Anexo 1- Cromatograma obtido através da análise do extrato aquoso do cogumelo Champignon de Paris
fresco sob as condições estabelecidas neste trabalho: Fase móvel → (A) Água ultrapura : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) e (B) Acetonitrila : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) em gradiente (0 min - 95% A e 5% B; 10 min - 91% A e 9% B; 25 min - 83% A e 17% B; 38 min - 70% A e 30% B; 40 min - 40% A e 60% B; 45 min - 10% A e 90% B; 50 min - 95% A e 5% B), a uma vazão de 0,7 mL/min, temperatura da coluna a 35 oC, e volume de injeção de 100 µL, com tempo de corrida de 50 min, mantendo-se 10 min de re-equilíbrio do sistema antes da próxima injeção. A detecção foi realizada em detector de arranjo de diodos (DAD) à 280 nm. (8) Ácido trans-cinâmico.
Anexo 2 - Cromatograma obtido através da análise do extrato aquoso do cogumelo Portobello fresco sob as
condições estabelecidas neste trabalho: Fase móvel → (A) Água ultrapura : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) e (B) Acetonitrila : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) em gradiente (0 min - 95% A e 5% B; 10 min - 91% A e 9% B; 25 min - 83% A e 17% B; 38 min - 70% A e 30% B; 40 min - 40% A e 60% B; 45 min - 10% A e 90% B; 50 min - 95% A e 5% B), a uma vazão de 0,7 mL/min, temperatura da coluna a 35 oC, e volume de injeção de 100 µL, com tempo de corrida de 50 min, mantendo-se 10 min de re-equilíbrio do sistema antes da próxima injeção. A detecção foi realizada em detector de arranjo de diodos (DAD) à 280 nm. (8) Ácido trans- cinâmico.
112
Anexo 3 - Cromatograma obtido através da análise do extrato aquoso do cogumelo Shimeji fresco sob as
condições estabelecidas neste trabalho: Fase móvel → (A) Água ultrapura : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) e (B) Acetonitrila : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) em gradiente (0 min - 95% A e 5% B; 10 min - 91% A e 9% B; 25 min - 83% A e 17% B; 38 min - 70% A e 30% B; 40 min - 40% A e 60% B; 45 min - 10% A e 90% B; 50 min - 95% A e 5% B), a uma vazão de 0,7 mL/min, temperatura da coluna a 35 oC, e volume de injeção de 100 µL, com tempo de corrida de 50 min, mantendo-se 10 min de re-equilíbrio do sistema antes da próxima injeção. A detecção foi realizada em detector de arranjo de diodos (DAD) à 280 nm. (6) Ácido p- cumárico, (8) Ácido trans-cinâmico.
Anexo 4 - Cromatograma obtido através da análise do extrato aquoso do cogumelo Shimeji seco sob as
condições estabelecidas neste trabalho: Fase móvel → (A) Água ultrapura : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) e (B) Acetonitrila : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) em gradiente (0 min - 95% A e 5% B; 10 min - 91% A e 9% B; 25 min - 83% A e 17% B; 38 min - 70% A e 30% B; 40 min - 40% A e 60% B; 45 min - 10% A e 90% B; 50 min - 95% A e 5% B), a uma vazão de 0,7 mL/min, temperatura da coluna a 35 oC, e volume de injeção de 100 µL, com tempo de corrida de 50 min, mantendo-se 10 min de re-equilíbrio do sistema antes da próxima injeção. A detecção foi realizada em detector de arranjo de diodos (DAD) à 280 nm. (6) Ácido p- cumárico, (8) Ácido trans-cinâmico.
113
Anexo 5 - Cromatograma obtido através da análise do extrato aquoso do cogumelo Hiratake fresco sob as
condições estabelecidas neste trabalho: Fase móvel → (A) Água ultrapura : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) e (B) Acetonitrila : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) em gradiente (0 min - 95% A e 5% B; 10 min - 91% A e 9% B; 25 min - 83% A e 17% B; 38 min - 70% A e 30% B; 40 min - 40% A e 60% B; 45 min - 10% A e 90% B; 50 min - 95% A e 5% B), a uma vazão de 0,7 mL/min, temperatura da coluna a 35 oC, e volume de injeção de 100 µL, com tempo de corrida de 50 min, mantendo-se 10 min de re-equilíbrio do sistema antes da próxima injeção. A detecção foi realizada em detector de arranjo de diodos (DAD) à 280 nm. (6) Ácido p- cumárico, (8) Ácido trans-cinâmico.
Anexo 6 - Cromatograma obtido através da análise do extrato aquoso do cogumelo Shiitake, cultivado em
tora de eucalipto, sob as condições estabelecidas neste trabalho: Fase móvel → (A) Água ultrapura : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) e (B) Acetonitrila : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) em gradiente (0 min - 95% A e 5% B; 10 min - 91% A e 9% B; 25 min - 83% A e 17% B; 38 min - 70% A e 30% B; 40 min - 40% A e 60% B; 45 min - 10% A e 90% B; 50 min - 95% A e 5% B), a uma vazão de 0,7 mL/min, temperatura da coluna a 35 oC, e volume de injeção de 100 µL, com tempo de corrida de 50 min, mantendo-se 10 min de re-equilíbrio do sistema antes da próxima injeção. A detecção foi realizada em detector de arranjo de diodos (DAD) à 280 nm.. (8) Ácido trans-cinâmico.
114
Anexo 7 - Cromatograma obtido através da análise do extrato aquoso do cogumelo Shiitake, cultivado em
composto à base de serragem e resíduos da agroindústria, sob as condições estabelecidas neste trabalho: Fase móvel → (A) Água ultrapura : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) e (B) Acetonitrila : Ácido Fórmico (996 mL : 4 mL) em gradiente (0 min - 95% A e 5% B; 10 min - 91% A e 9% B; 25 min - 83% A e 17% B; 38 min - 70% A e 30% B; 40 min - 40% A e 60% B; 45 min - 10% A e 90% B; 50 min - 95% A e 5% B), a uma vazão de 0,7 mL/min, temperatura da coluna a 35 oC, e volume de injeção de 100 µL, com tempo de corrida de 50 min, mantendo-se 10 min de re-equilíbrio do sistema antes da próxima injeção. A detecção foi realizada em detector de arranjo de diodos (DAD) à 280 nm.. (8) Ácido trans-cinâmico.
115
CONCLUSÃO GERAL
Os extratos aquosos dos cogumelos Champignon de Paris fresco (Agaricus bisporus branco), Portobello fresco (Agaricus bisporus marrom), Shimeji fresco e seco (Pleurotus ostreatus), Hiratake fresco (Pleurotus ostreatus), Salmon fresco (Pleurotus ostreatoroseus) e Shiitake (Lentinula edodes), cultivado em tora de eucalipto e em composto à base de serragem, mostraram atividade antioxidante para os quatro métodos empregados. No entanto, a capacidade antioxidante dos extratos de cogumelos comestíveis estudados não foi tão alta como a encontrada em outros alimentos, mas, ainda assim, podem contribuir significativamente para uma boa condição de saúde.
Na análise com o radical DPPH• o Portobello e o Champignon de Paris fresco apresentaram os menores valores de IC 50, indicando maior ação antioxidante por esta metodologia. Na análise com o radical ABTS+• e no ORAC os cogumelos que apresentaram maior ação antioxidante foram o Hiratake e o Salmon. Na análise FRAP os cogumelos que apresentaram maior atividade antioxidante foram o Champignon de Paris fresco, Portobello e Shiitake cultivado em composto.
O grau de maturação mais avançado do cogumelo Hiratake, em relação ao Shimeji fresco, implicou em uma maior atividade antioxidante em todos os métodos empregados.
Nesta investigação, os extratos aquosos obtidos a partir dos cogumelos Salmon, Hiratake e Portobello apresentaram os maiores teores de CFT.
O processamento empregado ao cogumelo Champignon de Paris diminuiu consideravelmente o teor de CFT enquanto que no processo de secagem empregado ao cogumelo Shimeji não houve diminuição drástica no teor de CFT.
O estágio maturo dos cogumelos P. ostreatus implicou em um maior teor de CFT em relação ao estágio imaturo.
Correlações positivas entre os resultados de CFT e os métodos de atividade antioxidante foram encontradas, e essa correlação foi maior para o ensaio com o radical livre ABTS•+ e o ORAC do que para o ensaio FRAP. Já entre o DPPH e os resultados de CFT foi encontradada baixa correlação negativa.
Dentre os oito compostos fenólicos investigados, três foram identificados (ácido siríngico, ácido p-cumárico e ácido trans-cinâmico) nos extratos dos cogumelos, com predominância do ácido trans-cinâmico.
116
O estágio imaturo dos cogumelos P. ostreatus implicou em um maior teor dos ácidos p-cumárico e trans-cinâmico em relação aos cogumelos colhidos em estágio maturo.
Os extratos aquosos dos cogumelos Shiitake apresentaram excelente atividade antimicrobiana contra as leveduras C. albicans, C. rugosa, C. tropicalis, C. glabrata e C. utilis mostrando seu potencial de utilização pela indústria farmacêutica.
117
SUGESTÕES PARA TRABALHOS FUTUROS
Otimizar condições para extração de compostos fenólicos em cogumelos através de superfície de resposta.
Empregar outros métodos de avaliação do potencial antioxidante que incluam radicais livres gerados nos organismos vivos.
Aprofundar o estudo da composição fenólica dos cogumelos comestíveis, produzidos no Brasil, empregando técnicas complementares de identificação como a espectrometria de massas.
Realizar ensaios biológicos com o objetivo de avaliar a atividade anticâncer, antimutagênica, antiinflamatória, antioxidante e hipocolesterômica de extratos de cogumelos comestíveis produzidos no Brasil.