Análises estatísticas

Para os dados obtidos através das análises com os marcadores moleculares, foi realizado agrupamento com base no método aglomerativo da média entre pares não ponderados (UPGMA - Unweighted Pair-Group Method Using Arithmetic Averages). Para esses agrupamentos foi utilizado o índice ponderado. As análises foram realizadas com o auxílio do software estatístico R.

Os dados obtidos das análises fisiológicas, morfofisiológicas e fitoquímicas foram submetidos à análise de variância para estudo da variação entre os acessos. Em seguida, as médias foram ordenadas segundo o teste de agrupamento Scott- Knott (SCOTT & KNOTT, 1974) a 1% ou a 5% de probabilidade do erro. Para as

demais análises, foi realizada transformação escalar dos dados (por Logaritmo). Assim, após a transformação dos dados as análises multivariadas foram implementadas por meio de técnicas de agrupamento hierárquico, com base no método UPGMA utilizando a Distância Euclidiana como medida de dissimilaridade. O ponto de corte no dendograma formado pelo método de UPGMA foi definido conforme o proposto por Mojena (1977), seguindo a fórmula em que o Pc= m + kdp, sendo m= a média dos valores de distância dos níveis de fusão correspondentes aos estágios; k = 1,25; dp = desvio-padrão. Além disso, avaliou-se a importância relativa dos caracteres para divergência genética pelo método de Singh (1981). Os dados foram analisados utilizando-se os recursos computacionais do programa Genes (Cruz, 2006).

3.0. RESULTADOS

3.1. Marcadores moleculares

Pelo método UPGMA, os genótipos se agruparam em quatro grupos diferentes (Figura 10). Os genótipos da Unicamp permaneceram em um mesmo grupo, indicando que eram clones de uma mesma planta, por isso nas análises fisiológicas, morfofisiológicas e fitoquímicas eles passaram a ser considerados como repetições formando o genótipo 20 (Tabela 3).

Figura 10. Dendograma de 22 genótipos de V. curassavica gerado pelo método UGPMA, com base em marcadores moleculares (SSR).

Para as análises fisiológicas, morfofisiológicas e fitoquímicas os genótipos 10, 13 e 14 foram desconsiderados por não terem repetições.

3.2. Características fisiológicas

Os caracteres fisiológicos de acordo com o teste de Scott Knott formaram para cada um deles, 2 grupos de média, exceto Ci, A/E e A/gs que formaram um único grupo. De acordo com o teste F, a única variável que apresentou significância a 1% de probabilidade foi A. A maioria das variáveis obtiveram de médios a altos valores do coeficiente de variação experimental. Todas as variáveis tiveram baixo índice de variação. A herdabilidade para as características Ci, A/E e A/gs foram baixas (Tabela 4).

Tabela 4. Médias de sete características avaliadas em 17 acessos de V. curassavica estabelecidas pelo teste de Scott Knott e resumo da análise de variância relacionadas às características fisiológicas de V. currassavica com as respectivas estimativas de parâmetros de média, teste F, coeficiente de variação experimental (Cve%), coeficiente de variação genético (CVg%), índice de variação (IV) e coeficiente de determinação genotípica (h2).

CARACTERES FISIOLÓGICOS

GENÓTIPOS A gs Ci TTE A/E A/gs A/Ci 1 19,79a 327,20a 242,10a 141,20a 4,70a 82,31a 0,84a 2 12,78b 103,57b 179,41a 129,90b 5,30a 123,96a 0,71a 3 13,33b 136,35b 205,71a 113,21b 5,26a 108,04a 0,64a 4 16,87a 195,42b 220,79a 142,07a 4,17a 95,46a 0,74a 5 9,26b 121,76b 207,57a 117,18b 4,24a 107,14a 0,41b 6 20,12a 411,82a 254,13a 153,20a 3,71a 73,80a 0,77a 7 8,51b 106,34b 229,64a 100,01b 3,54a 93,08a 0,36b 8 29,05a 515,66a 276,76a 176,93a 4,10a 56,36a 1,06a 9 12,23b 113,44b 205,30a 122,00b 4,91a 107,75a 0,61a 11 23,64a 332,54a 234,35a 172,82a 4,12a 83,92a 1,01a 12 14,45b 149,19b 208,32a 125,07b 4,69a 104,85a 0,69a 15 21,22a 382,47a 251,44a 143,04a 3,85a 74,67a 0,82a 16 7,13b 64,75b 201,40a 93,32b 3,90a 110,85a 0,36b 17 7,94b 67,46b 210,63a 116,22b 3,97a 105,08a 0,43b 18 15,98a 158,14b 216,06a 149,66a 4,43a 98,36a 0,77a 19 7,97b 64,84b 182,82a 108,20b 4,38a 122,90a 0,45b 20 6,40b 57,53b 208,42a 103,17b 3,76a 106,90a 0,33b Médias 14,51 194,62 219,70 129,83 4,29 97,38 0,65 Teste F 2,5* 2,8** 1,2 3,9** 0,7 1,4 1,9 Cve% 49,2 75,3 18,4 18,6 25,29 27,6 43,4 CVg% 35,0 59,0 4,7 15,5 0 9,6 24,2 IV 0,7 0,78 0,25 0,8 0 0,3 0,5 h² 60,3 64,8 16,5 67,5 0 26,5 48,2

A: Taxa de assimilação líquida de carbono (μmol m-2 s-1), gs: Condutância estomática (mol m

-2

s-1), Ci:

Concentração intercelular de CO2 (μmol mol-1_{), TTE: Taxa de transporte de elétrons (μmol m}-2

s-1),

A/E: eficiência instantânea do uso de água, A/gs:eficiência intrínseca do uso de água (μmol mol

-1

),

A/Ci: eficiência instantânea de carboxilação.

Médias com mesma letra na coluna fazem parte de um mesmo grupo segundo o teste de Scott Knott. **Significativo a 1% de probabilidade pelo teste F

* Significativo a 5% de probabilidade pelo teste F.

Com relação aos caracteres fisiológicos no dendograma gerado observou-se a formação de três grupos (Figura 11). O genótipo da Unicamp (20) ficou no grupo III junto com os genótipos 17, 7, 16, 19 e 5 (Tabela 5).

Figura 11. Dendograma de 17 genótipos de V. curassavica gerado pelo método UGPMA, tendo como medida de dissimilaridade a distância euclidiana, com base em caracteres fisiológicos.

Tabela 5. Agrupamento dos genótipos de V. curassavica a partir de caracteres fisiológicos, pelo método de agrupamento UPGMA, utilizando a distância euclidiana como medida de distância genética e a média dos grupos para as variáveis de maior contribuição relativa.

CARACTERES FISIOLÓGICOS

Grupos Genótipos A gs A/gs

I 6, 15, 1, 11, 8 22,76 393,94 74,21

II 3, 9, 2, 4, 12, 18 14,27 142,68 106,40 III 17, 20, 7, 16, 19, 5 7,86 80,44 107,65

Dentre os caracteres fisiológicos, as variáveis que apresentaram maior contribuição relativa para a divergência genética, segundo o método de Singh (1981) foram: A, gs e A/gs (Tabela 6).

Tabela 6. Contribuição relativa de caracteres fisiológicos, na divergência entre acessos V. curassavica. CARACTERES FISIOLÓGICOS Variável S.j. Valor (%) A 61,092215 26,2145 gs 137,006458 58,7891 Ci 3,293847 1,4134 TTE 9,732997 4,1764 A/E 2,524935 1,0834 A/gs 14,016721 6,0145 A/Ci 5,380151 2,3086

S.j. = Estimativa da contribuição relativa de cada característica.

3.3. Características morfofisiológicas

O teste de Scott Knott formou um único grupo apenas para a variável DAF, enquanto que para MST e FMI formou quatro grupos. De acordo com o teste F, todas as variáveis apresentaram significância (a 1% ou a 5%). As variáveis obtiveram valores do coeficiente de variação experimental considerados como de médios a altos, exceto AFE (8,2%) e FMF (8,9%). As herdabilidades foram todas de média a alta (Tabela 7).

Tabela 7. Médias das dezessete características avaliadas em 17 acessos de V. curassavica estabelecidas pelo teste de Scott Knott e resumo da análise de variância relacionadas às características morfofisiológicas de V. currassavica com as respectivas estimativas de parâmetros de média, teste F, coeficiente de variação experimental (Cve%), coeficiente de variação genético (CVg%), índice de variação (IV) e coeficiente de determinação genotípica (h2).

CARACTERES MORFOFISIOLÓGICOS

GENÓTIPOS ALT ERP ERL CRL NRL AFT AFU AFE IAF 1 51,8b 4,1b 7,1b 13,5b 15,6c 1013,9b 17,4b 190,0b 1,0b 2 65,8a 6,5a 54,0a 20,1a 17,3c 932,7b 21,8a 134,0c 0,6b 3 47,1b 4,0b 5,4b 13,5b 28,0a 2071,0a 14,7b 220,1ª 2,0a 4 61,5a 5,6a 4,9b 14,2b 13,6c 1427,4a 18,5b 181,9b 3,5a 5 57,9a 5,5a 6,4b 12,7b 17,6c 1286,5b 18,9b 175,8b 4,1a 6 65,0a 5,9a 10,3b 18,0a 16,0c 1446,7a 24,9a 204,7a 1,3b 7 47,7b 3,7b 7,7b 17,2a 12,6c 1676,8a 22,5a 185,3b 2,5a 8 61,2a 5,5a 9,3b 18,5a 15,6c 1522,0a 25,3a 190,1b 1,4b 9 52,8b 6,4a 6,9b 12,6b 21,6b 1629,9a 22,6a 158,2c 2,6a 11 56,8a 5,6a 6,3b 18,3a 13,6c 1242,3b 14,2b 167,9c 1,1b 12 49,1b 5,5a 7,1 b 17,6a 13,6c 975,5b 14,5b 196,2b 1,1b 15 56,5a 5,0b 9,4b 14,4b 13,0c 1000,5b 26,0a 185,5b 2,4a 16 61,2a 7,4a 9,1b 19,5a 17,3c 1415,5a 21,5a 190,9b 1,5b 17 47,4b 4,0b 6,9b 19,5a 16,6c 1738,3a 19,2b 180,2b 2,2a 18 51,7b 6,3a 6,7 b 15,3b 13,6c 1321,3b 17,4b 162,6c 2,0a 19 53,6b 4,1b 6,4b 18,5a 16,3c 1595,6a 21,7a 210,9a 1,9b 20 62,6a 4,8b 5,3b 12,7b 19,0c 2006,0a 21,9a 154,8c 2,3a Médias 55,9 5,3 9,9 16,8 16,4 1429,5 20,2 181,7 1,0 Teste F 2,3* 3,4** 3,4** 4,9** 4,9** 4,0** 2,0* 6,3** 2,8** Cve% 12,6 18,5 108,1 12,9 17,8 20,5 22,5 8,2 46,7 CVg% 8,5 16,6 96,3 14,8 20,3 20,5 13,1 10,9 36,5 IV 0,6 0,9 0,9 1,1 1,2 1,0 0,6 1,3 0,8 h² 57,7 70,8 70,4 79,9 79,6 75,2 50,3 83,9 64,7 Continua...

Tabela 7. Continuação...

CARACTERES MORFOFISIOLÓGICOS

GENÓTIPOS DAF MST FRL FRP FMI FMR FMF RAF 1 0,06a 26,61d 0,20a 0,23b 0,05b 0,24a 0,28b 38,8b 2 0,02a 44,16 a 0,19a 0,26b 0,02d 0,19b 0,33a 34,5b 3 0,34a 37,77b 0,16b 0,25b 0,01d 0,24a 0,34a 64,3a 4 0,17a 31,66c 0,18a 0,34a 0,07b 0,15b 0,25c 44,7b 5 0,23 a 40,25a 0,19a 0,25b 0,05b 0,21a 0,28b 33,2b 6 0,05a 24,45 d 0,19 a 0,26b 0,02c 0,22a 0,28b 45,2b 7 0,16a 29,87c 0,15b 0,26b 0,04c 0,23a 0,32a 57,2a 8 0,07a 29,78c 0,20a 0,21b 0,007d 0,26a 0,32a 51,0a 9 0,14a 39,54b 0,14b 0,31a 0,0d 0,23a 0,32a 36,3b 11 0,06a 32,42c 0,18a 0,27b 0,03c 0,21b 0,30a 39,5b 12 0,06a 30,69 c 0,21a 0,26b 0,10a 0,17b 0,22c 36,9b 15 0,12a 21,71d 0,14b 0,31a 0,03c 0,22a 0,29b 45,6b 16 0,08a 36,47b 0,18a 0,29a 0,01d 0,24a 0,29b 39,4b 17 0,14a 38,63b 0,19a 0,24b 0,04c 0,20b 0,33a 45,6b 18 0,12a 35,34b 0,20a 0,26b 0,07b 0,19b 0,27b 35,4b 19 0,12a 31,86c 0,18a 0,23b 0,02d 0,26a 0,31a 53,6a 20 0,12a 46,94a 0,13b 0,33a 0,007d 0,21b 0,31a 43,8b Médias 0,1 34,0 0,2 0,27 3,5 0,21 0,29 43,8 Teste F 2,3* 8,5** 2,2* 3,5** 9,3** 4,5** 4,0** 3,8** Cve% 70,2 16,3 14,4 11,9 46,3 11,4 8,9 17,5 CVg% 46,2 18,7 9,4 11,0 76,8 12,4 9,04 16,9 IV 0,6 1,5 0,6 0,9 1,6 1,1 1,0 0,9 h² 56,5 88,1 55,9 71,9 89,1 77,9 75,3 73,8

ALT: Altura (cm), ERP: comprimento dos entrenós dos ramos principais (cm), ERL: comprimento dos entrenós dos ramos laterais, CRL: comprimento médio dos ramos laterais, NRL: número de ramos laterais, AFT: área foliar total (cm²), AFU: área foliar unitária (cm²), AFE: área foliar específica (cm² g- ¹), IAF: índice de área foliar (cm² cm²), DAF: densidade de área foliar (cm² cm³). MST: massa seca total (g), FRL: fração de massa seca de ramos laterais (g), FRP: fração de massa seca de ramos principais (g), FMI: fração de massa seca de inflorescência (g), FMR: fração de massa seca de raiz (g), FMF: fração de massa seca de folhas (g), RAF: razão de área foliar (cm² g-¹).

Médias com mesma letra na coluna fazem parte de um mesmo grupo segundo o teste de Scott Knott. **Significativo a 1% de probabilidade pelo teste F

* Significativo a 5% de probabilidade pelo teste F.

No agrupamento pelo UPGMA, houve a formação de dois grupos (Figura 12), sendo o grupo II apenas com o genótipo 2 (Tabela 8).

Figura 12. Dendograma de 17 genótipos de V. curassavica gerado pelo método UGPMA, tendo como medida de dissimilaridade a distância euclidiana, com base em caracteres morfofisiológicos.

Tabela 8. Agrupamento dos genótipos de V. curassavica a partir de caracteres morfofisiológicos, pelo método de agrupamento UPGMA, utilizando a distância euclidiana como medida de distância genética e a média dos grupos para as variáveis de maior contribuição relativa.

CARACTERES MORFOFISIOLÓGICOS

Grupos Genótipos AFT AFE IAF

I 6, 8, 16, 17, 19, 7, 15, 11, 12, 1, 5, 9, 4, 18, 20, 3 1460,6 184,7 2,1

II 2 932,7 134,0 0,6

De acordo com a importância relativa dos caracteres para divergência genética entre os acessos, segundo o método de Singh (1981), observou-se que as características que mais contribuíram foram AFT (31,2165%), AFE (15,3399%) e IAF (14,4661%) (Tabela 9).

Tabela 9. Contribuição relativa de caracteres fisiológicos, na divergência entre acessos V. curassavica. CARACTERES MORFOFISIOLÓGICOS Variável S.j. Valor (%) ALT 3,253037 2,0391 ERP 7,846949 4,9188 ERL 8,173597 5,1235 CRL 7,340233 4,6011 NRL 9,651405 6,0498 AFT 49,80012 31,2165 AFU 4,174688 2,6168 AFE 24,471995 15,3399 IAF 23,077897 14,4661 DAF 1,058332 0,6634 MST 10,695264 6,7042 FRL 0,100773 0,0632 FRP 0,20504 0,1285 FMI 0,203775 0,1277 FMR 0,174814 0,1096 FMF 0,158444 0,0993 RAF 9,144957 5,7324

S.j. = Estimativa da contribuição relativa de cada característica.

3.4. Características fitoquímicas

De acordo com o teste de Scott Knott, as variáveis se agruparam de dois a três grupos. Observou-se diferença significativa entre todos os acessos em nível de 5% de probabilidade. O coeficiente de variação experimental indicou que a maioria das variáveis apresentaram valores médios, sendo que FLA (26,6%) e CLT (25,4%) apresentaram altos valores. Todas as variáveis apresentam alta herdabilidade (Tabela 10).

Tabela 10. Médias de oito características avaliadas em 17 acessos de V. curassavica estabelecidas pelo teste de Scott Knott e resumo da análise de variância relacionadas às características morfofisiológicas de V. currassavica com as respectivas estimativas de parâmetros de média, teste F, coeficiente de variação experimental (Cve%), coeficiente de variação genético (CVg%), índice de variação (IV) e coeficiente de determinação genotípica (h2).

CARACTERES FITOQUÍMICOS

GENÓTIPOS FLA FEN CLA CLB CLT CAR CAB CTC 1 1,07b 9,91b 8,50b 5,37a 13,71a 0,68b 1,55c 20,68a 2 1,53a 13,48a 7,75b 4,52a 12,28b 0,75b 1,71c 16,50b 3 1,31a 11,69a 7,73b 3,77b 13,09b 0,55b 1,58c 25,24a 4 0,99b 8,42c 8,77b 6,38a 15,15a 0,71b 1,42c 22,20a 5 0,93b 10,74b 9,09b 5,27a 14,37a 1,08a 1,74c 13,28b 6 0,67c 7,88c 9,04b 5,36a 13,54a 1,18a 1,67c 12,16b 7 1,32a 12,80a 7,82b 3,60b 11,43b 1,23a 2,16b 9,25b 8 0,85c 5,39d 8,16b 3,32b 11,48b 1,02a 2,64a 11,04b 9 0,52c 7,74c 9,84ª 3,60b 13,44a 1,16a 2,76a 11,63b 11 0,70c 6,86c 11,49ª 4,65a 16,01a 1,05a 2,51a 15,06b 12 0,46c 8,98b 9,42b 3,62b 12,97b 0,97a 2,57a 12,70b 15 0,56c 4,59d 7,27b 3,42b 10,69b 0,59b 2,12b 18,05a 16 0,83c 6,24d 9,50b 3,82b 12,00b 0,97a 2,29a 15,23b 17 0,96b 9,14b 11,32ª 4,40a 15,73a 1,37a 2,56a 11,58b 18 0,67c 8,55c 10,48ª 5,04a 15,13a 1,02a 1,82c 14,51b 19 0,46c 4,06d 8,84b 4,97a 13,81a 0,75b 1,75c 18,17a 20 1,35a 10,76b 9,07b 5,19a 14,26a 1,19a 1,79c 12,17b Médias 0,89 8,66 9,07 4,49 13,47 0,96 2,04 15,28 Teste F 5,9** 7,9** 5,1** 3,9** 2,8** 7,1** 8,3** 3,7** Cve% 26,6 19,3 10,0 17,3 11,9 16,4 12,9 25,4 CVg% 33,9 29,4 11,8 17,0 9,2 23,4 20,2 24,4 IV 1,2 1,5 1,2 1,0 0,8 1,4 1,5 0,9 h² 83,0 87,4 80,4 74,3 64,6 85,9 88,0 73,5

FLA: Flavonoides, FEN: Compostos fenólicos, CLA: clorofila a, CLB: clorofila b, CLT: clorofila total, CAR: carotenoides, CAB: relação de clorofila a/b, CTC: relação clorofila total e carotenoides.

Médias com mesma letra na coluna fazem parte de um mesmo grupo segundo o teste de Scott Knott. **Significativo a 1% de probabilidade pelo teste F.

Quanto aos caracteres fitoquímicos, foram formados dois grupos (Figura 13), sendo que o grupo II foi formado somente pelos acessos 1 e 2 (Tabela 11).

Figura 13. Dendograma de 17 genótipos de V. curassavica gerado pelo método UGPMA, tendo como medida de dissimilaridade a distância euclidiana, com base em caracteres fitoquímicos.

Tabela 11. Agrupamento dos genótipos de V. curassavica a partir de caracteres fitoquímicos, pelo método de agrupamento UPGMA, utilizando a distância euclidiana como medida de distância genética e a média dos grupos para as variáveis de maior contribuição relativa.

CARACTERES FITOQUÍMICOS

Grupos Genótipos FLA CLT CAB

I 9, 12, 11, 17, 5, 20, 6, 18, 8, 16, 7, 3, 4, 15, 16 0,83 13,54 2,09

II 1, 2 1,30 12,99 1,63

Para o agrupamento de acordo com os caracteres fitoquímicos, as características que mais contribuíram foram FLA (15,6564%), CLT (15,5582%) e CAB (15,1889%), de acordo com a importância relativa dos caracteres para divergência genética entre os acessos, segundo o método de Singh (1981) (Tabela 12).

Tabela 12. Contribuição relativa de caracteres fitoquímicos, na divergência entre acessos V. curassavica. CARACTERES FITOQUÍMICOS Variável S.j. Valor (%) FLA 233,677407 15,6564 FEN 139,214019 9,3274 CLA 149,251391 9,9999 CLB 170,056447 11,3938 CLT 232,212105 15,5582 CAR 172,63708 11,5667 CAB 226,699027 15,1889 CTC 168,787818 11,3088

S.j. = Estimativa da contribuição relativa de cada característica.