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5 MATERIAL E MÉTODOS

6.1 ANÁLISE DESCRITIVA

Conforme apresentado no delineamento para composição dos grupos experimentais as vacas foram submetidas a etapa de triagem e os resultados obtidos seguem abaixo.

6.1.1 Triagem

Foram colhidas amostras de sangue de 194 vacas da raça Holandesa preto e branco pertencentes a rebanhos comerciais de produção de leite tipo B, do Estado de São Paulo, em condições semelhantes de manejo sanitário. Na primeira fazenda localizada na cidade de Tambaú, foram colhidas amostras de sangue de 149 vacas e na segunda fazenda, localizada na cidade de Santa Rita do Passa Quatro, foram colhidas amostras de sangue de 45 vacas.

Das 194 vacas, 98 (50,50%) foram positivas e dez (5,20%) foram negativas para a pesquisa de anticorpos anti-gp51 do VLB nos testes de ELISA e IDGA. As 86 (44,30%) vacas restantes não atenderam ao critério de inclusão amostral quanto ao sorodiagnóstico, apresentando-se negativas na IDGA e/ou positivas no ELISA.

A distribuição populacional da amostra com base no sorodiagnóstico para a LEB apontada acima encontra-se representada no gráfico 1.

Gráfico 1 – Distribuição dos animais avaliados durante o período de triagem de acordo com os resultados no sorodiagnóstico para leucose enzoótica dos bovinos – São Paulo – 2012

Com o objetivo de identificar as vacas positivas ao VLB que apresentaram linfocitose persistente e de confirmar a não sororreatividade e a normalidade do hemograma das demais vacas, após 110 dias da colheita inicial das amostras de sangue foi realizada uma segunda triagem. Foram consideradas vacas com LP aquelas com contagem total de linfócitos superior a 10 x 10³/µL e a contagem de leucócitos superior a 15 x 10³/µL conforme critérios estabelecidos por Brenner, Avidar e Lahav, (2007). A divisão dos animais triados para este estudo segundo os critérios apontados por Brenner, Avidar e Lahav (2007) encontra-se representada no gráfico 2.

Os valores das médias, dos desvios padrão, das medianas e dos valores mínimo e máximo, absolutos e relativos dos leucócitos e dos linfócitos das amostras negativas e positivas para a LEB obtidas no primeiro e segundo hemograma estão expressos na tabela 2 abaixo.

Animais sororreagentes Animais não aptos Animais não sororreagentes

Tabela 2 – Valores das médias, medianas, desvios-padrões, mínimo e máximo absolutos e relativos dos leucócitos e linfócitos das amostras de sangue dos animais triados durante o estudo – São Paulo – 2012 Grupos Negativo Positivo Primeira triagem Valores absolutos Média 11,38 14,71

Leucócitos Desvio Padrão (±2,49) (±7,40)

(x10³)/µL Mediana 11,85 13,00

(Mínimo - Máximo) (6,90 - 15,40) (4,10 - 49,30)

Média 7,00 10,01

Linfócitos Desvio Padrão (±2,24) (±6,64)

(x10³)/µL Mediana 6,78 8,52

(Mínimo - Máximo) (4,65 - 12,16) (2,05 - 41,41)

Valores relativos

Média 59,20 61,76

Linfócitos Desvio Padrão (± 13,24) (±13,65)

(%) Mediana 61,00 63,50 (Mínimo - Máximo) (38,00 - 75,00) (24,00 - 85,00) Linfócitos atípicos (%) Média 2,60 3,22 Desvio Padrão (±1,89) (±2,19) Mediana 2,50 3,00 (Mínimo - Máximo) (0,00 - 5,00) (0,00 - 10,00)

Total de amostras de sangue 10 98

N AL LP Segunda Triagem Valores absolutos Média 9,14 9,27 22,48

Leucócitos Desvio Padrão (±2,12) (±2,02) (±3,75)

(x10³)/µL Mediana 9,00 9,65 21,10

(Mínimo - Máximo) (5,40 - 13,10) (4,30 - 12,10) (17,40 - 29,00)

Média 5,72 5,67 16,82

Linfócitos Desvio Padrão (±1,43) (±1,90) (±4,05)

(x10³)/µL Mediana 5,31 5,68 16,28

(Mínimo - Máximo) (3,51 - 8,64) (1,93 - 10,28) (10,71 - 24,94)

Valores relativos

Média 60,11 57,25 61,98

Linfócitos Desvio Padrão (± 10,06) (±11,69) (±26,93)

(%) Mediana 61,00 56,50 76,00 (Mínimo - Máximo) (44,00 - 76,00) (29,00 - 83,00) (0,78 - 79,00) Linfócitos atípicos (%) Média 3,00 3,14 4,67 Desvio Padrão (±2,12) (±2,01) (±3,00) Mediana 3,00 3,00 6,00 (Mínimo - Máximo) (0,00 - 7,00) (0,00 - 7,00) (0,00 - 8,00)

Total de amostras de sangue 9 28 9

N: vacas soronegativas ao antígeno gp51 do vírus da LEB

AL: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB sem linfocitose persistente LP: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB com linfocitose persistente

Gráfico 2 – Divisão dos animais triados de acordo com os grupos experimentais definidos – São Paulo – 2012 9; 19% 28; 61% 9; 20% 37; 81%

Divisão dos animais triados segundo os critérios de Brenner,

Avidar e Lahav (2007)

Negativas AL LP

N: vacas soronegativas ao antígeno gp51 do vírus da LEB

AL: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB sem linfocitose persistente LP: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB com linfocitose persistente

6.1.2.1 Amostras de sangue

Atendidos os critérios de inclusão amostral, onze vacas foram selecionadas e alocadas nos respectivos grupos, a saber: quatro vacas negativas na pesquisa de anticorpos para o VLB (Grupo N); três vacas sororreagentes e sem linfocitose (Grupo AL) e quatro vacas sororreagentes e manifestando linfocitose persistente (Grupo LP), como pode ser visto no gráfico 3.

Gráfico 3 – Divisão dos animais triados de acordo com os grupos experimentais definidos para este estudo – São Paulo – 2012

4; 37% 3; 27%

4; 36% 7; 63%

Divisão dos grupos experimentais

Negativas AL LP

N: vacas soronegativas ao antígeno gp51 do vírus da LEB

AL: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB sem linfocitose persistente LP: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB com linfocitose persistente

Os valores das médias, desvios-padrão, medianas e dos valores mínimos e máximos absolutos e relativos dos leucócitos e dos linfócitos das amostras de sangue das vacas utilizadas no experimento estão descritas na tabela 3. O gráfico 4 demonstra os valores citados na tabela 3 quanto aos leucócitos divididos com base nos grupos experimentais.

Tabela 3 – Valores das médias, medianas, desvios-padrão, mínimo e máximo absolutos e relativos dos leucócitos e linfócitos das amostras de sangue das vacas utilizadas no experimento – São Paulo – 2012 Grupos N AL LP Valores absolutos Média 8,73 11,67 23,05

Leucócitos Desvio Padrão (±2,65) (±2,63) (±2,64)

(x10³)/µL Mediana 8,45 10,20 23,35

(Mínimo - Máximo) (6,30 - 11,70) (10,10 - 14,70) (20,00 - 25,50)

Média 4,63 5,71 17,09

Linfócitos Desvio Padrão (±0,94) (±7,07) (±3,16)

(x10³)/µL Mediana 4,40 8,53 17,18

(Mínimo - Máximo) (3,75 - 5,97) (5,71 - 8,53) (14,11 - 19,89)

Valores relativos

Média 52,25 52,33 61,00

Linfócitos Desvio Padrão (±10,59) (±11,50) (±14,31)

(%) Mediana 51,00 52,00 60,00 (Mínimo - Máximo) (41,00 - 66,00) (41,00 - 64,00) (46,00 - 78,00) Linfócitos atípicos (%) Média 2,75 9,00 12,75 Desvio Padrão (±0,96) (±5,20) (±11,87) Mediana 2,50 6,00 12,50 (Mínimo - Máximo) (2,00 - 4,00) (6,00 - 15,00) (0,00 - 26,00)

Total de amostras de sangue 4 3 4

N: vacas soronegativas ao antígeno gp51 do vírus da LEB

AL: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB sem linfocitose persistente LP: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB com linfocitose persistente

Gráfico 4 – Representação dos valores dos leucócitos das amostras de sangue das vacas utilizadas durante o experimento divididas de acordo com os grupos experimentais – São Paulo – 2012

N: vacas soronegativas ao antígeno gp51 do vírus da LEB

AL: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB sem linfocitose persistente LP: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB com linfocitose persistente

Conforme demonstrado na tabela 4 e gráfico 4 as medianas dos leucócitos (x10³)/µL foram 8,45 para o grupo negativo, 10,20 para o grupo AL e 23,35 para o grupo LP.

6.1.2.2 Amostras de leite

Conforme os critérios de inclusão amostral estabelecidos, todos os onze animais inclusos neste experimento apresentaram exame físico da glândula mamária com características compatíveis à úberes sadios e teste de Tamis, California mastitis test (CMT) e exame bacteriológico dentro dos padrões de normalidade para a espécie. A CECS foi realizada no Laboratório de Fisiologia da Lactação do Departamento de Fisiologia do Centro de Tecnologia para o Gerenciamento da

Pecuária de Leite da Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” (ESALQ- USP), Piracicaba – SP e os resultados descritivos encontram-se na tabela 4 abaixo.

Tabela 4 – Resultados médios, medianos, desvios-padrão, mínimo e máximo (CCS/mL) das quantidades de células somáticas verificadas nas 11 vacas da raça Holandesa Preto e Branco, separadas em função do grupo experimental – São Paulo – 2012

Grupos N AL LP CCS Média 37.125 72.166 44.583 Desvio Padrão (±42.456) (±79.639) (±61.600) Mediana 18.000 38.500 15.500 (Mínimo - Máximo) (2.000 - 131.000) (1.000 - 139.000) (1.000 - 208.000) Total de amostras 16 12 16

N: vacas soronegativas ao antígeno gp51 do vírus da LEB

AL: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB sem linfocitose persistente LP: vacas sororreagentes ao antígeno gp51 do vírus da LEB com linfocitose persistente