Os materiais colocados na cavidade oral são expostos a uma variedade de substâncias incluindo proteinas, enzimas, diferentes microbiotas e diferentes substâncias vindas da dieta. Esta mistura de fatores causam profundos e permanentes efeitos sobre os materiais que os conduzem à degradação, mudanças mecânicas e químicas, o que pode comprometer a função do material17, e a liberação de produtos,
devido a biodegradação. Com efeito, o impacto dos produtos causados pela biodegradação dos materiais reembasadores nos processos fisiológicos das células e tecidos locais raramente é relatado na literatura. Os estudos, muitas vezes, limitam-se a testar a citotoxicidade destes materiais, ou seja, se as células "vivem ou morrem". Embora estes materiais sejam largamente utilizados na clínica, atenção quanto ao efeito clínico e utilização, tem sido levantada43,20 .
Para avaliar a biocompatibilidade dos materiais odontológicos, o tipo celular deve ser cuidadosamente escolhido, afim de mimetizar, o mais próximo possível, a situação clínica. No presente estudo, entretanto, os materiais avaliados entram em contato direto com as células epiteliais e tecido conjuntivo subjacente, na cavidade oral. Sendo assim, e por motivos já mencionados neste texto, foi selecionada as células L929 para avaliar a expressão da integrina 5ß1, do fator de crescimento TGF-ß1 e a proliferação/metabolismo celular (azul de alamar).
De acordo com os resultados deste estudo, os materiais a base de silicone (Ufi Gel P e Sofreliner S) foram os menos citotóxicos, sendo que o Sofreliner S apresentou a melhor resposta metabólica, no teste azul de alamar, em contato com as células L929 após 48 hs, quando comparada ao controle. Esse resultado esta
vinculado a reação de polimerização por adição destes materiais. Além disso, os materiais à base de silicone não possuem plastificantes ou monômeros, como os outros materiais à base de resina acrílica e os condicionadores de tecido, que podem liberar componentes e produtos de degradação. Estes últimos materiais possuem, também, ftalatos e ésteres aromáticos de ácidos carboxílicos, como já mencionado118,143,146,170. Ao contrário dos materiais à base de silicone, os dois materiais à base de resina acrílica (Trusoft e Durabase Soft) induziram menor atividade metabólica (60.7-90.4% e 6.2-8.2%), após 48 hs quando comparado ao controle. Ambos os materiais possuem ftalatos, entretanto, o Trusoft não tem monômero em sua composição o que, provavelmente, justifica o melhor metabolismo celular para o Durabase Soft. Os condicionadores de tecido (Softone e Coe Comfort) apresentaram as menores respostas metabólicas, com 11.2% comparada com o controle, após 48 hs. A liberação de plastificante e álcool etílico, e o provável aumento da biodegradação hidrolítica com a absorção de água nos materiais podem ser responsáveis, pelo menos em parte, pela redução acentuada da viabilidade celular, verificada pelo teste de azul de alamar71,166.
Neste estudo, para a análise da expressão da integrina 5ß1, as células foram temporariamente desprovidas do fator de crescimento (soro fetal bovino) no meio de cultura durante 48 hs. Assim, foram observados efeitos adversos dos produtos liberados pelos materiais sobre as células L929, que causaram discreto aumento da expressão da integrina após 48 hs em comparação com 24 hs. Resultados diferentes foram observados para o fator de crescimento TGF-ß1. Por exemplo, a variação da porcentagem da integrina foi de 8%-13%, para os 6 materiais por 24 à 48 hs em cultura, enquanto que para o TGF-ß1, a variação da porcentagem entre os dois períodos avaliados variou de 12%-75% para os materiais. Desta forma, observa-se que o TGF ß1 aumentou a expressão com o tempo, comparada à integrina. Entre as maiores porcentagens de aumento observada após 48 hs, os materiais Durabase Soft,
Sofreliner S, Trusoft e Softone, foram considerados os materiais com maior efeito na expressão da integrina e do TGF-ß1.
Integrinas são receptores heterodiméricos para a adesão molecular na superfície celular e inúmeras proteínas da matriz extracelular. Várias α e β subunidades combinadas exibem ligantes com especificidades diferentes136. Por exemplo, a intergina α5ß1, possui ligantes específicos para fibronectinas e fibrinas, importantes glicoproteínas da matriz extra celular que possuem papel de adesão, migração, crescimento celular, diferenciação e são muito importantes no processo de reparação de feridas129. A intergina α5ß1, em resposta a sua ligação com os
componentes da matriz extracelular, também tem sido correlacionadas com a angiogenese de tumores. Existem controvérsias, entretanto, se está associada com efeitos supressores de tumor, ou um papel de promotor139. As integrinas medeiam
uma série de acontecimentos de sinalização nas células, sendo que essas cascatas possibilitam um profundo efeito sobre as atividades celulares normais, bem como “a vida ou a morte”, como a apoptose. Com efeito, células que não aderem efetivamente ao substrato/matriz extra celular sofrem eventos apoptóticos mais facilmente do que as células providas de fatores de crescimento50. Integrinas também estão relacionadas
no controle de resistências a estímulos apoptóticos e, em particular, na ativação dos sinais das mitocôndrias. Danos causados por produtos químicos, incluindo algumas drogas citotóxicas, ou liberadas por materiais odontológicos, e a retirada do soro fetal bovino, pode levar à liberação do citocromo C pelas mitocôndrias59. Integrinas têm mostrado proteger a viabilidade celular em resposta a estresses. A sinalização por integrinas regulam a expressão e a atividade de vários membros das proteínas Bcl-2, que estão associadas com a apoptose150. Os ligantes da integrina α5β1 leva ao aumento da expressão de Bcl-2104 e aumenta a resistência a ausência de soro fetal bovino.
O fator de crescimento β (TGF-β) faz parte da família das proteínas e consiste em três citocinas (TGF-β1, 2, e 3), sendo que a TGF-β1 é a mais comum e abundante na maioria dos tecidos. O TGF-β se liga a receptores específicos
heterodímero causando a fosforilação intracelular das proteinas Smad. Estes, por sua vez, se ligam com Smad4 para formar complexos heteroméricos, que se translocam para o núcleo e regulam os genes responsivos TGF-ß40. As moléculas de TGF-β funcionam como um interruptor celular que regulam uma grande variedade de processos celulares, tais como a função imunitária, proliferação celular, de transição epitelial-mesenquimal e hematopoiese153.
Neste estudo, o TGF-β1 apresentou aumento da regulação das células mantidas durante 48 hs em comparação com aquelas mantidas durante 24 hs em cultura. Sendo que, para os materiais Ufi Gel P, Durabase Soft e Softone houve um aumento significativo na expressão do TGF-β1 entre os período de 24–48 hs que foi de 30%, 40% e 75%, respectivamente. A maior expressão do TGF-β1 foi observada após 48 hs para os condicionadores de tecido e esse resultado provavelmente se deve às diferentes composições do Softone e Coe Comfort. O último material mencionado possui em sua composição alguns produtos que não são encontrados no Softone, o que pode ter contribuído para a diminuição da expressão do fator de crescimento. Um aumento no TGF-β1, e também das integrinas, tem sido associada com a maturação de um proto-miofibroblastos a uma miofibroblastos maduro88 que é característica da
cicatrização de feridas. Tem sido relatado, também, que o aumento no nível do TGF- β1 aumentam a proliferação de queratinócitos, que pode ser necessário em áreas da mucosa oral desprovida de epitélio queratinizado. A ausência de soro fetal bovino no meio de cultura descrito neste estudo sugere que as proteínas TGF-β1 e integrina α5ß1, detectadas pelo teste de ELISA, deve ter sido expressa pelas células e que as expressões relativas de cada proteína foram devido aos produtos liberados dos materiais reembasadores. No entanto, é importante notar que este foi um estudo in vitro e realizado em um curto período, retratando apenas a atividade de cultura de células, por um período máximo de 48 hs.
4.3 Análise da influência dos materiais reembasadores resilientes na expressão de