ΔΘΝΙΚΟ ΚΑΙ ΚΑΠΟΓΙΣΡΙΑΚΟ ΠΑΝΔΠΙΣΗΜΙΟ ΑΘΗΝΧΝ ΙΑΣΡΙΚΗ ΥΟΛΗ
ΔΡΓΑΣΗΡΙΟ ΙΑΣΡΙΚΗ ΓΔΝΔΣΙΚΗ
ΓΙΔΤΘΤΝΣΗ: ΚΑΘΗΓΗΣΗ Δ. ΚΑΝΑΒΑΚΗ
ΔΞΔΛΙΞΗ ΚΑΙ ΒΔΛΣΙΧΗ ΣΗ ΣΔΥΝΙΚΗ ΒΙΟΦΙΑ ΒΛΑΣΟΚΤΣΔΧΝ ΓΙΑ ΜΟΡΙΑΚΔ ΑΝΑΛΤΔΙ ΚΑΙ ΔΚΣΙΜΗΗ ΣΗ ΔΠΙΣΤΥΙΑ ΔΜΦΤΣΔΤΗ ΚΑΙ ΔΓΚΤΜΟΤΝΗ ΚΑΣΑ ΣΗΝ ΔΞΧΧΜΑΣΙΚΗ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΗ Δ ΥΔΗ ΜΔ ΣΟ
ΜΟΡΙΑΚΟ ΤΠΟΣΡΧΜΑ.
ΓΙΓΑΚΣΟΡΙΚΗ ΓΙΑΣΡΙΒΗ ΓΔΧΡΓΙΑ ΚΟΚΚΑΛΗ
Μνξηαθόο Βηνιόγνο - Δκβξπνιόγνο
ΑΘΗΝΑ 2013
ii ΔΘΛΗΘΝ ΘΑΗ ΘΑΞΝΓΗΠΡΟΗΑΘΝ ΞΑΛΔΞΗΠΡΖΚΗΝ ΑΘΖΛΥΛ
ΗΑΡΟΗΘΖ ΠΣΝΙΖ
ΔΟΓΑΠΡΖΟΗΝ ΗΑΡΟΗΘΖΠ ΓΔΛΔΡΗΘΖΠ
ΓΗΔΘΛΡΖΠ: ΘΑΘΖΓΖΡΖΠ Δ. ΘΑΛΑΒΑΘΖΠ
ΔΜΔΙΗΜΖ ΘΑΗ ΒΔΙΡΗΥΠΖ ΡΖΠ ΡΔΣΛΗΘΖΠ ΒΗΝΤΗΑΠ ΒΙΑΠΡΝΘΠΡΔΥΛ ΓΗΑ ΚΝΟΗΑΘΔΠ ΑΛΑΙΠΔΗΠ ΘΑΗ ΔΘΡΗΚΖΠΖ ΡΖΠ ΔΞΗΡΣΗΑΠ ΔΚΦΡΔΠΖΠ ΘΑΗ ΔΓΘΚΝΠΛΖΠ ΘΑΡΑ ΡΖΛ ΔΜΥΠΥΚΑΡΗΘΖ
ΓΝΛΗΚΝΞΝΗΖΠΖ ΠΔ ΠΣΔΠΖ ΚΔ ΡΝ ΚΝΟΗΑΘΝ ΞΝΠΡΟΥΚΑ.
ΓΗΓΑΘΡΝΟΗΘΖ ΓΗΑΡΟΗΒΖ
ΓΔΥΟΓΗΑ ΘΝΘΘΑΙΖ
Κνξηαθόο Βηνιόγνο - Δκβξπνιόγνο
ΑΘΖΛΑ 2013
iii ΗΜΔΡΟΜΗΝΙΑ ΑΙΣΗΗ ΓΙΓΑΚΣΟΡΙΚΗ ΓΙΑΣΡΙΒΗ: 05 Φεβξνπαξίνπ 2003
ΗΜΔΡΟΜΗΝΙΑ ΟΡΙΜΟΤ ΣΡΙΜΔΛΟΤ ΔΠΙΣΡΟΠΗ: 17 Απξηιίνπ 2003
ΜΔΛΗ ΣΡΙΜΔΛΟΤ ΔΠΙΣΡΟΠΗ
Δκκαλνπήι Θαλαβάθεο: Θαζεγεηήο Γελεηηθήο, Γηεπζπληήο Δξγαζηεξίνπ Ηαηξηθήο Γελεηηθήο Αηθαηεξίλε Κεηαμσηνύ: Νκόηηκε Θαζεγήηξηα Γελεηηθήο
Αξηάδλε Θαιπίλε-Καύξνπ: Νκόηηκε Θαζεγήηξηα Γελεηηθήο
ΗΜΔΡΟΜΗΝΙΑ ΟΡΙΜΟΤ ΘΔΜΑΣΟ: 21 Καίνπ 2003
ΗΜΔΡΟΜΗΝΙΑ ΚΑΣΑΘΔΗ ΓΙΑΣΡΙΒΗ: 29 Ηαλνπαξίνπ 2013
ΜΔΛΗ ΔΠΣΑΜΔΛΟΤ ΔΠΙΣΡΟΠΗ
Δκκαλνπήι Θαλαβάθεο
Αηθαηεξίλε Κεηαμσηνύ
Αξηάδλε Θαιπίλε-Καύξνπ
Ησάλλα Οαρηήι Ππλνδηλνύ
Σαξάιακπνο Ππξηζηαηίδεο
Ιέσλ Αξαβαληηλόο
Σξύζα Κπαθνύια
iv
v Πεξίιεςε
Δηζαγσγή
Κία από ηηο πην δύζθνιεο πιεπξέο ζηελ ηερλνινγία ηεο ππνβνεζνύκελεο αλαπαξαγσγήο είλαη ε επηινγή, πξνο ηνπνζέηεζε ζηε κήηξα ησλ θαηάιιεισλ in vitro γνκηλνπνηεκέλσλ σαξίσλ, ώζηε λα επηηεπρζεί ε εκθύηεπζε ηνπο in vivo θαη λα θαηαιήμνπλ ζε ηειεηόκελε θύεζε. Ζ παξνύζα κειέηε βαζίζηεθε ζηελ ππόζεζε όηη θάζε γνληκνπνηεκέλν σάξην έρεη δηαθνξεηηθή γνληδηαθή έθθξαζε πνπ ραξαθηεξίδεη ηελ ηθαλόηεηά ηνπ ή κε λα εκθπηεύεηαη ζην ελδνκήηξην.
Ν βαζηθόο ζθνπόο ηεο κειέηεο ήηαλ ε δηεξεύλεζε κνξηαθώλ δεηθηώλ πνπ ζπζρεηίδνληαη κε ηελ επηηπρή εκθύηεπζε ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ θαηά ηελ εμσζσκαηηθή γνληκνπνίεζε. Πην πξώην κέξνο ηεο κειέηεο έγηλε ε αλάπηπμε θαη ε βειηηζηνπνίεζε ηεο κεζνδνινγίαο ηεο in vitro βηνςίαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ, ώζηε κε αζθάιεηα γηα ην έκβξπν λα ιακβάλεηαη γελεηηθό πιηθό ζηελ θιηληθή πξάμε. Πην δεύηεξν κέξνο ηεο κειέηεο πξαγκαηνπνηήζεθαλ κνξηαθέο αλαιύζεηο, όπνπ δηεξεπλήζεθε ε γνληδηαθή έθθξαζε ηεο β ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο ζηηο βιαζηνθύζηεηο θαη ζπζρεηίζηεθε κε ηε κνξθνινγία ηνπο. Ζ κέζνδνο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ δελ είρε, κέρξη ηελ έλαξμε ηεο κειέηεο, εθαξκνζηεί ζηελ θιηληθή πξάμε θαη ε ύπαξμε, ε πνζνηηθνπνίεζε θαη ε ηππνπνίεζε ησλ κεηαγξάθσλ ηεο β ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο δελ είρε κειεηεζεί ζηηο βιαζηνθύζηεηο.
Κεζνδνινγία
Αλαπηύρζεθε θαη βειηηζηνπνηήζεθε ε κεζνδνινγία ηεο βηνςίαο ηξνθεθηνδεξκηθώλ θπηηάξσλ από γνληκνπνηεκέλα σάξηα ζην ζηάδην ησλ βιαζηνθύζηεσλ, ώζηε λα είλαη κία αζθαιήο ηερληθή γηα ην γνληκνπνηεκέλν σάξην, αιιά θαη λα εμαζθαιίδεη επαξθή αξηζκό θπηηάξσλ, ώζηε λα είλαη δπλαηή ε εθαξκνγή κνξηαθώλ αλαιύζεσλ. Ρν πξσηόθνιιν πεξηιάκβαλε ηα εμήο ζηάδηα: α. Ρε δεκηνπξγία νπήο ζηε δηαθαλή δώλε κε ηε ρξήζε ρακειήο ζπρλόηεηαο αθηίλσλ ιέηδεξ, β. Ρελ θαιιηέξγεηα ηεο βιαζηνθύζηεο κέρξη ηελ έμνδν κηαο κάδαο θπηηάξσλ ηξνθνδέξκαηνο από ην ζεκείν ηεο νπήο θαη γ. Ρελ απνθνπή θπηηάξσλ ηξνθνεθηνδέξκαηνο από ηε βιαζηνθύζηε κε ηε ρξήζε αθηίλσλ ιέηδεξ.
Γηα δηεξεύλεζε ηεο γνληδηαθήο έθθξαζεο ηεο β ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο (CGβ) ζηηο βιαζηνθύζηεηο αλαπηύρζεθε θαη βειηηζηνπνηήζεθε κεζνδνινγία πςειήο επαηζζεζίαο πνπ πεξηιάκβαλε ηελ απνκόλσζε RNA, ηε ζύλζεζε cDNA, ηνλ πνιιαπιαζηαζκό θαη ηελ πνζνηηθνπνίεζε ησλ κεηαγξάθσλ ηεο CGβ. Δπεηδή ε CGβ θσδηθνπνηείηαη από έλα ζύκπιεγκα νκόινγσλ γνληδίσλ (CGβ1, CGβ2, CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8) ν ζρεδηαζκόο ηεο κεζνδνινγίαο γηα ηελ αλάιπζε ηεο έθθξαζεο απηώλ έγηλε αλά νκάδεο, ιακβάλνληαο ππόςε ηε κεηαμύ ηνπο νκνινγία (Α:CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8 θαη Β: CGβ1, CGβ2). Γηα ηε κειέηε ηεο παξνπζίαο ησλ κεηαγξάθσλ CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8 ζηηο βιαζηνθύζηεηο ρξεζηκνπνηήζεθε ε αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο πξαγκαηηθνύ ρξόλνπ (Real Time PCR, RT-PCR) θαη ζηε ζπλέρεηα έγηλε δηαρσξηζκόο ηεο ηαπηόηεηαο ησλ κεηαγξάθσλ κε ηε ρξήζε πεξηνξηζηηθώλ ελδύκσλ. Γηα ηε κειέηε ηεο παξνπζίαο ησλ κεηαγξάθσλ CGβ1, CGβ2 ρξεζηκνπνηήζεθε ε εκθσιηαζκέλε αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο (Nested-PCR) ζε ζπλδπαζκό κε ηελ αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο κεηνύκελεο ζεξκνθξαζίαο πβξηδνπνίεζεο (Touch-down PCR). Πηα πξντόληα ηεο αληίδξαζεο αθνινύζεζε αλάιπζε ηεο αιιεινπρίαο ηεο πξσηνηαγνύο δνκήο ηνπ DNA, γηα ηελ ηαπηνπνίεζε ησλ κεηαγξαθηθώλ πξντόλησλ.
vi Απνηειέζκαηα
Ζ κεζνδνινγία ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ αλαπηύρζεθε θαη βειηηζηνπνηήζεθε έηζη ώζηε κεηά από ηελ ππνβνιή ηνπο ζε βηνςία όιεο νη βιαζηνθύζηεηο ήηαλ βηώζηκεο, αλέθηεζαλ ηε κνξθνινγία ηνπο θαη εμαθνινπζνύζαλ λα αλαπηύζζνληαη in vitro. Πηε ζπλέρεηα, ε κέζνδνο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ εθαξκόζηεθε ζηελ θιηληθή πξάμε.
Πηελ πξώηε θάζε ηεο θιηληθήο κειέηεο ζε 49 δεπγάξηα, πνπ ππνβιήζεθαλ ζε εμσζσκαηηθή γνληκνπνίεζε, πξαγκαηνπνηήζεθε βηνςία ζε 153 βιαζηνθύζηεηο. Ρν πνζνζηό εκθύηεπζεο αλά βιαζηνθύζηε κεηά από ηε κεηαθνξά ηεο ζηε κήηξα ήηαλ 34.3%, πξνέθπςαλ 23 ηειεηόκελεο θπήζεηο (46.9%) θαη 37 παηδηά έρνπλ γελλεζεί.
Πηε δεύηεξε θάζε ηεο θιηληθήο πξάμεο ε βηνςία βιαζηνθύζηεσλ εθαξκόζηεθε ζε θύθινπο εμσζσκαηηθήο γνληκνπνίεζεο κε πξνεκθπηεπηηθή γελεηηθή δηάγλσζε κνλνγνληδηαθώλ λνζεκάησλ. Πε 24 δεπγάξηα θνξείο κνλνγνληδηαθώλ λνζεκάησλ πξαγκαηνπνηήζεθε βηνςία ζηηο 144 βιαζηνθύζηεηο, πνπ αλαπηύρζεθαλ in vitro (πνζνζηό επηηπρίαο δηάγλσζεο 93%), εθ ησλ νπνίσλ νη 64 αλεπξέζεζαλ θπζηνινγηθέο θαη νη 47 κεηαθέξζεθαλ ζηε κήηξα ησλ γπλαηθώλ πξνο εκθύηεπζε. Ξξνέθπςαλ 11 ηειεηόκελεο θπήζεηο θαη γελλήζεθαλ 15 πγηή παηδηά. Δπίζεο, πξαγκαηνπνηήζεθε πηινηηθή ηπραηνπνηεκέλε κειέηε γηα ηε ζύγθξηζε ησλ ζπλνιηθώλ απνηειεζκάησλ ησλ θύθισλ πξνεκθπηεπηηθήο γελεηηθήο δηάγλσζεο, όπνπ εθαξκόζηεθε βηνςία ζην ζηάδην απιάθσζεο (νκάδα Α) θαη βηνςία ζην ζηάδην βιαζηνθύζηεο (νκάδα Β) θαη θάζε νκάδα πεξηιάκβαλε 10 θύθινπο. Ρα απνηειέζκαηα έδεημαλ όηη ην πνζνζηό επηηπρίαο πνιιαπιαζηαζκνύ DNA θαη επίηεπμεο γελεηηθήο δηάγλσζεο από ηα δηαθνξεηηθά δείγκαηα βηνςίαο αλά γνληκνπνηεκέλν σάξην ήηαλ ζηαηηζηηθά ζεκαληηθό (νκάδα Α:75.2%; νκάδα Β:94.3%), ελώ ην πνζνζηό εκθύηεπζεο αλά κεηαθεξόκελεο ζηε κήηξα βιαζηνθύζηεο, ην πνζνζηό επίηεπμεο θπήζεσο αλά εκβξπνκεηαθνξά θαη ν αξηζκόο ηειεηόκελσλ θπήζεσλ δελ ήηαλ ζηαηηζηηθά ζεκαληηθόο αλάκεζα ζηηο δύν νκάδεο.
Γηα ηε δηεπξεύλεζε ηεο γνληδηαθήο έθθξαζεο ηεο β ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο (CGβ), ζε 45 βιαζηνθύζηεηο πξαγκαηνπνηήζεθε απνκνλώζε RNA, εθ ησλ νπνίσλ ζηηο 39 ε ζύλζεζε ηνπ cDNA έγηλε επηηπρώο. Πηε ζπλέρεηα, ε αλάιπζε κε RT-PCR γηα ηελ ύπαξμε ησλ κεηαγξάθσλ CGβ3, CGβ5, CGβ7 θαη CGβ8 έδεημε όηη κόλν πέληε βιαζηνθύζηεηο είραλ κεηαγξαθηθό πξντόλ CGβ: κία εθθνιάπηνπζα βιαζηνθύζηε θαη κία επεθηεηλόκελε βιαζηνθύζηε, (κέηξηαο κνξθνινγίαο θαηά ηελ 7ε κέξα κεηά ηε γνληκνπνίεζε) είραλ ηα κεηάγξαθα CGβ5, CGβ7 θαη CGβ8, ελώ 3 εθθνιάπηνπζεο βιαζηνθύζηεηο, (άξηζηεο κνξθνινγίαο θαηά ηελ πέκπηε/έθηε κέξα κεηά ηε γνληκνπνίεζε) είραλ ην κεηάγξαθν CGβ3 κόλν.
Γηα ηελ ύπαξμε ησλ κεηαγξάθσλ CGβ1 θαη CGβ2 ειέρζεθαλ δείγκαηα από 39 βιαζηνθύζηεηο κε Nested Touch-down PCR θαη κόλν ζε κία βιαζηνθύζηε βξέζεθε ην κεηαγξαθηθό πξντόλ CGβ1.
Ρέινο, γηα ηε δηεξεύλεζε ηεο δπλαηόηεηαο λα αληρλεύεηαη ε έθθξαζε ησλ κεηαγξάθσλ ηεο CGβ ζε κηθξό αξηζκό θπηηάξσλ, πξαγκαηνπνηήζεθε βηνςία ζε ηέζζεξηο βιαζηνθύζηεηο. Δπηηπρήο ζύλζεζε cDNA πξαγκαηνπνήζεθε ζηηο 2 από ηηο 4 βιαζηνθύζηεηο θαη ηα απνηειέζκαηα ηεο κέηξεζεο κε RT-PCR (LightCycler) δελ έδεημαλ κεηαγξαθηθό πξντόλ ζε θαλέλα δείγκα βιαζηνθύζηεσο ή ηξνθεθηνδεξκηθώλ θπηηάξσλ απηήο.
vii Ππδήηεζε
Πηελ ηερλνινγία ηεο ππνβνεζνύκελεο αλαπαξαγσγήο ππάξρνπλ πνιιέο λέεο ηερλνινγίεο θαη κέζνδνη πνπ έρνπλ εηζαρζεί ζηελ θιηληθή πξάμε ηα ηειεπηαία ρξόληα. Πε απηέο ήξζε λα πξνζηεζεί ε κέζνδνο βηνςίαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ, ε νπνία από ηελ πξώηε αλαθνίλσζε ηεο ην 2005, κέρξη ζήκεξα, έρεη πιένλ πηνζεηεζεί θαη ελζσκαησζεί ζηελ εθαξκνγή ηεο πξνεκθπηεπηηθήο γελεηηθήο δηάγλσζεο ζηνλ δηεζλή ρώξν (Kokkali et al., 2005). Ζ βηνςία βιαζηνθύζηεσλ ρξεζηκνπνηείηαη επξέσο πηα ζηελ θιηληθή πξάμε γηα ηε γελεηηθή δηάγλσζε λνζεκάησλ ή θαη παξάιιεια, ρξσκνζσκαηηθώλ δνκηθώλ ή αξηζκεηηθώλ αλσκαιηώλ ή θαη ηζηνζπκβαηόηεηαο (HLA-matching), εμαζθαιίδνληαο πςειά πνζνζηά δηάγλσζεο, εκθύηεπζεο θαη επίηεπμεο θπήζεσλ. Δθηόο όκσο από ηελ θιηληθή εθαξκνγή, ε βηνςία ησλ βιαζηνθύζηεσλ πξνζδίδεη πινύζηεο δπλαηόηεηεο γηα έξεπλα, όπσο είλαη ε κειέηε ηεο έθθξαζεο ηνπ γνληδηαθνύ ππνζηξώκαηνο, πνπ θέξεη ην πξν ηεο εκθύηεπζεο έκβξπν, κε απώηεξν ζηόρν ηελ απόθηεζε γλώζεσλ πνπ ζα καο βνεζήζνπλ λα πξνζεγγίζνπκε θαη ίζσο θάπνηε λα θαηαλνήζνπκε ην ζαύκα ηεο εκθύηεπζεο.
Πηελ παξνύζα κειέηε, δηεξεπλήζεθε ην αλ ε β ρνξηαθή γνλαδνηξνπίλε εθθξάδεηαη από ηηο βιαζηνθύζηεηο θαη γηα ην αλ κπνξεί λα απνηειέζεη πξνγλσζηηθό παξάγνληα γηα ηελ επηηπρή εκθύηεπζε ζην ελδνκήηξην. Ζ αλάιπζε ηεο έθθξαζεο ηεο CGβ ζηηο βιαζηνθύζηεηο έδεημε όηη ε έθθξαζε ησλ γνληδίσλ ραξαθηεξίδεηαη από πνηθηινκνξθία θαη είλαη εηεξνγελήο. Γεδνκέλνπ όηη ε έθθξαζε ηεο β ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο ελδέρεηαη λα ζρεηίδεηαη κε ηελ επηηπρή εκθύηεπζε ησλ βιαζηνθύζηεσλ, ζα κπνξνύζε θαλείο λα ππνζέζεη όηη κόλν νη βιαζηνθύζηεηο πνπ είραλ πξντόληα κεηαγξαθήο CGβ είραλ εκθπηεπηηθή ηθαλόηεηα, όκσο αθελόο ην δείγκα πνπ ειέγρζεθε ήηαλ πνιύ κηθξό, αθεηέξνπ δελ πξαγκαηνπνηήζεθε κεηαθνξά ζηε κήηξα ησλ βιαζηνθύζηεσλ απηώλ, γηα λα δνζεί απόιπηε εξκελεία ηνπ απνηειέζκαηνο.
Ππκπεξάζκαηα
Ζ παξνύζα δηαηξηβή αλέπηπμε θαη εμέιημε ηε κεζνδνινγία ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ θαη ζπλέβαιε ζεκαληηθά ζηελ εηζαγσγή θαη πηνζέηεζε ηεο κεζνδνινγίαο απηήο ζην δηεζλή ρώξν.
Δπίζεο, κειεηήζεθε ε ππόζεζε, γηα ην αλ ην θάζε in vitro γνληκνπνηεκέλν σάξην έρεη δηαθνξεηηθή γνληδηαθή έθθξαζε πνπ ραξαθηεξίδεη ηελ ηθαλόηεηα ηνπ ή κε λα εκθπηεύεηαη ζην ελδνκήηξην, κε ηε δηεξεύλεζε ηεο έθθξαζεο ηεο β ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο. Γίλεηαη επνκέλσο ε ζθπηάιε ζε επόκελεο κειέηεο, λα απνθξππηνγξαθήζνπλ θαη λα αλαγλσξίζνπλ ην γνληδηαθό πξνθίι ησλ πξν ηεο εκθύηεπζεο εκβξύσλ, ώζηε λα επηηειεζηεί ν απώηεξνο ζηόρνο ζηελ εθαξκνγή ηεο εμσζσκαηηθήο γνληκνπνίεζεο, πνπ είλαη ε επηινγή ελόο θαη κόλν γνληκνπνηεκέλνπ σαξίνπ ην νπνίν ζα εμαζθαιίδεη ηε γέλλεζε ελόο παηδηνύ.
viii Summary
Introduction
One of the most difficult aspects in assisted reproductive technology (ART) is the selection of a suitable embryo for transfer to the patient’s uterus, in order to achieve implantation and development to term. This study was based on the hypothesis that preimplantation embryos may have different gene expression profiles that characterize their ability to implant in the uterus and develop to a healthy baby at term.
The main aim of this study was to investigate molecular markers associated with developmental competence and successful implantation in ART. The primary aim of the study was to develop and optimize a blastocyst biopsy method, suitable for application in clinical practice. The secondary aim of the study was to investigate the gene expression of beta Human Chorionic Gonadotropin (CGβ) in blastocysts and correlate it with their morphology. Previously to the current study, blastocyst biopsy was not implemented in clinical practice and no prior research on the existence, quantification and standardization of transcripts of CGβ has been performed in blastocysts.
Methodology
The methodology for trophectoderm cell biopsy from blastocysts was developed and optimized primary to be a safe technique for the embryo and secondary to ensure biopsy of a sufficient number of cells, in order to allow the application of multiple molecular analyses. The blastocyst biopsy method involved three steps: A., opening of a hole in the zona pellucida using low frequency laser, B., blastocyst culture to allow trophectoderm cells to herniate from the hole and C., trophectoderm cell dissection of the blastocyst mass by laser ablation.
The methodology for the investigation of CGβ gene expression in blastocysts, included RNA isolation, cDNA synthesis, amplification and quantification of CGβ transcripts. Because CGβ is encoded by a cluster of homologous genes (CGβ1, CGβ2, CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8), methodology was designed considering the homology between them into groups (A: CGβ1, CGβ2 and B: CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8). For group A, real time polymerase chain reaction (Real Time PCR, RT-PCR) was applied and then transcripts were identified using restriction enzyme digestion. For group B, nested polymerase chain reaction (Nested-PCR) was used in combination with polymerase chain reaction temperature decreasing hybridization (Touch-down PCR). Following amplification, the products were sequenced (DNA sequencing) for their identification.
Results
The biopsy technique did not appear to impact on the blastocyst’s ability to reform a blastocoele cavity and continue to grow and hatch from the zona pellucida, as it was shown following further in vitro culture. No blastocyst showed signs of morphological damage at the light microscopic level. Blastocyst biopsy was applied in clinical practice in two steps: A., 49 couples
ix undergoing IVF had a biopsy in 153 blastocysts. The implantation rate per blastocyst transferred was 34.3% and lead to 23 full-term pregnancies (46.9%) with 37 babies born. B., 24 couples undergoing IVF for PGD of monogenic diseases had biopsy in 144 blastocysts. The diagnosis success rate was 93%, the implantation rate per blastocyst transferred was 40% and lead to 11 full-term pregnancies (50%) with 15 term newborns. Then, a randomized pilot study was conducted with the aim to evaluate and compare the diagnosis and implantation success rates between patients undergoing blastomere biopsy and blastocyst transfer and those having trophectoderm biopsy and blastocyst transfer for the diagnosis of monogenic diseases. The results showed that the diagnosis success rate was superior in the blastocyst biopsy group, while implantation and pregnancy rates were not statistically significant between the two groups.
For the study of CGβ expression profiles 45 blastocysts were donated to research, of which 39 generated trophectoderm cells cDNA libraries. RT-PCR revealed the presence of CGB3, CGB5, CGB7, CGB8 transcripts in 5 blastocysts. The transcripts CGB5, CGB7, CGB8 were expressed in one hatched and one hatching blastocysts (fair morphology on day 7 post insemination) and the transcript CGβ3 was expressed in three hatched blastocysts (excellent morphology on day 5/6 post insemination). The transcript CGβ1 was identified in one only blastocyst. Four blastocysts were biopsied in order to investigate whether CGβ expression can be detected at the minimal level of few trophectoderm cells. No transcript was found in trophectoderm cell samples or biopsied blastocyst proper.
Discussion
In recent years, many new technologies have been introduced in clinical practice of ART.
Blastocyst biopsy since its first announcement in 2005, until today, has been adopted and integrated into the application of preimplantation genetic diagnosis (Kokkali et al., 2005). As blastocyst biopsy has the advantage of providing adequate number of cells for multiple analyses, it has been lately used for the PGD for monogenic diseases in combination with histocompatibility screening (HLA matching) or PGD for monogenic diseases screening for structural or numerical chromosomal abnormalities. Besides its clinical application, blastocyst biopsy offers great opportunities for research, such as the study for the expression of preimplantation genetic profiles for the identification of the single most viable blastocyst among the cohort developing in vitro that will enable single blastocyst transfers without a concomitant reduction in pregnancy rates.
In this study, we investigated whether the β HCG may be used as a predictive marker of developmental competence for human embryos. This study showed that CGβ gene expression was diverse and heterogeneous between blastocysts. Further studies need to be accomplished to investigate this further.
Conclusions
Blastocyst biopsy was developed and optimized to serve as powerful tool for diagnostics of human diseases or to identify diagnostic markers of competence to develop to term for human embryos.
x
“It is the responsibility of science and technology to finish the unfinished business of nature.”
“I'll never get forget the day I looked down the microscope and saw something funny in the cultures. What I saw was a human blastocyst gazing up at me. I thought: We've done it!”
Sir Robert Geoffrey Edwards, (27 September 1925 – 10 April 2013) Nobel Prize in Physiology or Medicine 2010
"for the development of in vitro fertilization".
ηε κλήκε ηνπ θαζεγεηή Bob Edwards.
xi ΠΔΡΙΔΥΟΜΔΝΑ
ΒΙΟΓΡΑΦΙΚΟ ΗΜΔΙΧΜΑ
ΠΡΟΛΟΓΟ………..………...1
ΔΤΥΑΡΙΣΙΔ………....4
1. ΓΔΝΙΚΟ ΜΔΡΟ 1.1 Αλζξώπηλε αλαπαξαγσγή...6
1.1.1 Υνγέλεζε - ζπεξκαηνγέλεζε……….…….………...…....6
1.1.2 Φπζηθή ζύιιεςε……….………..………...……....7
1.1.3 Δκκελνξξπζηαθόο θύθινο……….…….……...…………....8
1.2 Δμσζσκαηηθή γνληκνπνίεζε……….……….…..9
1.2.1 Δπίιπζε ηεο ππνγνληκόηεηαο κε ηηο ηερληθέο ηεο εμσζσκαηηθήο γνληκνπνίεζεο……….…...9
1.2.2 Φαξκαθεπηηθή δηέγεξζε ησλ σνζεθώλ……….……….…...10
1.2.3. Αλζξώπηλνη γακέηεο θαη in vitro γνληκνπνίεζε………...….11
1.2.4. Αλάπηπμε ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ θαηά ηελ πξνεκθπηεπηηθή πεξίνδν………...….13
1.2.5. Κεηαβνιηζκόο ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ θαηά ηελ πξνεκθπηεπηηθή πεξίνδν………....…..16
1.2.6 Κεηαθνξά γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζηε κήηξα………..….…..16
1.3 Οη αλζξώπηλεο βιαζηνθύζηεηο……….……….18
1.3.1 Πρεκαηηζκόο ηεο βιαζηνθύζηεο: Θπηηαξηθή θαηαλνκή θαη δηαθνξνπνίεζε……….…..…18
1.3.2 Αξηζκόο ησλ θπηηάξσλ ηεο βιαζηνθύζηεο………..…...…..21
1.3.3 Κνξθνινγία ησλ βιαζηνθύζηεσλ………....…..22
1.3.4 Θαιιηέξγεηα in vitro κέρξη ην ζηάδην ησλ βιαζηνθύζηεσλ………..………...23
1.4 Δπηινγή ηνπ θαηάιιεινπ πξν ηεο εκθύηεπζεο εκβξύνπ……….…..26
1.4.1 Κε επεκβαηηθά θξηηήξηα επηινγήο……….….…….26
1.4.2 Δπεκβαηηθέο κέζνδνη γηα ηελ επηινγή ηνπ πξν ηεο εκθύηεπζεο εκβξύνπ………..……...30
1.5 Βηνςία ζηηο βιαζηνθύζηεηο……….………...34
1.5.1 Κειέηε ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ ζε πεηξακαηόδσα………..….……….34
1.5.2 Κειέηε ηεο βηνςίαο αλζξώπηλσλ βιαζηνθύζηεσλ………...………34
1.6 Η εκθύηεπζε ησλ αλζξώπηλσλ βιαζηνθύζηεσλ……….………..37
1.6.1 Ρα ζηάδηα ηεο εκθύηεπζεο……….………..…………..37
1.6.2 Γηάινγνο βιαζηνθύζηεο θαη ελδνκεηξίνπ...………..………..……….…41
1.7 Υνξηαθή γνλαδνηξνπίλε...49
1.7.1 Ζ ρνξηαθή γνλαδνηξνπίλε (CGβ)...49
1.7.2 Ρν ζύκπιεγκα ησλ γνληδίσλ ηεο ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο...52
xii
1.7.3 Ν ξόινο ηεο ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο θαηά ηελ εγθπκνζύλε...58
2. ΔΙΓΙΚΟ ΜΔΡΟ 2.1 θνπόο ηεο κειέηεο...60
2.2 Τιηθό...63
2.2.1 Αλάπηπμε ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζε βιαζηνθύζηεηο...63
2.2.2 Αλάπηπμε ηεο κεζόδνπ βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ...63
2.2.3 Θιηληθή εθαξκνγή ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ...63
2.2.3Α. Ξξώηε θάζε...64
2.2.3Β. Γεύηεξε θάζε...64
2.2.4 Ρππνπνίεζε ησλ κνξηαθώλ ηερληθώλ γηα ηε κειέηε ησλ κεηαγξάθσλ ηεο CGβ...65
2.2.5 Έιεγρνο ηεο ύπαξμεο θαη πνζνηηθόο πξνζδηνξηζκόο ησλ κεηαγξάθσλ ηεο CGβ ζηηο βιαζηνθύζηεηο………...………..65
2.3 Μεζνδνινγία...69
2.3.1Μέζνδνη εμσζσκαηηθήο γνληκνπνίεζεο...69
2.3.1Α. Σεηξηζκόο γακεηώλ...69
2.3.1Β. Κέζνδνη ηεο in vitro γνληκνπνίεζεο...71
2.3.1Γ. Αμηνιόγεζε ηεο in vitro γνληκνπνίεζεο...74
2.3.1Γ. Ηn vitro Θαιιηέξγεηα...75
2.3.1Δ. Ζ δηαδηθαζία ηεο κεηαθνξάο ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζηε κήηξα ...76
2.3.2 Η κέζνδνο ηεο βηνςίαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ...77
2.3.2Α. Θαηαγξαθή ηεο κνξθνινγίαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ...77
2.3.2Β. Γεληθό πιάλν ηεο κεζόδνπ βηνςίαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ...78
2.3.2Γ. Θαηακέηξεζε ησλ εηδηθώλ παξακέηξσλ ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ...79
2.3.2Γ. πνινγηζκόο ηνπ πνζνζηνύ βησζηκόηεηαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ κεηά ηε βηνςία...81
2.3.3 Κιηληθή εθαξκνγή ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ...82
2.3.3Α. Ξξώηε θάζε...82
2.3.3Β. Γεύηεξε θάζε...82
2.3.4 Μέζνδνη γηα ην ρεηξηζκό, ηελ απνκόλσζε θαη ηε κειέηε δεηγκάησλ RNA...83
2.3.4Α. Δηδηθέο ζπλζήθεο θαη εθαξκνγέο γηα ηνλ ρεηξηζκό θαη ηελ επεμεξγαζία δεηγκάησλ RNA………...83
2.3.4Β. Απνκόλσζε RNA...83
2.3.4Γ. Αληίζηξνθε κεηαγξαθή γηα ηε ζύλζεζε κνλόθισλνπ cDNA...85
2.3.5 ρεδηαζκόο κεζνδνινγίαο γηα ηε κειέηε ησλ κεηαγξάθσλ ηεο CGβ...88
xiii
2.3.5Α. Αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο ...88
2.3.5Β. Πρεδηαζκόο εθθηλεηώλ γηα ηελ αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο...89
2.3.6 Μειέηε ησλ κεηαγξάθσλ CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8 ...93
2.3.6Α. Αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο (HotStar Taq DNA polymerase)...93
2.3.6B. Ζιεθηξνθόξεζε ζε πήθησκα αγαξόδεο (Agarose gel electrophoresis)...94
2.3.6Γ. Θαζαξηζκόο ηκήκαηνο cDNA CGβ (QIAquick PCR Purification Kit)...95
2.3.6Γ. Κέηξεζε ηεο νπηηθήο ππθλόηεηαο ηνπ θαζαξνύ cDNA πξντόληνο...96
2.3.6Δ. Ξνζνηηθή αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο ζε πξαγκαηηθό ρξόλν (Quantitative real-time PCR)...97
2.3.6Ε. Aλάιπζε κε πεξηνξηζηηθά έλδπκα (Restriction enzyme digestion)………....……..….105
2.3.7 Μειέηε ησλ κεηαγξάθσλ CGβ1 θαη CGβ2………..……….…..108
2.3.7Α. Αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο κεηνύκελεο ζεξκνθξαζίαο πβξηδνπνίεζεο (Touch-down PCR)...108
2.3.7Β. Δκθσιηαζκέλε αιπζηδσηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο (Nested-PCR)...109
2.3.7Γ. Ζιεθηξνθόξεζε ζε πήθησκα αγαξόδεο ρακειήο ηήμεο (Low melting Agarose gel electrophoresis)………..………...…………....112
2.3.7Γ. Θαζαξηζκόο cDNA ηκήκαηνοηεο CGβ από πήθησκα αγαξόδεο ρακειήο ηήμεο (MinElute gel extraction Kit)………...……...112
2.3.7Δ. Αλάιπζε ηεο αιιεινπρίαο ηεο πξσηνηαγνύο δνκήο ηνπ DNA (DNA Sequencing)...…113
2.4 Απνηειέζκαηα………..…114
2.4.1 Δμσζσκαηηθή γνληκνπνίεζε θαη βηνςία βιαζηνθύζηεσλ………….………..…..…..114
2.4.1Α. Θαιιηέξγεηα in vitro ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζην ζηάδην ησλ βιαζηνθύζηεσλ………....……114
2.4.1Β. Δξγαζηεξηαθή εθαξκνγή ηεο κεζόδνπ βηνςίαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ……….………….115
2.4.2 Πξνζδηνξηζκόο ησλ εηδηθώλ παξακέηξσλ ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ………...….117
2.4.2Α. Γηάλνημε νπήο ζηε δηαθαλή δώλε κε ηε ρξήζε αθηίλσλ ιέηδεξ………….………..………..…..117
2.4.2Β. Ν ξπζκόο δηαθπγήο ησλ ηξνθεθηνδεξκηθώλ θπηηάξσλ ζε ζρέζε κε ηνλ ρξόλν θαιιηέξγεηαο ησλ βιαζηνθύζηεσλ……...………...……119
2.4.2Γ. Ζ κέζνδνο βηνςίαο ησλ ηξνθεθηνδεξκηθώλ θπηηάξσλ ζηηο βιαζηνθύζηεηο...…..120
2.4.2Γ. Ν ξπζκόο αλάπηπμεο ησλ βιαζηνθύζηεσλ θαηά ηα ζηάδηα ηεο βηνςίαο...127
2.4.2Δ. Θιηληθά απνηειέζκαηα από ηελ πξώηε θάζε ηεο θιηληθήο εθαξκνγήο...……….129
2.4.2Δ1. Ππγθεληξσηηθά απνηειέζκαηα από ηελ εθαξκνγή βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ ζε θύθινπο εμσζσκαηηθήο γνληκνπνίεζεο (IVF)...129
2.4.2Δ2. Βηνςία βιαζηνθύζηεσλ - νκάδα ειέγρνπ: Πύγθξηζε απνηειεζκάησλ...130
xiv
2.4.2Ε. Θιηληθά απνηειέζκαηα από ηε δεύηεξε θάζε ηεο θιηληθήο εθαξκνγήο...131
2.4.2Ε1. Ππγθεληξσηηθά απνηειέζκαηα από ηελ εθαξκνγή βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ ζε θύθινπο πξνεκθπηεπηηθήο γελεηηθήο δηάγλσζεο κνλνγνληδηαθώλ λνζεκάησλ (ΞΓΓ)...131
2.4.2Ε2. Βηνςία ζην ζηάδην απιάθσζεο - βηνςία βιαζηνθύζηεο: Πύγθξηζε απνηειεζκάησλ...133
2.4.3 Σππνπνίεζε ησλ κνξηαθώλ ηερληθώλ γηα ηε κειέηε ησλ κεηαγξάθσλ ηεο β ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο...135
2.4.3Α. Απνκόλσζε RNA θαη ζύλζεζε κνλόθισλνπ cDNA………..………...…..……135
2.4.3Β. Ξνιιαπιαζηαζκόο ησλ κεηαγξάθσλ CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8 ζηνλ πιαθνύληα………...138
2.4.3Γ. Ραπηνπνίεζε θαη κέηξεζε ηεο νπηηθήο ππθλόηεηαο ηνπ cDNA ησλ CGβ3, CGβ5, CGβ7 θαη CGβ8...139
2.4.3Γ. Πρεδηαζκόο πξόηππεο θακπύιεο αλαθνξάο………...…….141
2.4.3Δ Δπίδξαζε εθθηλεηώλ κε ζήκαλζε Cy5.5 ζηελ αληίδξαζε LightCycler………..…144
2.4.3Ε. Αλάιπζε κε πεξηνξηζηηθά έλδπκα ησλ CGβ3, CGβ5, CGβ7 θαη CGβ8………...……145
2.4.4 Μέηξεζε ησλ CGβ3, CGβ5, CGβ7θαη CGβ8 ζηηο βιαζηνθύζηεηο………...……….146
2.4.5 Μειέηε ησλ CGβ1 θαη CGβ2 ………...…...…..…….149
2.4.5Α. Κειέηε ησλ CGβ1 θαη CGβ2 ζηνλ πιαθνύληα……….………..…149
2.4.5Β. Κειέηε ησλ CGβ1 θαη CGβ2 ζε ηξνθνβιαζηηθό ηζηό……….….………150
2.4.5Γ. Κειέηε ησλ CGβ1 θαη CGβ2 ζηηο βιαζηνθύζηεηο………..…….……150
2.5 πδήηεζε...153
2.5.1 Απνηειεί ε αλάπηπμε ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζε βιαζηνθύζηεηο πξνγλσζηηθό παξάγνληα γηα ηελ επηηπρή εκθύηεπζε ηνπο;...153
2.5.1Α. Ξιενλεθηήκαηα ηεο αλάπηπμεο ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζε βιαζηνθύζηεηο………...……….……...………..153
2.5.1Β Ξιενλεθηήκαηα ηεο κεηαθνξάο ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζην ζηάδην ησλ βιαζηνθύζηεσλ……...….154
2.5.2 Βηνςία βιαζηνθύζηεσλ………..………..………156
2.5.1Α. Ξιενλεθηήκαηα ηεο εθαξκνγήο βηνςίαο ζην ζηάδην ησλ βιαζηνθύζηεσλ………..….157
2.5.1Β. Πύγθξηζε δηαθνξεηηθώλ κεζόδσλ πνπ αλαπηύρζεθαλ γηα ηε βηνςία βιαζηνθύζηεσλ………158
2.5.2Γ. Πύγθξηζε ησλ πξνεκθπηεπηηθώλ επεκβαηηθώλ κεζόδσλ βηνςίαο: πνιηθώλ ζσκαηίσλ, βιαζηνκεξηδίνπ θαη ηξνθεθηνδεξκηθώλ θπηηάξσλ βιαζηνθύζηεο……...…..……159
2.5.3 Αλάιπζε ηεο έθθξαζεο ηεο ρνξηαθήο γνλαδνηξνπίλεο……..…………..…...…...…………160
2.5.3Α. Δπξήκαηα ζε πιαθνύληα θαη ηξνθνβιάζηε………..………...160
xv
2.5.3Β. Δπξήκαηα από ηελ αλάιπζε CGβ ζηηο βιαζηνθύζηεηο………..………….…161
2.5.4 πζρεηηζκόο ηεο έθθξαζεο CGβ κε ηα κνξθνινγηθά θξηηήξηα ησλ βιαζηνθύζηεσλ...….163
2.5.5 Η εθαξκνγή ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ γηα κνξηαθέο κειέηεο ζε ζρέζε κε ην κνξηαθό ππόζηξσκα: ην παξόλ θαη ην κέιινλ…………...…….165
Βηβιηνγξαθία...167
Ξαξάξηεκα...192
Ξαξάξηεκα 1.Α. Λόκνο ππ’ αξηζκόλ 3089/2002 ...192
Ξαξάξηεκα 1.Β. Λόκνο ππ’ αξηζκόλ 3305/2005 ...196
Ξαξάξηεκα 2 Έγγξαθε ζπλαίλεζε ζπκκεηνρήο ζηελ παξνύζα κειέηε ...208
Ξαξάξηεκα 3 Θέζεηο θνπήο ησλ πεξηνξηζηηθώλ ελδύκσλ ζηηο αιιεινπρίεο CGβ3, CGβ5, CGβ7, CGβ8 …...….211
xvi Βηνγξαθηθό εκείσκα
Δπώλπκν: Θόθθαιε
Όλνκα: Γεσξγία
Ζκεξνκελία Γέλλεζεο: 09, Απγνύζηνπ, 1973 Ρόπνο Γέλλεζεο: Αζήλα
πεθνόηεηα: Διιεληθή Νηθνγελεηαθή Θαηάζηαζε: Έγγακε
Δπαγγεικαηηθή Γηεύζπλζε: Θέληξν Αλζξώπηλεο Αλαπαξαγσγήο Θιηληθή Γέλεζηο Αζελώλ,
Ξαλαληθνιή 14-16, Σαιάλδξη Αζήλα, ΡΘ 105 24
Ρειέθσλν: 210 689 4326
e-mail: georgiakokkali@mail.com
Σίηινη πνπδώλ
2009 Γίπισκα Δκβξπνινγίαο (Embryology certificate)
European Society of Human Reproduction and Embryology (ESHRE)
1996 Κεηαπηπρηαθόο ηίηινο ζπνπδώλ ζηε Βηνινγία ηεο Αλζξώπηλεο Αλαπαξαγσγήο (MSc in Human Reproductive Medicine)
University of London, Royal Postgraduate Medical School, London UK 1995 Αξηζηνύρνο ζηελ Θπηηαξηθή θαη Κνξηαθή Βηνινγία
(First class BSc Honours in Cell and Molecular Biology) Kingston University, Kingston Upon Thames, Surrey, UK 1991 Απνιπηήξην Ιπθείνπ (κε βαζκό 18.7/20)
1ν Ιύθεην Γιπθάδαο, Αηηηθή
xvii Δπαγγεικαηηθή Τπεξεζία
2001- ζήκεξα πεύζπλε ηνπ εξγαζηεξίνπ Ξξνεκθπηεπηηθήο Γηάγλσζεο, Θέληξν Αλζξώπηλεο Αλαπαξαγσγήο, Θιηληθή Γέλεζηο Αζελώλ, Αζήλα.
1998- ζήκεξα Θιηληθόο Δκβξπνιόγνο, Θέληξν Αλζξώπηλεο Αλαπαξαγσγήο, Θιηληθή Γέλεζηο Αζελώλ, Αζήλα.
1996-1998 Θιηληθόο Δκβξπνιόγνο, The Wolfson Clinic, IVF Unit, Department of Obstetrics and Gynaecology, Hammersmith Hospital, London, UK.
Δξεπλεηηθή Δκπεηξία
10/1996 - 10/1998 Δπηζηεκνληθόο Δξεπλεηήο
Δθπόλεζε εξεπλεηηθήο εξγαζίαο: Δκβξπνκεηαθνξά ησλ γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ θαηά ηελ πέκπηε εκέξα ηεο δσήο ηνπο, κε ηε ρξήζε
κεηαβνιηθώλ θξηηεξίσλ γηα ηελ επηινγή ηνπο. (Delayed embryotransfer and use of metabolic criteria for embryo selection). Δπηβιέπσλ
θαζεγεηήο: Prof. R. Winston. Imperial College of Science, Technology and Medicine, University of London, Department of Obstetrics and Gynaecology, Hammersmith Hospital, London, UK.
02/1996 - 08/1996 Δπηζηεκνληθόο Δξεπλεηήο
Δθπόλεζε κεηαπηπρηαθήο εξγαζίαο(ΚSc) κε ζέκα: Πύγθξηζε ηεο επαηζζεζίαο ησλ δύν κνξηαθώλ ηερληθώλ (Polymerase Chain Reaction/
Southern Blotting) γηα ηελ αλίρλεπζε κσζατθηζκνύ ηξηζσκίαο 16 ζε θύηηαξα πιαθνύληα. (Investigation of the sensitivity of the polymerase chain reaction and southern blotting techniques in detection of low grade mosaic trisomy 16 in placenta cells). Δπηβιέπνπζα θαζεγήηξηα: Dr G.
Moore. Department of Molecular Biology of Fetal Medicine, Queens Charlottes Hospital, London, UK.
06/1994 - 09/1994 Δπηζηεκνληθόο Δξεπλεηήο
Δθπόλεζε πηπρηαθήο εξγαζίαο (BSc). (Specificity of epitope-defined polyclonal antibodies to Human Papillomavirus type 6L1 and L2 proteins).
Δπηβιέπσλ θαζεγεηήο: Dr J. Cason. The Rayne Institute, Richard Dimblely Laboratory of Cancer Virology, St Thomas Hospital, London, UK.
xviii Δπηζηεκνληθέο Γξαζηεξηόηεηεο
2010 – κέρξη ζήκεξα Δθιεγκέλν κέινο ζην δηνηθεηηθό ζπκβνύιην ηεο Δπξσπατθήο Δηαηξείαο Αλζξώπηλεο Αλαπαξαγσγήο θαη Δκβξπνινγίαο ζην ηκήκα ηεο Ξξνεκθπηεπηηθήο Γελεηηθήο Γηάγλσζεο (ESHRE PGD Consortium)
1996 – κέρξη ζήκεξα Κέινο ηεο Δπξσπατθήο Δηαηξείαο Αλζξώπηλεο Αλαπαξαγσγήο θαη Δκβξπνινγίαο (ESHRE)
1996 - κέρξη ζήκεξα Κέινο ηνπ Ππιιόγνπ Θιηληθώλ Δκβξπνιόγσλ Ζλσκέλνπ Βαζηιείνπ (ACE, UK).
1999- κέρξη ζήκεξα Κέινο ηεο Ξαλειιήληαο Έλσζεο Θιηληθώλ Δκβξπνιόγσλ (ΞΔΘΔ) 2000 -2002 Δθιεγκέλν κέινο ηνπ δηνηθεηηθνύ ζπκβνπιίνπ ηεο ΞΔΘΔ
2008 – κέρξη ζήκεξα Αμηνιόγεζε επηζηεκνληθώλ κειεηώλ πξνο δεκνζίεπζε γηα ην επηζηεκνληθό πεξηνδηθό Human Reproduction
Ξέλεο Γιώζζεο:
Αγγιηθά, Γαιιηθά.
xix Γεκνζηεύζεηο ζε Γηεζλή Δπηζηεκνληθά Πεξηνδηθά
1. Fiorentino F., Spizzichino L., Bono S., Biricik A., Kokkali G., Rienzi L., Ubaldi F.M., Iammarrone E., Gordon A., Pantos K. “PGD for reciprocal and Robertsonian translocations using array comparative genomic hybridization”. Hum Reprod. 2011 Jul;26(7):1925-35.
2. Zachaki S., Vrettou C., Destouni A., Kokkali G., Traeger-Synodinos J., Kanavakis E.
“Novel and known microsatellite markers within the β-globin cluster to support robust preimplantation genetic diagnosis of β-thalassemia and sickle cell syndromes”. Hemoglobin.
2011;35(1):56-66.
3. Fiorentino F., Kokkali G., Biricik A., Stavrou D., Ismailoglu B., De Palma R., Arizzi L., Harton G., Sessa M., Pantos K. “Polymerase chain reaction-based detection of chromosomal imbalances on embryos: the evolution of preimplantation genetic diagnosis for chromosomal translocations”. Fertil Steril. 2010 Nov;94(6):2001-11.
4. Goussetis E., Konialis C.P., Peristeri I., Kitra V., Dimopoulou M., Petropoulou T., Vessalas G., Papassavas A., Tzanoudaki M., Kokkali G., Petrakou E., Spiropoulos A., Pangalos C.G., Pantos K., Graphakos S. “Successful hematopoietic stem cell transplantation in 2 children with X-linked chronic granulomatous disease from their unaffected HLA-identical siblings selected using preimplantation genetic diagnosis combined with HLA typing”. Biol Blood Marrow Transplant. 2010 Mar;16(3):344-9.
5. Christofidou C., Sofocleous C., Vrettou C., Destouni A., Traeger-Synodinos J., Kekou K., Palmer G., Kokkali G., Mavrou A., Kitsiou S., Kanavakis E. “PGD for X-linked and gender- dependent disorders using a robust, flexible single-tube PCR protocol”. Reprod Biomed Online.
2009 Sep;19(3):418-25.
6. Pantos K., Kokkali G., Petroutsou K., Lekka K., Malligiannis P., Koratzis A.
“Monochorionic triplet and monoamniotic twins gestation after intracytoplasmic sperm injection and laser-assisted hatching”. Fetal Diagn Ther. 2009;25(1):144-7.
7. Pangalos C.G., Hagnefelt B., Kokkali G., Pantos K., Konialis C.P. “Birth of a healthy histocompatible sibling following preimplantation genetic diagnosis for chronic granulomatous disease at the blastocyst stage coupled to HLA typing”. Fetal Diagn Ther. 2008;24(4):334-9.
8. Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Tzetis M., Destouni A., Kokkali G., Davies S., Mastrominas M., Palmer G., Stavrou D., Pantos K., Kanavakis E. Ten years clinical application of preimplantation genetic diagnosis (PGD) for β-haemoglobinopathies, cystic fibrosis, X-linked and rare monogenic diseases: a Greek experience”. European Journal of Human Genetics, 2008; S2 C09.3 pp 31.
9. Sertedaki A., Pantos K., Vrettou C., Kokkali G., Christofidou C., Kanavakis E., Dacou- Voutetakis C. “Conception and pregnancy outcome in a patient with 11-bp deletion of the steroidogenic acute regulatory protein gene”. Fertil Steril. 2009 Mar;91(3):934.
10. Jones G.M., Cram D.S., Song B., Kokkali G., Pantos K., Trounson A.O. “Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts”. Hum Reprod. 2008 Aug;23(8):1748-59.
11. Konialis C., Hagnefelt B., Kokkali G., Pantos C., Pangalos C. “Pregnancy following preimplantation genetic diagnosis of cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy (CADASIL)”. Prenat Diagn. 2007 Nov;27(11):1079-83.
12. Kokkali G., Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Stavrou D., Jones G.M., Cram D.S., Makrakis E., Trounson A.O., Kanavakis E., Pantos K. “Blastocyst biopsy versus cleavage stage
xx biopsy and blastocyst transfer for preimplantation genetic diagnosis of beta-thalassaemia: a pilot study”. Hum Reprod. 2007 May;22(5):1443-9.
13. Kokkali G., Vrettou C., Traeger-Synodinos J., Jones G.M., Cram D.S., Stavrou D., Trounson A.O., Kanavakis E., Pantos K. “Birth of a healthy infant following trophectoderm biopsy from blastocysts for PGD of beta-thalassaemia major”. Hum Reprod. 2005 Jul;20:1855-9.
14. Cram D.S., Jones G.M., Song B., Kokkali G., Pantos K., Trounson A.O. “Gene expression profiling of viable IVF blastocysts”. Proceedings of the American Society for Reproductive Medicine, 61st Annual Meeting, Montreal Canada, Fertility and Sterility 2005 84:
S88-S89.
15. Kokkali G., Vrettou C., Traeger-Synodinos J., Jones G.M., Cram D.S., Stavrou D., Trounson A.O., Kanavakis E., Pantos K. “Moving towards blastocyst biopsy: trophectoderm biopsy for PGD of β-thalassaemia” Reprod Biomed Online 10, 2005 Suppl. 2:19.
16. Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Tzetis M., Destouni A., Davis S., Mastrominas M., Palmer G., Kokkali G., Pantos K., Kanavakis K. “Six years of PGD for β-haemoglobinopathies and cystic-fibrosis in Greece”. Reprod Biomed Online 2005 Suppl. 2.
17. Pantos K., Stefanidis K., Pappas K., Kokkinopoulos P., Petroutsou K., Kokkali G., Stavrou D., Tzigounis V. “Cryopreservation of embryos, blastocysts, and pregnancy rates of blastocysts derived from frozen-thawed embryos and frozen-thawed blastocysts”. J Assist Reprod Genet. 2001 Nov;18(11):579-82.
Αλαθνηλώζεηο ζε Γηεζλή πλέδξηα
1. Kokkali G., Fiorentino F., Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Spizzichino L., Biricik A., Petroutsou K., Stavrou D., Kanavakis E., Pantos K. “The application of new technologies in PGD”. 9th International Scientific Meeting, Royal College of Obstetricians and Gynaecologists, Athens 28-30 September 2011.
2. Kokkali G., Sfakianoudis K., Jones GM., Fiorentino F., Traeger- Synodinou J., Vrettou C., Petroutsou K., Stavrou D.,Kanavakis E.,Pantos K. “Novel technologies in PGD”. Proceedings of the 8th Congress on Women’s Health & Disease, Kos, 1-3 September 2011.
3. Jones G.M., Cram D.S., Song B., Kokkali G., Trounson A.O., Pantos K. “Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts”. 8th Congress on Women’s Health & Disease, Kos, 1-3 September 2011.
4. Kokkali G., Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Stavrou D., Jones G.M., Cram D.,
Kanavakis E., Pantos K. “PGD for monogenic diseases in the blastocyst”. 13th World Congress in Human Reproduction, Venice 5-8 March 2009.
5. Kokkali G., Invited Speaker, “PGD for gene defects in blastocyst stage”. 8th International Symposium on Preimplantation Diagnosis, Barcelona, Spain 23-26 April 2008.
6. Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Tzetis M., Destouni A., Kokkali G., Davies S., Mastronimas M., Palmer G., Stavrou D., Pantos K., Kanavakis E. “Ten years of preimplanation genetic diagnosis (PGD) for haemoglobinopathies, cystic fibrosis, x-Linked disorders and rare monogenic diseases: a Greek experience”. The European Human Genetics Conference, Barcelona, Spain, May 31 - June 3 2008.
7. Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Tzetis M., Destouni A., Kokkali G., Davies S., Mastronimas M., Palmer G., Stavrou D., Pantos K., Kanavakis E. “Ten years of preimplanation
xxi genetic diagnosis (PGD) for haemoglobinopathies: a Greek experience”. 11th International Conference on Thalassaemia and Haemoglobinopathies, Singapore 8th-11th October 2008.
8. Kokkali G., Invited Speaker, “Blastocyst biopsy and outcomes”. 7th International Symposium on Preimplantation Genetics, Melbourne, Australia 13th –16th June 2007.
9. Traeger-Synodinos J., Vrettou C., Tzetis M., Destouni A., Kokkali G., Davies S., Mastronimas M., Palmer G., Stavrou D., Pantos K., Kanavakis E. “Nine years of preimplanation genetic diagnosis (PGD) for thalassaemia, sickle cell syndromes, cystic fibrosis and rare monogenic diseases: a Greek experience”. 7th International Symposium on Preimplantation Genetics, Melbourne, Australia 13th –16th June 2007.
10. Kokkali G., Invited Speaker, “Blastocyst biopsy for preimplantation genetic diagnosis of β-thalassaemia: an alternative approach”. 5th Annual Congress of MSRM Mediteranean Society for Reproductive Medicine, Crete 27-30 April 2006.
11. Pangalos C., Konialis C., Kokkali G., Biricik A., Fiorentino F., Pantos K. “Preimplantation genetic diagnosis (PGD) for Chronic Granulomatous Disease (CGD, gp91-phox) coupled to HLA matching and with subsequent successful pregnancy”. (Poster) American Society of Human Genetics, Annual meeting, New Orleans, Lousiana 13-16 October 2006.
12. Kokkali G., Vrettou C., Traeger-Synodinos J., Jones G.M., Cram D.S., Stavrou D., Trounson A.O., Kanavakis E., Pantos K. “Moving towards blastocyst biopsy: trophectoderm biopsy for PGD of β-thalassaemia”. 6th International Symposium on Preimplantation Genetics, London, UK 19-21 May 2005.
13. Jones G.M., Biba M., Kokkali G., Vaxevanoglou T., Chronopoulou M., Petroutsou K., Sfakianoudis K., Pantos K. “Does deferral of blastocyst transfer to Day 6 compromise outcomes?” (Poster) 28th ESHRE Annual Meeting, Istanbul, Turkey, 1rst to 4rth July 2012.
14. Pantos K., Makrakis E., Stavrou D., Karantzis P., Grammatis M., Kokkali G. “Clinical outcomes after Laser or mechanical assisted hatching: A prospective study”. (Poster) 12th World Congress on Human Reproduction, Venice, Italy 10-13 March 2005.
15. Bevan R.K., Kokkali G., Winston R.M.K., Hardy K. “Metabolic criteria for embryo selection in day 2 and day 5 embryo transfer” (Poster) British Fertility Society, Sheffield, UK 15- 17 April 1998.
Αλαθνηλώζεηο ζε Διιεληθά πλέδξηα
1. Κόθθαιε Γ., Θνληάιεο Σ., Hagnefelt B., Ξεηξνύηζνπ Θ., Γνπζέηεο Δ., Ξεξηζηέξε Η., Ξεηξνπνύινπ Ρ., Ξαπαζάββαο Α., Γξαθάθνο Π., Πηαύξνπ Γ., Ξάγθαινο Θ., Ξάληνο Θ.
«Ξξνεκθπηεπηηθή Γελεηηθή Γηάγλσζεο γνληδηαθώλ λνζεκάησλ θαη ηαπηόρξνλε αλάιπζε ηζηνζπκβαηόηεηαο (HLA MATCHING) ζε νηθνγέλεηεο κε πάζρνληα ηέθλα: Νη πξώηεο επηηπρείο παξηπηώζεηο εθαξκνγήο θαη ζεξαπείαο ζηελ Διιάδα». 12ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην ζηε Καηεπηηθή θαη Γπλαηθνινγία, Θεζζαινλίθε 17-20 Καίνπ 2012.
2. Κόθθαιε Γ., Biricik Α., Ξεηξνύηζνπ Θ., Bono S., Σξνλνπνύινπ M., Spizzichino L., Θσλζηαληόπνπινο T., Nuccitelli A., Πηαύξνπ Γ., Fiorentino F., Ξάληνο Θ. «Βηνςία
βιαζηνθύζηεσλ γηα ηελ Ξξνεκθπηεπηηθή Γελεηηθή Γηάγλσζε γνληδηαθώλ λνζεκάησλ κε έιεγρν δνκηθώλ ή θαη αξηζκεηηθώλ ρξσκνζσκαηηθώλ αλσκαιηώλ». 12ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην ζηε Καηεπηηθή θαη Γπλαηθνινγία, Θεζζαινλίθε 17-20 Καίνπ 2012.
xxii 3. Hagnefelt B., Θνληάιεο Σ., Κόθθαιε Γ., Ξάληνο Θ., Ξάγθαινο Θ. «Πηξαηεγηθέο
Ξξνεκθπηεπηηθνύ Γελεηηθνύ Διέγρνπ γηα αλεππινεηδηζκνύο (PGS) αιιά θαη δνκηθέο αλσκαιίεο (PGD) όισλ ησλ ρξσκνζσκάησλ κε array-CGH (aCGH): Ξώο, πόηε θαη γηαηί». 12ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην ζηε Καηεπηηθή θαη Γπλαηθνινγία, Θεζζαινλίθε 17-20 Καίνπ 2012.
4. Κόθθαιε Γ., Biricik A., Ξεηξνύηζνπ Θ., Ismailoglu B., Αγγειή Ο., Θσλζηαληόπνπινο Α., Γξακκάηεο Κ., Πηαύξνπ Γ., Ξάληνο Θ., Fiorentino F. «Ξξνεκθπηεπηηθή Γελεηηθή Γηάγλσζε γηα γνληδηαθά λνζήκαηα θαη ηαπηόρξνλε αλάιπζε ηζηνζπκβαηόηεηαο». 4o Ξαλειιήλην Ππλέδξην Γνληκόηεηαο θαη Πηεηξόηεηαο, Αζήλα 10-12 Γεθεκβξίνπ 2010.
5. Κόθθαιε Γ., Fiorentino F., Βξεηηνύ Σ., Traeger-Synodinos J., Ξεηξνύηζνπ Θ., Γεζηνύλε A., Jones G. , Πηαύξνπ Γ., Biricik A., Θαλαβάθεο E., Ξάληνο Θ. «Βηνςία βιαζηνθύζηεσλ γηα ηελ πξνεκθπηεπηηθή δηάγλσζε θιεξνλνκηθώλ λνζεκάησλ θαη ην έιεγρν αξηζκεηηθώλ ρξσκνζσκαηηθώλ αλσκαιηώλ». 4o Ξαλειιήλην Ππλέδξην Γνληκόηεηαο θαη Πηεηξόηεηαο, Αζήλα 10-12 Γεθεκβξίνπ 2010.
6. Jones G.M, Cram D.S., Song B., Kokkali G., Trounson A.O., Pantos K. “Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts”. 4o Ξαλειιήλην Ππλέδξην Γνληκόηεηαο θαη Πηεηξόηεηαο, Αζήλα 10-12 Γεθεκβξίνπ 2010.
7. Κόθθαιε Γ., Ξεηξνύηζνπ Θ., Κπίκπα Κ., Αγγειή Ο., Θαηνύλα Α., Καξθνκηράιε Σ., Θσλζηαληόπνπινο Α., Γξακκάηεο Κ., Πηαύξνπ Γ., Ξάληνο Θ. «Ξαξαηεξήζεηο από ηε βηνςία 4093 γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ θαη 234 βιαζηνθύζηεσλ γηα πξνεκθπηεπηηθή γελεηηθή δηάγλσζε» (Αλαξηεκέλε αλαθνίλσζε) 4o Ξαλειιήλην Ππλέδξην Γνληκόηεηαο θαη Πηεηξόηεηαο, Αζήλα 10-12 Γεθεκβξίνπ 2010.
8. Jones G.M., Biba M., Katouna A., Markomichali C., Kokkali G., Sfakianoudis K., Pantos K. “Blastocyst transfer outcomes with and without laser hatching”. 4o Ξαλειιήλην Ππλέδξην Γνληκόηεηαο θαη Πηεηξόηεηαο, Αζήλα 10-12 Γεθεκβξίνπ 2010.
9. Κόθθαιε Γ., Ξεηξνύηζνπ Θ., Κπίκπα Κ., Θαηνύλα Α., Γξακκάηεο Κ., Πηαύξνπ Γ., Ξάληνο Θ. «Ξαξαηεξήζεηο από ηε βηνςία 1773 γνληκνπνηεκέλσλ σαξίσλ ζην ζηάδην απιάθσζεο θαη 200 βιαζηνθύζηεσλ γηα πξνεκθπηεπηηθή γελεηηθή δηάγλσζε». 11ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, Αζήλα 28-31 Καΐνπ 2009.
10. Κόθθαιε Γ., Ξάληνο Θ., Πηαύξνπ Γ., Βξεηηνύ Σ., Traeger-Ππλνδηλνύ J., Φπιαθηνύ Δ., Γεζηνύλε Α., Jones G.M., Θαλαβάθεο Δ. «Βηνςία βιαζηνθύζηεσλ γηα ηελ Ξξνεκθπηεπηηθή Γηάγλσζε θιεξνλνκηθώλ γελεηηθώλ λνζεκάησλ». 11ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, Αζήλα 28-31 Καΐνπ 2009.
11. Θαξαπάλνπ Π., Ξάληνο Θ., Κόθθαιε Γ., Ξάγθαινο Θ., «Ξξνεκθπηεπηηθόο Γελεηηθόο Έιεγρνο (PGD) γηα ζύλζεηεο ρξσκνζσκαηηθέο αλαδηαηάμεηο πνπ ζρεηίδνληαη κε θπήζεηο πςεινύ θηλδύλνπ θαη απνβνιέο». 11ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, Αζήλα 28-31 Καΐνπ 2009.
12. Θνληάιεο Σ., Ξάληνο Θ., Κόθθαιε Γ., Αξθνπιήο Θ., Hagnefelt B., Ξάγθαινο Θ.
«Δπηηπρείο εθαξκνγέο ηνπ Ξξνεκθπηεπηηθνύ Γελεηηθνύ Διέγρνπ (PGD) γηα ζπάληα γνληδηαθά λνζήκαηα – Κηα ζεκαληηθή ζπκβνιή ζε αλαπαξαγσγηθά πξνβιήκαηα». 11ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, Αζήλα 28-31 Καΐνπ 2009.
13. Ξάγθαινο Θ., Θαξαπάλνπ Π., Κόθθαιε Γ., Γνύδαο Β., Ξάληνο Θ. «Ξξνεκθπηεπηηθόο έιεγρνο γηα ηελ αλίρλεπζε αξηζκεηηθώλ ρξσκνζσκαηηθώλ αλσκαιηώλ (PGS): Ξνηα είλαη ε δηαγλσζηηθή ηνπ αμία ζε δεπγάξηα κε πηζαλά αλαπαξαγσγηθά πξνβιήκαηα;». 11ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, Αζήλα 28-31 Καΐνπ 2009.
14. Θνληάιεο Σ., Γνπζέηεο Δ., Κόθθαιε Γ., Hagnefelt B., Ξεξηζηέξε Η., Ξεηξνπνύινπ Ρ., Ξαπαζάββαο Α., Γξαθάθνο Π., Ξάγθαινο Θ., Ξάληνο Θ. «Νη ηξεηο πξώηεο Διιεληθέο πεξηπηώζεηο ζεξαπείαο ηνπ πάζρνληνο ηέθλνπ κεηά από πξνεκθπηεπηηθό γελεηηθό έιεγρν (PGD) γηα
xxiii γνληδηαθά λνζήκαηα θαη ηαπηόρξνλε αλάιπζε ηζηνζπκβαηόηεηαο (HLA matching)». 11ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, Αζήλα 28-31 Καΐνπ 2009.
15. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Δπηιέγνληαο ην θαιύηεξν έκβξπν: Ζ Ξξνεκθπηεπηηθή Γελεηηθή Γηάγλσζε ζαλ δηαγλσζηηθό εξγαιείν». 3Ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Διιεληθήο Δηαηξείαο Γνληκόηεηαο θαη Πηεηξόηεηαο, Γνξπθνξηθό Ππκπόζην Organon, Θεζζαινλίθε 01-03 Ηνπλίνπ 2007.
16. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Κέζνδνη θαη ηερληθέο ζηελ ππνβνεζνύκελε γνληκόηεηα (IVF)». 6Ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Θιηληθήο Σεκείαο, Αζήλα 9-11 Λνεκβξίνπ 2007.
17. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Γελεηηθή δηάγλσζε κνλνγνληδηαθώλ λνζεκάησλ». 1Ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην ηεο Ξαλειιήληαο Έλσζεο Ηαηξώλ πνβνεζνύκελεο Αλαπαξαγσγήο θαη ηεο Ξαλειιήληαο Έλσζεο Θιηληθώλ Δκβξπνιόγσλ, 2-3 Απξηιίνπ 2005.
18. Αζαλάηνπ Π., Benkhalifa M., Κόθθαιε Γ., Ρδηκήλα Κ., Ακπαδή Γ., Ξάληνο Θ., Ξάγθαινο Θ. «Ξξνεκθπηεπηηθόο γελεηηθόο έιεγρνο δνκηθώλ ρξσκνζσκαηηθώλ αλαδηαηάμεσλ». 10ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, ππό ηελ αηγίδα ηεο Διιεληθήο Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγηθήο Δηαηξείαο, Ξάηξα 25 -28 Κατνπ 2006.
19. Ξάγθαινο Θ., Θόληαιεο Σ., Κόθθαιε Γ., Biricik A., Fiorentino F., Ξάληνο Θ.
«Ξξνεκθπηεπηηθόο γελεηηθόο έιεγρνο (PGD) γηα θπινζύλδεηε ρξόληα θνθθησκαηώδε λόζν (CGD, gp91-phox) κε ηαπηόρξνλε αλάιπζε ηζηνζπκβαηόηεηαο (HLA MATCHING) ησλ εκβξύσλ θαη κε επηηπρή θύεζε». 10ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, ππό ηελ αηγίδα ηεο Διιεληθήο Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγηθήο Δηαηξείαο, Ξάηξα 25 -28 Κατνπ 2006.
20. Κόθθαιε Γ., Βξεηηνύ Σ., Σξνλνπνύινπ Κ., Πηαύξνπ Γ., Ξάληνο Θ., Traegger-Ππλνδηλνύ J. «Ζ εθαξκνγή ηεο βηνςίαο βιαζηνθύζηεσλ γηα ηελ Ξξνεθπηεπηηθή Γηάγλσζε κνλνγνληδηαθώλ λνζεκάησλ». (Αλαξηεκέλε Αλαθνίλσζε) 10ν Ξαλειιήλην Ππλέδξην Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγίαο, ππό ηελ αηγίδα ηεο Διιεληθήο Καηεπηηθήο θαη Γπλαηθνινγηθήο Δηαηξείαο, Ξάηξα 25 -28 Κατνπ 2006.
21. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Ξξνεκθπηεπηηθέο ηερληθέο θαηά ηελ εμσζσκαηηθή γνληκνπνίεζε». 2Ν Πεκηλάξην, Γελεηηθή Ππκβνπιεπηηθή θαη Ξξνγελλεηηθόο Έιεγρνο. Γηνξγάλσζε: Καηεπηηθή θαη Γπλαθνινγηθή Θιηληθή Ξαλεπηζηεκίνπ Θξήηεο κε ηε ζπλεξγαζία ηνπ Ππλδέζκνπ Ηαηξηθώλ Γελεηηζηώλ Διιάδαο, ηεο Διιεληθήο Δηαηξείαο Δκβξπνκεηξηθήο Ηαηξηθήο θαη ηεο Διιεληθήο Δηαηξείαο πεξήρσλ ζηε Καηεπηηθή θαη Γπλαθνινγία, Θξήηε, 18-19 Ηνπλίνπ 2004.
Αλαθνηλώζεηο ζε Ηκεξίδεο
1. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Ξξνεκθπηεπηηθή Γελεηηθή Γηάγλσζε: Ρν παξόλ θαη ην κέιινλ». Δπηζηεκνληθή Ζκεξίδα ζηελ πνβνεζνύκελε Αλαπαξαγσγή: Πύγρξνλεο Απόςεηο ζηελ Δμσζσκαηηθή Γνληκνπνίεζε. Νξγάλσζε: Ξεξηθεξεηαθό Γεληθό Λνζνθνκείν – Καηεπηήξην «ΔΙΔΛΑ ΒΔΛΗΕΔΙΝ» θαη Θιηληθή «ΓΔΛΔΠΗΠ ΑΘΖΛΥΛ». πό ηελ αηγίδα ηεο Ξεξηθέξεηαο Αηηηθήο, Αζήλα 3 Λνεκβξίνπ 2012.
2. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Από ην σάξην ζηε βιαζηνθύζηε- Ζ δηαδξνκή γηα ηελ επηηπρία ζηελ θύεζε». Ζκεξίδα: Ρξέρνπζεο εμειημεηο ζηελ πνβνεζνύκελε
Αλαπαξαγσγή. Νξγάλσζε: Καηεπηηθήο Γπλαηθνινγηθήο Θιηληθήο ΓΑΗΑ ηνπ Ηαηξηθνύ Αζελώλ, Αζήλα 15 Ηνπλίνπ 2012.
xxiv 3. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Ρξόπνη νξγάλσζεο ελόο ζύγρξνλνπ εκβξπνινγηθνύ εξγαζηεξίνπ». 8ν Δηήζην Ππκπόζην κε ζέκα «πνβνεζνύκελε αλαπαξαγσγή: ην ζήκεξα θαη ην αύξην. Νξγάλσζε: Γ΄ Καηεπηηθή θαη Γπλαηθνινγηθή Θιηληθή Ξ.Γ.Λ. «ΑΡΡΗΘΝΛ», Αζήλα 3 - 4 Γεθεκβξίνπ 2011.
4. Κόθθαιε Γ., Ξξνζθεθιεκέλε εηζεγήηξηα «Ζ εκπεηξία ΞΓΓ ηεο Θιηληθήο “ΓΔΛΔΠΗΠ ΑΘΖΛΥΛ” - Εσληαλή επίδεημε βηνςίαο εκβξύνπ». Γηεκεξίδα: 20 ρξόληα Ξξνεκθπηεπηηθήο Γελεηηθήο Γηάγλσζεο, Νξγάλσζε: Δξγαζηήξην Ηαηξηθήο Γελεηηθήο θαη ε Α’ Καηεπηηθή Γπλαηθνινγηθή Θιηληθή ηνπ παλεπηζηεκίνπ Αζελώλ, ζε ζπλεξγαζία κε ην Θέληξν
«Δκβξπνγέλεζηο» θαη ην Θέληξν Αλζξώπηλεο Αλαπαξαγσγήο ηεο Θιηληθήο «Γέλεζηο Αζελώλ», Αζήλα 29-30