AVALIAÇÃO DA TRANSFERIBILIDADE DE LÓCUS DE MICROSSATÉLITES EM OITO ESPÉCIES DE
“EVALUATION OF TRANSFERABILITY OF MICROSATELLITE LOCI IN EIGHT SPECIES OF
Sabrina Alves da Silva1; Pierre Rafael Penteado
¹
Graduanda em Ciência dos Alimentos, UFV ²Mestrando, UFV- Campus de Rio Paranaíba ³Professor adjunto, UFV- Campus de Rio Paranaíba RESUMO
Os peixes do gênero Astyanax
e são uns dos mais especiosos da região neotropical. Os microssatélites são um tipo de marcador molecular formado por arranjos de repetições em
nucleotídeos. São extremamente utiliza
da história biológica de populações, uma vez que normalmente geram padrões espécie específicos. Este trabalho teve por objetivo verificar a amplificação cruzada utilizando seis pares de primers para lócus de microssatélites desenvolvidos a partir da espécie
mexicanus em outras espécies de oito espécies do gênero Astyanax.
primer testes de amplificação foram realizados utilizando termociclador com gradiente de temperatura. Quatro primers amplificaram em pelo menos algumas espécies. Quatro espécies mostram padrão de amplificação positivo
bastante polimórfico.
Palavras-chave: microssatélites, amplificação cruzada, polimorfismo ABSTRACT
The fish of the genus of the most specious markerformed by arrangements used for individual identification they typically generate species amplification of primers
Astyanax mexicanus in other loci eight species of Astyanax each primer amplification, tests
get amplification with four primer sets in at least some species amplification pattern for one primer
Key words: microsatellites, cross
AVALIAÇÃO DA TRANSFERIBILIDADE DE LÓCUS DE MICROSSATÉLITES EM OITO ESPÉCIES DE Astyanax
“EVALUATION OF TRANSFERABILITY OF MICROSATELLITE LOCI IN EIGHT SPECIES OF
; Pierre Rafael Penteado2; Rubens Pazza3; Karine Frenher Kavalco
Graduanda em Ciência dos Alimentos, UFV- Campus de Rio Paranaíba (sabrina.alves@ufv.br) de Rio Paranaíba
de Rio Paranaíba
Os peixes do gênero Astyanax são popularmente conhecidos como lambaris ou piabas e são uns dos mais especiosos da região neotropical. Os microssatélites são um tipo de marcador molecular formado por arranjos de repetições em tandem
nucleotídeos. São extremamente utilizados para identificação de indivíduos e no rastreamento da história biológica de populações, uma vez que normalmente geram padrões espécie específicos. Este trabalho teve por objetivo verificar a amplificação cruzada utilizando seis
cus de microssatélites desenvolvidos a partir da espécie
em outras espécies de Astyanax. Foram testadas quanto a transferibilidade de lócus Astyanax. Para definir a melhor temperatura de anelamento de cada testes de amplificação foram realizados utilizando termociclador com gradiente de Quatro primers amplificaram em pelo menos algumas espécies. Quatro espécies mostram padrão de amplificação positivo para um dos primers, apresentando um padrão
microssatélites, amplificação cruzada, polimorfismo
the genus Astyanax are popularly known as lambaris or piabas of the Neotropics. Microsatellites are a by arrangements of tandem repetitions up to six nucleotides
used for individual identification and tracking of the biological history of populations species-specific patterns. This study aimed to verify
primers for six microsatellite loci
Astyanax species. There were tested for the transferability Astyanax. Aiming to determine the best annealing temperature amplification, tests were performed using temperature gradient termocycler get amplification with four primer sets in at least some species. Four species
one primer, with a quite polymorphic pattern. microsatellites, cross-amplification, polymorphism
AVALIAÇÃO DA TRANSFERIBILIDADE DE LÓCUS DE MICROSSATÉLITES EM OITO ESPÉCIES DE
“EVALUATION OF TRANSFERABILITY OF MICROSATELLITE LOCI IN EIGHT SPECIES OF Astyanax”
; Karine Frenher Kavalco3
são popularmente conhecidos como lambaris ou piabas e são uns dos mais especiosos da região neotropical. Os microssatélites são um tipo de tandem de dois a seis dos para identificação de indivíduos e no rastreamento da história biológica de populações, uma vez que normalmente geram padrões espécie-específicos. Este trabalho teve por objetivo verificar a amplificação cruzada utilizando seis
cus de microssatélites desenvolvidos a partir da espécie Astyanax Foram testadas quanto a transferibilidade de lócus Para definir a melhor temperatura de anelamento de cada testes de amplificação foram realizados utilizando termociclador com gradiente de Quatro primers amplificaram em pelo menos algumas espécies. Quatro espécies para um dos primers, apresentando um padrão
piabas and are one type of molecular nucleotides. They are widely of populations, since verify the cross-loci developed from transferability of the annealing temperature of gradient termocycler. We species shows positive
Introdução
Os peixes do gênero
popularmente conhecidos como piabas ou lambaris e é um dos mais especiosos da região neotropical e com vasta distribuição, desde o sul dos Estados Unidos até o norte da Argentina. Atualmente, o gênero encontra “incertae sedis” na família Characiad (Lima et al.,2003), que apresenta 952 espécies válidas e 400 espécies ainda não descritas (Reis et al., 2003); destas, o gênero Astyanax forma um grupo complexo e sua identificação tem sido difícil por apresentar várias formas similares (Melo, 2001).
As espécies deste gênero estão alocadas no Filo Chordata, Subfilo Vertebrata, Classe Osteichthyes, Subclasse Actinopterygii, Ordem Characiformes e Família Characidae (Nelson, 1994). Estes peixes apresentam como principais características o tamanho reduzido, nadadeira adiposa geralmente presente; linha lateral completa, pouco curva na frente; pré-maxilar não protrátil; dentes pré-maxilares dispostos em duas séries, a interna com cinco dentes; dentes com cúspides; altura do corpo cerca de três vezes ou menos no comprimento padrão e escamas de tamanho normal cobrindo apenas a base dos raios da nadadeira caudal (Britski et al., 1988). São peixes não migradores, com fecundação externa e ausência de cuidado parental (Vazzoller al., 1992).
Os microssatélites, ta conhecidos como STR (repetições curtas em tandem “Short Tandem Repeats” elementos repetitivos, formados por arranjos de repetições em tandem,
a seis nucleotídeos de comprimento e estão entre os locos mais polimórficos dos genomas. Este tipo de marcador apresenta padrão de herança codominante e vêm sendo utilizados para resolver questões relacionadas à estrutura genética e a conservação de recursos genéticos de determinadas populações (Moretzonh, 2006). A principal desvantagem desses marcadores é a necessidade de Os peixes do gênero Astyanax são popularmente conhecidos como piabas ou lambaris e é um dos mais especiosos da região neotropical e com vasta distribuição, desde o sul dos Estados Unidos até o norte da Argentina. Atualmente, o gênero encontra-se “incertae sedis” na família Characiadae ,2003), que apresenta 952 espécies válidas e 400 espécies ainda não , 2003); destas, o forma um grupo complexo e sua identificação tem sido difícil por apresentar várias formas s espécies deste gênero estão alocadas no Filo Chordata, Subfilo Vertebrata, Classe Osteichthyes, Subclasse Actinopterygii, Ordem Characiformes e Família Characidae (Nelson, 1994). Estes peixes apresentam como principais características o tamanho reduzido, nadadeira adiposa geralmente presente; linha lateral completa, pouco curva na maxilar não protrátil; dentes maxilares dispostos em duas séries, a interna com cinco dentes; dentes com cúspides; altura do corpo cerca de três o comprimento padrão e escamas de tamanho normal cobrindo apenas a base dos raios da nadadeira , 1988). São peixes não migradores, com fecundação externa e ausência de cuidado parental (Vazzoller et Os microssatélites, também conhecidos como STR (repetições curtas Short Tandem Repeats”), são elementos repetitivos, formados por tandem, de dois a seis nucleotídeos de comprimento e estão entre os locos mais polimórficos dos ipo de marcador apresenta padrão de herança codominante e vêm sendo utilizados para resolver questões relacionadas à estrutura genética e a conservação de recursos genéticos de determinadas populações (Moretzonh, 2006). A principal desvantagem desses dores é a necessidade de
conhecimento de prévio do genoma para o desenvolvimento de primers
específicos, o que torna o processo trabalhoso e de alto custo (Grattapaglia, 2008).
Alguns estudos demostraram que é possível realizar amplificação cruzad
primers desenvolvidos para uma
determinada espécie em outras espécies próximas do ponto de vista evolutivo. O sucesso de amplificação dos marcadores microssatélites entre espécies, associado à natureza de loco único desses marcadores de DNA, garante sua validação como conectores para uma futura consolidação de mapas de diferentes espécies e permite a associação desses mapas com fenótipos de interesse.
Em peixes, diversos loci de microssatélites tem sido descritos. No gênero Astyanax, Strecker (2003) is seis loci a partir de Astyanax mexicannus. Estes loci foram desenvolvidos para um estudo genético com o objetivo de se detectar o fluxo gênico existente entre duas populações de uma mesma espécie, Astyanax mexicannus: os peixes de caverna, cegos e sem a cavidade ocular, e os peixes de superfície, que não apresentam anomalias.
Este trabalho teve por objetivo verificar a amplificação cruzada utilizando primers desenvolvidos para lócus de microssatélites da espécie
mexicannus em outras espécies de Astyanax.
Material e métodos
Espécies estudadas
Foram estudadas oito espécies do gênero Astyanax: A. altiparanae
em Salesópolis- SP;
coletados em São Miguel Arcanjo scabripinnis, coletados no rio Grande; bifasciatus, do córrego Sangão;
do rio São Fransisco; A. fasciatus em Angatuba- SP; e
coletados em Bonito- MT.
Extração do DNA a partir do tecido
A extração do DNA foi realizada seguindo os passos descritos pelo conhecimento de prévio do genoma para o primers espécies-específicos, o que torna o processo trabalhoso e de alto custo (Grattapaglia, Alguns estudos demostraram que é possível realizar amplificação cruzada de desenvolvidos para uma determinada espécie em outras espécies próximas do ponto de vista evolutivo. O sucesso de amplificação dos marcadores microssatélites entre espécies, associado à natureza de loco único desses marcadores ua validação como conectores para uma futura consolidação de mapas de diferentes espécies e permite a associação desses mapas com fenótipos Em peixes, diversos loci de microssatélites tem sido descritos. No , Strecker (2003) isolou Astyanax mexicannus. Estes loci foram desenvolvidos para um estudo genético com o objetivo de se detectar o fluxo gênico existente entre duas populações de uma mesma espécie, mexicannus: os peixes de a cavidade ocular, e os peixes de superfície, que não Este trabalho teve por objetivo verificar a amplificação cruzada utilizando desenvolvidos para lócus de microssatélites da espécie Astyanax em outras espécies de
Foram estudadas oito espécies do Astyanax: A. altiparanae, coletados SP; A. bockmanni, coletados em São Miguel Arcanjo- SP; A. coletados no rio Grande; A. , do córrego Sangão; A. lacustris, A. fasciatus, coletados SP; e A. asuncionesis,
MT.
Extração do DNA a partir do tecido
A extração do DNA foi realizada seguindo os passos descritos pelo
protocolo de extração do
Purification Systems (Promega). A quantificação foi realizada em comparação com um padrão de massa molecular (Low Mass DNA Ladder – Invitrogen) através de eletroforese em gel de agarose 1%.
Reações de amplificação
O preparo da reação de PCR, foi realizado no aparelho DNA
Nas reações foram utilizados 6 pares de
primers: Ast1 (F: CCCAGAAGCCTCATCGATAACA; R: ATCGGACAAGCAGAGTGCATTA), Ast 2 (F; GAGGGTCTGATGTACTGAGA; R: CGAACCCGAGAAACTG), Ast 4 (F: TCGTTATGAAGAGGCTCAAA; R: GCACCTCGGGGAGAC), Ast9 (F:TCCACAATAGACTCGGAAAGAATC; R: GACAAAAGAGGCTTCCATGAACT), Ast10 (F: ACAGAAACACGTTGATGTATGG; R: CAAACTGATTGACTGATGGAGC), Ast13 (F: GCGCCTCACTGCTCTCACAC; R: ATGGCTGCAGGTGCTTTGATA),
previamente isolados de A.. mexicanus (Strecker, 2003).
Os testes de amplificação cruzada foram realizados em termociclador com gradiente de temperatura, tendo como padrão a temperatura descrita por Strecker (2003) e utilizando-se amostra de A st y a n a x a lt ip a ra n a e A st y a n a x b o ck m a n n i Primer 1 550C 56 Primer 2 530C -Primer 4 - 56 Primer 9 540C -Primer 10 - -Primer 13 -
-Tabela 1 - Temperatura de anelamento para cada espécie com cada um dos primers testados. A falta de
temperatura de anelamento indica que não houve amplificação em nenhuma temperatura testada.
protocolo de extração do Kit Wizard (Promega). A quantificação foi realizada em comparação com um padrão de massa molecular (Low Invitrogen) através de eletroforese em gel de agarose 1%.
O preparo da reação de PCR, foi realizado no aparelho DNA workstation. Nas reações foram utilizados 6 pares de
: Ast1 (F: CCCAGAAGCCTCATCGATAACA; R: ATCGGACAAGCAGAGTGCATTA), Ast 2 (F; GTCTGATGTACTGAGA; R: CGAACCCGAGAAACTG), Ast 4 (F: TCGTTATGAAGAGGCTCAAA; R: GCACCTCGGGGAGAC), Ast9 (F:TCCACAATAGACTCGGAAAGAATC; R: GACAAAAGAGGCTTCCATGAACT), Ast10 (F: ACAGAAACACGTTGATGTATGG; R: CAAACTGATTGACTGATGGAGC), Ast13 (F: GCGCCTCACTGCTCTCACAC; R: GGCTGCAGGTGCTTTGATA), A.. mexicanus Os testes de amplificação cruzada foram realizados em termociclador com gradiente de temperatura, tendo como padrão a temperatura descrita por Strecker mostra de A.
mexicanus como controle positivo. Após a obtenção das melhores temperaturas de anelamento, foram escolhidas quatro espécies, A. fasciatus, A. altiparanae, A. bifasciatus e A. bockmanni,
testes de polimorfismo para um dos primers que apresentou melhor padrão de amplificação. Para isso, foram utilizados 10 indivíduos de A. fasciatus,
A. altiparanae, 9 indivíduos de bifasciatus e 8 indivíduos
produtos da amplificação foram observados em gel de ag
com brometo de etídio, utilizando transiluminador. As imagens foram capturadas utilizando o software Lpix (Loccus).
Resultados, discussão e conclusão
Foi observada a transferência de pelo menos quatro loci de microssatélites. A maioria dos primers utilizados obtiveram melhores resultados em temperaturas de anelamento um grau acima da temperatura padrão descrita por Strecker em seu trabalho. A tabela 1 r
temperaturas de anelamento de cada primer com as espécies utilizadas neste estudo. A st y a n a x b o ck m a n n i A st y a n a x s ca b ri p in n is A st y a n a x s p .B A st y a n a x l a cu st ri s A st y a n a x f a sc ia tu s 560C 540C 550C 560C 540C - - - 53oC - 560C 540C 550C 560C 550C - - - 540C - - - - 510C - - - - - -
Temperatura de anelamento para cada espécie com cada um dos primers testados. A falta de temperatura de anelamento indica que não houve amplificação em nenhuma temperatura testada.
como controle positivo. Após a obtenção das melhores temperaturas de foram escolhidas quatro A. fasciatus, A. altiparanae, A. A. bockmanni, para realizar testes de polimorfismo para um dos que apresentou melhor padrão de amplificação. Para isso, foram utilizados 10 A. fasciatus, 10 indivíduos de 9 indivíduos de A. e 8 indivíduos A. bockmanni. Os produtos da amplificação foram observados em gel de agarose 3% corado com brometo de etídio, utilizando-se transiluminador. As imagens foram capturadas utilizando o software Lpix
Resultados, discussão e conclusão
Foi observada a transferência de pelo menos quatro loci de microssatélites. utilizados obtiveram melhores resultados em temperaturas de anelamento um grau acima da temperatura padrão descrita por Strecker em seu trabalho. A tabela 1 relaciona as temperaturas de anelamento de cada com as espécies utilizadas neste
A st y a n a x f a sc ia tu s A st y a n a x a su n ci o n e n si s A st y a n a x m e x ic a n n u s C 55-560C 560C - 530C C 55-560C 560C 53-540C 53-540C - - - -
Temperatura de anelamento para cada espécie com cada um dos primers testados. A falta de temperatura de anelamento indica que não houve amplificação em nenhuma temperatura testada.
Primers como o Ast 10 e o Ast 13 não amplificaram nem para a espécie da qual foram extraídos, Astyanax mexicanus. Tal fato pode ser explicado por falhas ou erros durante a fabricação do
por variação na espécie utilizada como padrão, já que a espécie
mexicanus existe em dois diferentes habitats: os da caverna, que são cegos e não possuem a cavidade ocular; e os de superfície, que enxergam normalmente. Adicionalmente, os exemplares utilizados no presente trabalho são provenientes de piscicultura e, segundo informações dos vendedores, são linhagens criadas no Brasil há vários anos, o que pode tê diferenciado bastante das amostras originais de onde foram obtidos os primers.
Além da transferibilidade, testou se o padrão de polimorfismo d
Ast1 em algumas das espécies. Em relação à espécie
fasciatus observou-se padrão polimórfico com pelo menos dois alelos diferentes e comprimento variando de 170 a 200 pares de base; e, o indivíduo 1 é heretorigoto, evidenciado pela formaçã
bandas, enquanto os restantes são homozitogos (Figura 1).
Figura 1 - Padrão eletroforético em gel de agarose 3% de fragmentos de DNA do primer
espécie Astyanax fasciatus
A espécie Astyanax bockmanni sua vez, apresentou um
eletroforético bastante polimórfico, evidenciando cinco indivíduos heterozigotos e quatro homozigotos, com o comprimento dos fragmentos variando de 100 a 200pb (Figura 2).
como o Ast 10 e o Ast 13 não amplificaram nem para a espécie da Astyanax mexicanus. Tal fato pode ser explicado por falhas ou erros durante a fabricação do primer ou por variação na espécie utilizada como spécie Astyanax existe em dois diferentes habitats: os da caverna, que são cegos e não possuem a cavidade ocular; e os de superfície, que enxergam normalmente. Adicionalmente, os exemplares utilizados no presente trabalho são provenientes de icultura e, segundo informações dos vendedores, são linhagens criadas no Brasil há vários anos, o que pode tê-los diferenciado bastante das amostras originais de onde foram obtidos os
Além da transferibilidade, testou-se o padrão de polimorfismo do primer Ast1 em algumas das espécies.
Em relação à espécie Astyanax se padrão polimórfico com pelo menos dois alelos diferentes e comprimento variando de 170 a 200 pares de base; e, o indivíduo 1 é heretorigoto, evidenciado pela formação de duas bandas, enquanto os restantes são
Padrão eletroforético em gel de agarose
primer Ast 1 na
Astyanax bockmanni, por sua vez, apresentou um padrão eletroforético bastante polimórfico, evidenciando cinco indivíduos heterozigotos e quatro homozigotos, com o comprimento dos fragmentos variando
Figura 2 - Padrão eletroforético em gel de agarose de fragmentos de DNA do primer
espécie Astyanax bockmanni
A espécie Astyanax altiparanae também mostrou padrão polimórfico em relação ao lócus Ast1 (Figura 3).
a presença de quatro indivíduos heterozigotos, caracterizados pelo surgimento de duas bandas
as outras; o restante dos indivíduos são homozigotos. É importante ressaltar que o último poço da imagem corresponde a um “indivíduo teste”, que foi usado para identificar possíveis problemas erros no preparo da reação; este indivíduo não pertence à espécie Astyanax altiparanae.
Figura 3 - Padrão eletroforético em gel de agarose de fragmentos de DNA do primer
Astyanax altiparanae
Testou-se o grau de polimorfismo também para a espécie
padrão de amplificação mostrou polimórfico, evidenciando dois indivíduos heterozigotos, e os restantes homozigotos; o indivíduo 2, seguindo a ordem, não amplificou por motivos desconhecidos, e em todos os outros poços houve o surgimento de “bandas fantasmas” (Figura 4). Tal como na imagem anterior, o último poço da imagem corresponde a um “indivíduo teste” que não pertence a espécie analisada.
Padrão eletroforético em gel de agarose
primer do Ast 1 e a
Astyanax altiparanae também mostrou padrão polimórfico em relação ao lócus Ast1 (Figura 3). Observa-se a presença de quatro indivíduos heterozigotos, caracterizados pelo surgimento de duas bandas próximas uma as outras; o restante dos indivíduos são homozigotos. É importante ressaltar que o último poço da imagem corresponde a um “indivíduo teste”, que foi usado para identificar possíveis problemas erros no preparo da reação; este indivíduo não
Astyanax altiparanae.
Padrão eletroforético em gel de agarose
primer Ast 1 e a espécie
se o grau de polimorfismo também para a espécie A. bifasciatus. O ação mostrou-se polimórfico, evidenciando dois indivíduos heterozigotos, e os restantes homozigotos; o indivíduo 2, seguindo a ordem, não amplificou por motivos desconhecidos, e em todos os outros poços houve o surgimento de “bandas fantasmas” (Figura Tal como na imagem anterior, o último poço da imagem corresponde a um “indivíduo teste” que não pertence a
Figura 4 - Padrão eletroforético em gel de agarose de fragmentos de DNA do primer Ast 1 e a espécie
Astyanax spB.
Diversos estudos comprovam que a utilização de lócus de microssatélites previamente desenvolvidos para uma espécie e testados em outra espécie próxima aumenta a probabilidade de convervação das sequências e de amplificação cruzada usando
heterólogos. Um exemplo de estudo realizado para este fim, tal como o presente trabalho, foi desenvolvido por Silva (2008) onde ela testa a amplificação cruzada de primers desenvolvidos para Aegla longirostri e Aegla uruguayana, são espécies de crustáceos de águ
em outras sete espécies de crustáceos do mesmo gênero e de gêneros diferentes. Observou-se que a transferência dos microssatélites apenas ocorreu em indivíduos do mesmo gênero,
evidenciando que os locos de microssatélites não se encontram conservados em espécies distantemente relacionadas; e o loco AlCA135 foi o que apresentou maior índice de sucesso na amplificação cruzada.
Outro recente estudo foi realizado por Lima (2008) onde 52 lócus de microssatélites desenvolvidos para diferentes espécies de peixes da ictiofauna foram testados na espécie
macropomum, popularmente conhecido como Tambaqui. Destes 52 lócus, 16 apresentaram resultados satisfatórios de amplificação cruzada, o que permite concluir que existe um grande potencial de transferibilidade de marcadores microssatélites entre diferentes espécies da ictiofauna.
Através do presente trabalho pode concluir que alguns loci de microssatelites previamente isolados de
mexicannus amplificaram adequadamente Padrão eletroforético em gel de agarose de Ast 1 e a espécie
Diversos estudos comprovam que a utilização de lócus de microssatélites previamente desenvolvidos para uma espécie e testados em outra espécie próxima aumenta a probabilidade de convervação das sequências e de amplificação cruzada usando primers s. Um exemplo de estudo realizado para este fim, tal como o presente trabalho, foi desenvolvido por Silva (2008) onde ela testa a amplificação desenvolvidos para Aegla uruguayana, que são espécies de crustáceos de água doce, em outras sete espécies de crustáceos do mesmo gênero e de gêneros diferentes. se que a transferência dos microssatélites apenas ocorreu em indivíduos do mesmo gênero, Aegla, evidenciando que os locos de microssatélites não se encontram nservados em espécies distantemente CA135 foi o que apresentou maior índice de sucesso na Outro recente estudo foi realizado por Lima (2008) onde 52 lócus de microssatélites desenvolvidos para cies de peixes da ictiofauna foram testados na espécie Colossoma popularmente conhecido como Tambaqui. Destes 52 lócus, 16 apresentaram resultados satisfatórios de amplificação cruzada, o que permite concluir que existe um grande potencial de ransferibilidade de marcadores microssatélites entre diferentes espécies Através do presente trabalho pode-se concluir que alguns loci de microssatelites previamente isolados de Astyanax amplificaram adequadamente
em outras espécies do gênero, demostrando certo grau de polimorfismo em relação ao lócus Ast1 nas seguintes espécies: Astyanax fascistus, Astyanax bockmanni, Astyanax altiparanae Astyanax bifasciatus. Entretanto, novos testes otimizando as condições de PCR e utilizando gel de poliacrilamida poderão melhorar os índices de sucesso na transferibilidade de lócus e melhor avaliar o grau de polimorfismo em outras espécies e com outros loci.
Agradecimentos
A FAPEMIG pelo apoio financeiro e pela bolsa de iniciação científica.
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es do gênero, demostrando certo grau de polimorfismo em relação ao lócus Ast1 nas seguintes Astyanax fascistus, Astyanax bockmanni, Astyanax altiparanae e Entretanto, novos testes otimizando as condições de PCR e gel de poliacrilamida poderão melhorar os índices de sucesso na transferibilidade de lócus e melhor avaliar o grau de polimorfismo em outras espécies
A FAPEMIG pelo apoio financeiro e pela bolsa de iniciação científica.
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