 psitacídeos mantidos como animais de estimação na cidade de São Paulo, no período de 2013 a 2016, incluindo papagaios (Amazona aestiva), calopsitas (Nymphicus hollandicus), periquitos australianos (Melopsittacus undulatus) e agapornis (Agapornis spp.)
Isolamento bacteriano. As amostras foram pré-enriquecidas em água peptonada e semeadas em ágar MacConkey, incubadas a 37°C por 24 horas em aerobiose. Após o isolamento as colônias foram identificadas por série bioquímica, utilizando o Kit EPM, MiLi e citrato (Probac®). Todas as colônias com padrão bioquímico de E. coli foram re-semeadas em ágar TSA para a extração e confirmação por espectrometria de massa, MALDI-TOF.
5. DESENVOLVIMENTO
MALDI-TOF. A proteína bacteriana foi extraída de acordo com o protocolo de extração por etanol/ácido fórmico. O sobrenadante foi então retirado e submetido ao MALDI-TOF (Bruker Daltonik). A identificação foi realizada pelo software BioTyper 3.0. Os critérios interpretativos padrão de Bruker foram aplicados: pontuações ≥2.0 foram aceitas para atribuição de espécies e pontuações ≥ 1.7 mas ≤2.0 para identificação de gêneros (BIER et al., 2017).
Suscetibilidade Antimicrobiana. A suscetibilidade aos antimicrobianos foi avaliada pela difusão de disco (Método de Kirby-Bauer), utilizando 14 antibióticos (CLSI, 2013). O teste fenotípico de detecção de ESBL foi realizado utilizando-se os discos de cefotaxima, ceftiofur e amoxicilina+ácido clavulanico (inibidor).
Detecção molecular dos determinantes de resistência antimicrobiana. Os isolados com fenótipo sugestivo de produção de ESBL foram submetidos à Reação em Cadeia por Ação do Polimerase (PCR), para pesquisa dos genes de resistência blaTEM, blaSHV e blaCTX-M e sequenciamento, segundo protocolo descrito por
DALLENNE et al. (2010).
6. RESULTADOS
A identificação bioquímica, confirmada por MALDI-TOF, resultou em 63 estirpes de E. coli. Das colônias isoladas, foram encontrados 6 (9,52%) estirpes com fenótipo de ESBL. Na PCR, os seis isolados foram positivos para o gene blaCTX-M, e o
sequenciamento mostrou que todos pertenciam à variante CTX-M-8. Estas estirpes foram isoladas de calopsitas (n=4), periquito australiano (n=1) e agapornis (n=1).
Dentre os 6 isolados produtores de CTX-M-8, apenas um isolado de calopsita não apresentou multirresistência (resistência a uma ou mais drogas de 3 classes antimicrobianas distintas).
A resistência estendida aos β-lactâmicos foi recentemente reportada no Brasil em um estudo com 94 calopsitas, sendo 9 (10%) das aves colonizadas por E. coli com perfil de resistência múltipla e positivas para o gene da betalactamase blaTEM. Os
dados do nosso estudo revelam uma taxa de isolamento de E. coli superior (35%) aos observados por PONTES et al. (2018), provavelmente em função de diferenças metodológicas (pré-enriquecimento dos suabes). No entanto, os dados se assemelham em relação ao percentual de estirpes com fenótipo ESBL (9,52%). No entanto, a variante de betalactamase encontrada em nosso estudo foi do tipo CTX-M-8.
Até o início de 2000 as ESBL mais prevalentes em enterobactérias eram as do tipo TEM e SHV. A partir de 2000, as enzimas da classe CTX-M emergiram em todos os continentes e se tornaram as ESBL mais prevalentes em isolados de animais (LIEBANA et al., 2013). No Brasil, existem poucos dados epidemiológicos sobre a prevalência de CTX-M, mas a variante CTX-M-8 já foi reportada em isolados clínicos humanos e em aves comerciais do estado de São Paulo. Este relato é o primeiro sobre a presença de E. coli ESBL CTX-M-8 em aves de companhia.
7. CONSIDERAÇÕES FINAIS
Nosso estudo mostrou que psitacídeos cativos podem estar colonizados por E. coli multirresistentes e produtoras de CTX-M-8. Levando em conta que essa espécie não faz parte da microbiota dessas aves em vida livre, nossos resultados reforçam a hipótese que o cativeiro tem um impacto negativo na microbiota dessa família e, ainda, que há um risco zoonótico na manutenção destas aves em ambiente domiciliar.
BIER, D.; TUTIJA, J. F.; PASQUATTI, T. N.; OLIVEIRA, T. L.; ARAÚJO, F. R.; VERBISCK, N. V. Identificação por espectrometria de massa MALDI-TOF de Salmonella spp. e Escherichia coli isolados de carcaças bovinas. Pesquisa Veterinária Brasileira. p:1373-1379. 2017.
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Acesso em: 21.06.2108
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GIOIA DI-CHIACCHIO, R.M.; CUNHA, M.P.V. ; STURN, R.M. ; MORENO, L.Z. ; MORENO, A.M. ; PEREIRA, C.B.P. ; MARTINS, F.H. ; FRANZOLIN, M.R. ; PIAZZA, R.M.F. ; KNÖBL, T. Shiga Toxin-Producing Escherichia coli (STEC): Zoonotic Risks Associated With Psittacine Pet Birds In Home Environments. Veterinary Microbiology. Vol. 184, pp. 27-30. 2016.
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