7. Outros oomicetos isolados dos sistemas hidropônicos
7.2. Análise filogenética da região ITS rDNA das espécies identificadas
A análise da região ITS rDNA com alguns isolados da ordem Saprolegniales (Figura 26) e com os espécimes coletados neste estudo confirmou a identificação morfológica que havia sido realizada previamente.
O isolado CCIBt 4158 identificado como Saprolegnia ferax, se agrupou em um clado com outros espécimes identificados como S. ferax disponíveis no GenBank com altos valores de bootstrap (99%) e de probabilidade posterior (1.00), contribuindo assim para a identificação do espécime e corroborando a identificação morfológica.
O espécime CCIBt 4096 identificado como Saprolgenia semihypogyna através de suas características morfológicas, principalmente devido a presença de anterídios hipóginos e semi- hipóginos e oósporos subexcêntricos, se agrupou em um clado juntamente com dois isolados de S.
semihypogyna e alguns isolados de S. eccentrica, com 100% de bootstrap e 1.00 de probabilidade
posterior. De acordo com a descrição original de S. eccentrica por Seymour (1970), esta espécie possui em sua maioria oósporos excêntricos e de acordo com as ilustrações do autor, também apresenta oósporos subexcêntricos. Entrentanto, não há relatos de espécies que apresentem estes dois tipos de oósporos. Nesse sentido, deve ser considerada a possibilidade de erro na observação dos oósporos por Seymour (1970) e além disso, considerando o posicionamento filogenético de S.
eccentrica juntamente com S. semihypogyna, deve-se pontuar a possibilidade de que estes dois
táxons sejam sinônimos, sendo necessário análises mais detalhadas dos materiais tipos. Finalmente, considerando o posicionamento filogenético e a observação de somente oósporos subexcêntricos, o espécime CCIBt 4096 foi identificado como S. semihypogyna.
O isolado CCIBt 4079 identificado morfologicamente como Achlya hypogyna, se agrupou em um clado juntamente com isolados do gênero Protoachlya disponíveis no GenBank com um valor de bootstrap de 100% e probabilidade posterior de 1.00. Dentro deste clado, observa-se a formação de dois sub-clados pequenos, sendo um formado por um isolado identificado como
bootstrap de 86% e 0.90 de probabilidade posterior; e outro formado por dois isolados de P.
paradoxa, com valor de bootstrap de 79% e 0.86 de probabilidade posterior. Embora a análise
filogenética demonstre um agrupamento do isolado CCIBt 4079 juntamente com espécimes do gênero Protoachlya com altos valores de suporte, a identificação adotada até o momento para o táxon foi de A. hypogyna considerando que o mesmo não apresentou proliferação interna, o que é destacado na descrição de P. hypogyna por Shanor & Conover (1942). Nesse sentido, estudos com os materiais tipos de A. hypogyna e P. hypogyna devem ser feitos para se certificar quanto as características morfológicas destes dois táxons e possivelmente sinonimizá-los, considerando o posicionamento filogenético de A. hypogyna com espécies de Protoachlya. Vale ressaltar que Johnson et al. (2005) relatam que A. hypogyna e P. hypogyna são o mesmo táxon, fazendo uma nova combinação, Protoachlya hypogyna (Coker & Pemberton) T.W. Johnson & R.L. Seym., entretando esta combinação foi considerada inválida, pois já havia um táxon nomeado como P.
Figura 18. Arvore de máxima verossimilhança da região ITS rDNA com isolados de Saprolegniales. Valores de bootstrap > 50% são indicados numericamente, valores < que 50% são indicados com (-). Valores de
probabilidade posterior > 0.50 são indicados numericamente, valores < 0.50 são indicados com (-). Clados não presentes na análise baesiana são indicados com (o) e a barra de escala representa o número de substituições por site.
CONCLUSÕES
Das 30 propriedades hidropônicas visitadas pôde ser constatado que as culturas mais produzidas são a alface (diversas variedades), rúcula e agrião. Dos podutores entrevistados, 96% relataram que já perderam a produção em algum momento devido a problemas causados por
Pythium spp., sendo que na maioria da vezes os problemas ocorreram no verão. Diversos produtos
químicos e biológicos são utilizados pelos produtores na tentativa de controlar surtos de podridão causados por Pythium spp. durante a produção hidropônica.
Das amostras coletadas e analisadas, foi possível isolar espécimes de Pythium s. l. dos quatro tipos de amostras, sendo a maioria dos isolados provenientes de raízes de hortaliças assintomáticas e solução nutritiva. Apesar de terem sido isolados dois espécimes de Pythium s. l. de água de poço artesiano, esta ainda é uma boa solução para abastecimento dos sistemas hidropônicos. Por outro lado, os produtores devem se atentar a qualidade do substrato utilizado, uma vez que este pode ser fonte introdutória de inóculo no sistema. Das seis marcas de substratos analisadas, em três foi possível isolar espécimes do gênero.
De todas as coletas foi possível isolar e identificar seis espécies de Pythium (P.
kashmirense, P. middletonii, P. oopapillum, P. periplocum, P. segnitium e Pythium sp.1) e duas
espécies de Phytopythium (Py. helicoides e Py. vexans), além de isolados de Pythium do Grupo F e outros oomicetos (Achlya hypogyna, Saprolegnia ferax e S. semihypogyna). Destes, P. kashmirense,
P. oopapillum e P. segnitium são relatados pela primeira vez na América do Sul.
A patogenicidade in vitro de cinco espécies de Pythium s. l. foi testada demonstrando que P.
periplocum e Py. helicoides podem, em condições de laboratório, causar morte das plântulas de
rúcula e alface, respectivamente.
A prevenção da entrada de Pythium spp. nos sistemas é ainda a melhor solução para evitar surtos de podridão de raiz causada por este organismo, sendo que técnicas básicas de higiene são a melhor forma de manter o sistema limpo e livre do patógeno.
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