O procedimento de autoadministração foi adaptado de GEORGE et al. (2007).
3.6.1 Caixa para Autoadministração
As caixas para
autoadministração de nicotina (INSIGHT®, Ribeirão Preto, SP, Brasil) consistiram de caixas de acrílico medindo 24,5 cm de comprimento, 30 cm de largura e 30,5 cm de altura. O chão da caixa consistiu de uma bandeja de acrílico coberta por uma fina camada de serragem. Em uma das paredes da caixa encontrava-se um painel removível, com duas barras retráteis nas laterais a 5 cm do chão. Acima de cada barra existia uma luz amarela que sinalizava qual era a barra ativa e outra luz verde que sinalizava a liberação da substância. No centro dessa mesma lateral existia uma luz branca de baixa intensidade (dim 40-lx) a 1 cm do teto que sinalizava o início da sessão de autoadministração. No centro do teto havia um orifício circular de 5 cm de diâmetro que possibilita a passagem e a livre movimentação do cateter, para administração de nicotina. Esse cateter estava conectado a um “swivel” contrabalançado, que estava conectado a uma seringa em uma bomba de infusão de drogas. A caixa experimental ficava alojada dentro de uma caixa de madeira equipada com ventilador. Essa caixa de madeira promovia isolamento acústico e luminoso. O painel e a bomba estavam conectados a uma interface ligada a um computador, contendo um programa especifico (PAparato – INSIGHT®, Ribeirão Preto, SP, Brasil) para o controle do esquema de razão das infusões.
Figura 3.3 - Caixa de autoadministração de nicotina
3.6.2 Treino com Sacarose 6%
Neste treino os animais ao pressionarem a barra uma vez recebiam 0,3 ml da solução (razão fixa 1 - RF1). Cada sessão tinha a duração de sessenta minutos. Os animais não foram privados de água ou comida. Os ratos que não aprenderam a pressionar a barra para receber o reforço de sacarose foram excluídos do experimento (± 5% por experimento). Vinte e quatro horas após este treino os animais foram submetidos ao procedimento cirúrgico para o implante do catéter na veia jugular.
3.6.3 Cirurgia para a Implantação do Catéter na Veia Jugular
Os animais foram submetidos à cirurgia para a implantação de um catéter (silicone, diâmetro interno 0,63 mm e diâmetro externo 1,17mm) na veia jugular para autoadministração intravenosa de nicotina.
Com um bisturi foi feito uma incisão de aproximadamente 1 cm paralela ao ombro direito do animal. Com uma tesoura pequena o tecido muscular e adiposo foi dissecado até a visualização da veia jugular. A veia jugular foi então exposta e isolada na porção imediatamente posterior a sua ramificação. Todo o tecido adiposo e conectivo ao redor da veia foi removido.
Após a cirurgia os animais foram submetidos a um período de recuperação de no mínimo 5 dias. Nesse período os animais foram pesados e manipulados diariamente e tiveram livre acesso à água e comida e tratados com injeções diárias de cetoprofeno (5,0 mg/kg; i.m.), heparina 20 UI (0,2 ml, i.v.) e cefazolina (10,0 mg/kg; i.v.) por três dias consecutivos.
3.6.4 Aquisição da Autoadministração de Nicotina
Após cinco dias de recuperação do processo cirúrgico os animais foram submetidos ao processo de aquisição da autoadministração de nicotina, iniciamos o protocolo com administração de solução de sacarose 6%. Este procedimento tinha a finalidade de fazer com que o animal retornasse a pressionar a barra ativa (a barra inativa estava retraída). A sessão foi programada em um esquema de RF1. Cada
sessão teve a duração de sessenta minutos e os animais não foram privados de água ou comida. Após duas sessões de autoadministração de sacarose, foram realizadas sessões de autoadministração simultânea de nicotina (0,03 mg/Kg/infusão, i.v., 0,1ml/ segundo) e sacarose 6% (0,3 ml; v.o.) em esquema RF1. As sessões tinham a duração de uma hora ou era finalizada após 10 reforços de nicotina + sacarose. As sessões de autoadministração simultânea foram encerradas após os animais completarem duas sessões com o critério de finalização de dez reforços. Durante todo o experimento após os animais terem recebido um reforço, qualquer pressão na barra ativa não era mais reforçada durante 10 segundos, esse período é conhecido como “time-out”, que é importante para evitar a intoxicação dos animais.
Na próxima fase, os animais passaram a receber apenas reforços de nicotina. As sessões tiveram uma hora de duração em RF1. Os critérios de finalização de cada sessão foram mantidos como na fase anterior. Quando os animais finalizavam duas sessões com 10 reforços, na sessão seguinte eles passavam de RF1 para RF3. Para essa transição, a sessão iniciava-se com esquema de RF1, após três reforços recebidos a sessão passava para o esquema de RF2 e após três reforços passava para RF3, finalizando após mais 4 reforços, totalizando 10 infusões de nicotina. Os animais que completavam esta etapa passavam para a fase de manutenção.
Foi adotado um critério de exclusão no qual os animais que em cinco sessões não havia completado duas sessões com 10 reforços em RF1, foram excluídos do experimento (± 20% dos animais).
3.6.5 Manutenção da Autoadministração de Nicotina
Esta fase foi programada em esquema de RF3, cada sessão teve a duração de três horas e os animais que completavam três sessões com 10 infusões de nicotina finalizavam a fase de manutenção. Os animais que não completavam a fase de manutenção em no máximo cinco sessões foram excluídos do experimento (± 10% dos animais).
3.6.6 Razão Progressiva
Após a fase de manutenção da autoadministração, um esquema de razão progressiva (RP) de resposta foi implantado, ou seja, o número de respostas para a obtenção de um reforço aumentava a cada reforço obtido (nicotina - 0,03 mg/kg/infusão, i.v., 0,1 ml/segundo; “time-out” 10 segundos). Na razão progressiva foi utilizada a escala aritmética para o incremento do número de respostas para obtenção de um reforço (1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12,...) como descrito por Hodos et al. (1968). A sessão era encerrada quando o animal ficava sessenta minutos sem obtenção de um reforço.
A última razão completada, o número de infusões de nicotina recebidas e o número de respostas durante a sessão de RP, caracterizaram o ponto de ruptura. Foram realizadas três sessões de razão progressiva.
3.6.7 Acesso Livre Prolongado de 24 horas
Um protocolo de acesso contínuo à nicotina (0,03 mg/kg/infusão, i.v., 0,1 ml/segundo, FR1, “time out” 10 segundos) foi implementado por um período de 24 horas. A quantidade de nicotina administrada, o número de respostas na barra ativa e o número de reforços obtidos foram utilizados como variáveis dependentes.
3.7 Autoadministração de Etanol (Experimentos Realizados na Faculdade de