O EEPV e suas frações (FHEEPV, FDEEPV e FAEEPV) foram submetidos ao ensaio colorimétrico qualitativo para inibição da enzima acetilcolinesterase. Este ensaio é baseado no procedimento descrito por Ellman et al. (1961), e adaptado para CCD por Rhee et al. (2001).
Uma alíquota de 5 µL das amostras na concentração de 10 mg/mL foram aplicados em CCD, borrifados com uma mistura de (1:1) de iodeto de acetilcolina (ACTl) 1mmol/L com o reagente de Ellman (ácido 5,5’-ditiobis-(2-nitrobenzóico) (DTNB) 1mmol/L, e depois com a enzima acetilcolinesterase (3 U/mL). Passados 10 min, ocorre o surgimento de uma coloração amarela, porém, onde há inibição da enzima, observa-se um halo branco em torno dos “spots” onde foram aplicadas as amostras. Como controle positivo foi utilizado uma solução do padrão sal de Eserina (2 mg/mL), e como controle negativo foram utilizados solventes. Os ensaios foram realizados no Laboratório de Produtos Naturais e Química Medicinal (LPNQUIMED) pela estudante de Doutorado Irvila Ricarte de Oliveira.
5 CONSIDERAÇÕES FINAIS
Este trabalho resultou até o momento, no isolamento e identificação de seis substâncias: 2’-hidroxi-4’,7-dimetoxiisoflavana [PV-1], lup-20(29)-en-3-ol [PV-2], 2’,7- dihidroxi-4’-metoxiisoflavana [PV-3], 4’,7-dihidroxi-2’-metoxiisoflavana [PV-4], 2’,4’- dihidroxi-7-metoxiisoflavana [PV-5] e 2’,4’,4-trihidroxichalcona [PV-6].
Houve a identificação de seis compostos no óleo fixo, sendo três destes ésteres metílicos: hexadecanoato de metila, octadecanoato de metila e tetracosanoato de metila.
Além destes, houve a determinação do teor de fenólicos no extrato etanólico (133,3 ± 4,35 mg de EAG/ g de amostra), e a comprovação da atividade antioxidante e anticolinesterásica, principalmente na FAEEPV e FMEEPV, obtendo resultados superiores ao do padrão Vitamina C e resultados positivos em relação ao padrão sal de Eserina, respectivamente;
Como perspectivas futuras, pretende-se isolar outras substâncias derivadas da própolis vermelha, e submetê-las a uma avaliação dos seus efeitos citotóxicos.
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