DISCIPLINA: BIOQUÍMICA DISCIPLINA: BIOQUÍMICA
PROFESSOR: DR.MARCELO SANTOS SILVA PROFESSOR: DR.MARCELO SANTOS SILVA
RELATÓRIO DE PRÁTICA Nº 01 - CARACTERIZAÇÃO DE
RELATÓRIO DE PRÁTICA Nº 01 - CARACTERIZAÇÃO DE
ÁCIDOS NUCLEICOS E!TRAÇÃO DO
ÁCIDOS NUCLEICOS E!TRAÇÃO DO DNA DA BANA
DNA DA BANANA
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"AMILLE ARA#$O DUARTE
RELATÓRIO DE PRÁTICA Nº 01 - CARACTERIZAÇÃO DE
ÁCIDOS NUCLEICOS E!TRAÇÃO DO DNA DA BANANA
Relatório de aula prática
nº 01
apresentado ao Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia –
IguatuaCE !IFCE", curso de
#icenciatura e$ %u&$ica, 'º
se$estre, co$o (or$a de a)aliação parcial da disciplina de *io+u&$ica
I%UATU-CE &01'
SUMÁRIO
#I-T. /E FIR.-...iv
1 I2TR3/453... 1 6 7.TERI.I- E 78T3/3-... 2 61 7ateriais... 2 66 79todos... 3 : RE-#T./3- E /I-C--53... 6 :1 7aceração... 6 :6 -olução de lise... 6 :61 /etergente... 6 :66 -al... 6 :; *an<o$aria... 7 :' =lcool... 7 > C32C#-53... 8 ; REFERE2CI.-... 9 LISTA DE FI%URAS
Figura 1 7aceração da ?anana e preparação da solução de lise !sal e detergente": Figura 6 7istura de ?anana e solução de lise no ?an<o$aria: Figura : Res(ria$ento da $istura no gelo> Figura > Filtrage$ da a$ostra> Figura ; @recipitação das $ol9culas de /2.;
1 INTRODUÇÃO
7uitas pes+uisas de *iologia 7olecular co$eça$ co$ a eAtração de ácidos nucleicos 3 /2. 9 u$ dos ácidos nucleicos +ue constitue$ o $aterial gen9tico da $aioria dos seres )i)os . sigla /2. signi(ica acido desoAirri?onucleico, esta $ol9cula (oi desco?erta por )olta de 1B'B por o<ann Friedric< 7iesc<er 3 /2. te$ papel i$portante para os seres )i)os, 9 o responsá)el por todas as in(or$açDes gen9ticas necessárias para criação de u$ organis$o, ele controla toda a ati)idade celular +ue 9 trans$itida de geração e$ geração
3 /2. 9 (or$ado por nucleot&deos, e cada nucleot&deo 9 (or$ado por u$a $ol9cula de desoAirri?ose, u$a $ol9cula de (os(ato e u$a ?ase nitrogenada +ue pode ser prica ou piri$&dica .s ?ases pricas encontradas no /2. são adenina e guanina e as ?ases piri$&dicas são citosina e ti$ina, sendo +ue a adenina ligase G ti$ina e a guanina ligase G citosina atra)9s de pontes de <idrogênio
Hoe os estudos para co$preender e aper(eiçoar estas $ol9culas te$ crescido rapida$ente, pois suas aplicaçDes se tornara$ in$eras para a <u$anidade
2a eAtração do /2. pelos $9todos con)encionais, a lise celular li?era as $ol9culas e$ u$a (ase a+uosa +ue 9 separada dos restos celulares por centri(ugação .s prote&nas são re$o)idas da (ase a+uosa por sol)entes orgJnicos !(enol, cloro(ór$io" 3 /2., +ue per$anece na (ase a+uosa, 9 precipitado co$ etanol e, posterior$ente, puri(icado e suspendido e$ u$ ?u((er ade+uado
2este tra?al<o la?oratorial ?uscouse )eri(icar a eAistência de $ol9culas de /2. e$ a$ostra de )egetais !?anana" atra)9s da )isualiKação a ol<o nu tendo co$o ?ase u$ processo se$el<ante ao descrito anterior$ente e utiliKado pelos cientistas +uando co$eçara$ as pri$eiras in)estigaçDes so?re o /2. . eAtração 9 realiKada ?asica$ente utiliKandose detergentes, sais e álcool
& MATERIAIS E M(TODOS
3 eAperi$ento de eAtração de /2. da ?anana (oi conduKido no #a?oratório de *ro$atologia do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia – IguatuaCE, aos dias 11 de $arço de 601;, para os alunos do 'º se$estre do curso de #icenciatura e$ %u&$ica so?e a orientação do pro(essor /r 7arcelo -antos -il)a
$a das raKDes de se tra?al<ar co$ ?ananas 9 +ue elas são $uito $acias e (áceis de <o$ogeneiKar @ara realiKação eAperi$ento utiliKouse os seguintes $ateriaisL &.1 M)*+,) V/,),) • Midro relógio • 6 ?9+ueres !6;0 $l" • Funil de Midro • @ro)eta !100 $l" • *astão de )idro A*,) + R+)2+3*+ • 1 ?anana • =gua destilada
• 2aCl !sal de coKin<a"
• /etergente para louça
• =lcool et&lico a B;N gelado !10ºC"
A4+5,
• *an<o$aria !'0OC" • *alança anal&tica • @apel de (iltro
• *andea de isopor co$ gelo
• Espátula
• @isseta
&.& M6*/
Co$ o auAilio de u$ )idro relógio e u$a espátula a$assouse u$a ?anana at9 a $es$a (icar $acia e <o$ogênea E$ seguida pesouse ;
gra$as de 2aCl e$ u$a ?alança anal&tica, $ediuse '0 $l de detergente de coKin<a e 100 $l de água destilada co$ u$a pro)eta 7isturouse e$ u$ ?e+uer o sal, o detergente e a água e $eAeuse at9 total dissolução
F27,) 1. 7aceração da ?anana e preparação da solução de lise !sal e detergente"
@osterior$ente adicionouse a ?anana a$assada a essa solução rec9$ preparada, a+uecendoa e$ ?an<o$aria !'0OC" por 1; $inutos
F27,) &. 7istura de ?anana e solução de lise no ?an<o$aria
.pós a+uecer, res(riouse rapida$ente a $istura colocandoa e$ u$a ?andea co$ gelo durante ; $inutos
F27,) 8. Res(ria$ento da $istura no gelo
Filtrouse a solução e$ u$ ?e+uer co$ auAilio de u$ (unil de )idro e papel (iltro, adicionouse )agarosa$ente a solução (iltrada 100 $l de álcool et&lico B;N pre)ia$ente res(riado a 10OC
F27,) 9. Filtrage$ da a$ostra
Co$ a adição do álcool o?ser)ouse a (or$ação de u$a ca$ada na super(&cie da solução a+uosa e co$ u$ ?astão de )idro li$po, (eKse
$o)i$entos circulares $isturando as (ases onde o?te)ese o resultado (inal esperado
8 RESULTADOS E DISCUSSÃO
. ?anana por ser poliploide, ou sea, possuir )ários cro$osso$os e$ suas c9lulas, (a)oreceu a )isualiKação (inal do eAperi$ento e assi$ co$o esperado a prática possi?ilitou a o?ser)ação da precipitação das $ol9culas de /2. co$ (or$ação de Pnu)e$Q na (ase alcoólica
8.1 M)4+,);
. correta $aceração do $aterial selecionada possi?ilitou u$a $aior super(&cie de contato co$ a solução de lise e $el<or ação da solução so?re as c9lulas @er$itindo assi$ a li?eração de u$a $aior +uantidade de $ol9culas de /2. e, portanto, u$ ?o$ rendi$ento
8.& S<7; /+ <+
. solução de lise, assi$ deno$inada de)ido a sua (unção de ro$pi$ento da $e$?rana plas$ática e outras $e$?ranas, te$ u$ papel (unda$ental na eAtração do /2., seus co$ponentes !sal, detergente" apresenta$ u$a (unção decisi)a no processo de eAtração
8.&.1 D+*+,2+3*+
.s $e$?ranas plas$ática e nuclear são co$postas principal$ente por lip&dios . (unção do detergente 9 desestruturar as $ol9culas de lip&dio das $e$?ranas ?iológicas /esta $aneira, as $e$?ranas so(re$ ruptura e todo o contedo celular inclusi)e o /2. (ica disperso na solução
8.&.& S)<
3 sal !2aCl" proporciona u$ a$?iente (a)orá)el para a eAtração depois de dissol)ido na água, se dissocia e contri?ui co$ &ons positi)os +ue neutraliKa$ a carga negati)a do grupo (os(ato do /2. .s $ol9culas de /2. passa$ a não so(rer repulsão de cargas entre si, o +ue (a)orece sua aglo$eração
8.' B)3=-),)
. te$peratura ele)ada pro$o)e agitação das $ol9culas, (acilitando a ação do detergente e$ desesta?iliKar as $e$?ranas lip&dicas, por esse $oti)o a solução (oi le)ada a ?an<o$aria . alta te$peratura ta$?9$ auda a inati)ar enKi$as +ue pode$ degradar o /2.
8.> Á<4<
2o ?9+uer podese o?ser)ar duas (ases após o adiciona$ento do álcool res(riado, na parte in(erior (or$ouse u$a (ase a+uosa e na parte superior a (ase alcoólica !so?renadante"
3 res(ria$ento per$iti a precipitação do /2., +uanto $ais gelado o álcool, $enos sol)el será o /2. 3 álcool gelado desidrata o /2., de (or$a +ue este não $ais (ica dissol)ido no $eio a+uoso .l9$ disso, o /2. tende a não ser sol)el e$ álcool e, deste $odo, suas $ol9culas se agrupa$
Co$o o /2. te$ $enor densidade +ue os outros constituintes celulares, ele surge na super(&cie do eAtrato (or$ando u$ aglo$erado +ue precipita unto co$ outras $ol9culas 3s agregados $oleculares o?tidos são u$a $istura e$ proporção )ariá)el de ácidos nucleicos, prote&nas e pectina, u$ car?oidrato presente na la$ela intercelular e no )acolo das c9lulas )egetais
.dicionar o álcool gelado e$ )elocidade lenta auAilia na e(iciência de precipitação do /2.
9 CONCLUSÃO
. aula prática constitui u$ i$portante recurso $etodológico (acilitador do processo de ensinoaprendiKage$ .tra)9s da eAperi$entação, o pro(essor alia teoria G prática e possi?ilita o desen)ol)i$ento da pes+uisa e da pro?le$atiKação e$ sala de aula, despertando a curiosidade e o interesse do aluno Trans(or$a o estudante e$ sueito da aprendiKage$, possi?ilitando +ue o $es$o desen)ol)a <a?ilidades e co$petências espec&(icas
. partir da pratica realiKada (oi poss&)el o?ser)ar a precipitação das cadeias de /2. aglo$eradas na (ase alcoólica al9$ de instigar a pes+uisa so?re a ação de cada su?stancia, agentes (&sicos e +u&$icos, en)ol)idos no processo de eAtração
@ortanto 9 correto a(ir$ar +ue a aprendiKage$ (oi e(eti)a$ente signi(icati)a e a aula conseguiu cu$prir todos os seu o?eti)os
LEHNINGER, A.L. et al. Princípios de bioquímica. 4ª ed. São Paulo: SARVIER, 2006.
7.RI. .2T32I. 7.#.3MICH %7) /+ )*?/)/+ B*+43<2): +33 + /?7<2);. <ttpLSSS?teduc?io?r
Rodrigues, C/2 et al DNA ?+2+*)< 3) )<) /+ )7<) – -ão @auloL /eparta$ento de *otJnica – I*-@ -ão @aulo, 600 pL il – !Ensino de *otJnica"