Avaliação da Genotoxicidade e Mutagenicidade

As plantas são amplamente utilizadas na medicina tradicional e além disso, ultimamente essas plantas estão sendo utilizadas para o desenvolvimento de novos agentes farmacológicos (NEWMAN; CRAGG, 2007). No entanto, o equilíbrio entre os

efeitos terapêuticos e toxicológicos de um composto é um parâmetro muito importante a ser avaliado. Assim, a determinação do potencial genotóxico e mutagênico dessas fontes naturais tornam-se necessárias.

As análises citogenéticas, como aberrações cromossômicas, formações de micronúcleos, trocas entre cromátides irmãs, entre outras, e as análises bioquímicas como o ensaio do cometa, podem ser avaliadas em diferentes tipos celulares, a fim de identificar possíveis danos ao DNA ocasionados por agentes químicos ou agentes físicos. Para a avaliação dos níveis de danos no DNA, no presente estudo foi empregado o ensaio do cometa e o teste do micronúcleo. De acordo com SCHMITTA et al. (2003) diferentes produtos de origem natural, amplamente utilizados nos últimos tempos, podem ser potencialmente genotóxicos. O que torna indispensável a análise dos extratos e frações de E. jambolana quanto às suas características genotóxicas e mutagênicas, uma vez que nos ensaios anteriores apresentaram boa atividade quimiopreventiva. De acordo com Zeiger (2007), antes de afirmar que uma substância possui efeito antigenotóxico ou quimiopreventivo, deve-se também avaliar seu perfil genotóxico.

Investigação de dano ao DNA em células HepG2 pelo ensaio do cometa tem sido usada como biomarcador sensível para avaliar os efeitos genotóxicos, além disso este ensaio é conveniente para estudar quantitativamente as relações concentração- resposta in vitro (UHL et al., 2003).

Em relação à análise da genotoxicidade, pôde-se observar que durante o tratamento das células HepG2 com altas concentrações tanto dos extratos quanto das frações, esses compostos foram potencialmente genotóxicos. Os extratos EB-Fo (Tabela 3) e EB-Fr (Tabela 5) foram genotóxicos nas concentrações de 5 a 40 μg/mL, a fração BU-Fo (Tabela 4) de 5 a 50 μg/mL e a fração HA-Fr (Tabela 6) de 5 a 30 μg/mL. Infelizmente o perfil de genotoxicidade foi observado nas concentrações em que esses

extratos e frações apresentaram indução da enzima quinona-redutase. Somente em concentrações menores, ou seja, iguais e inferiores a 2,5 μg/mL os extratos e frações das folhas e dos frutos de E.jambolana não demonstraram efeito genotóxico, porém nessas condições também não apresentaram atividade da enzima quinona-redutase.

O efeito genotóxico em maiores concentrações pode estar relacionado com alguns componentes presentes nas folhas e nos frutos de E. jambolana, pois polifenóis e taninos em altas concentrações apresentam efeito celular tóxico (KASHIWADA et al., 1992).

No entanto, há também a presença de antocianinas nos frutos de E. jambolana que, de acordo com a literatura, de modo geral não são tóxicas, além disso, seu consumo regular e de outros flavonóides presentes em frutas, vegetais, geléias e vinhos é recomendado, pois essa ingestão está associada com uma provável redução dos riscos de doença cardiovascular, diabetes, doenças no fígado, doenças neurodegenerativas como Alzeimer e Parkinson, inflamações, doenças crônicas como o câncer, devido ao seu efeito antimutagênico, e atividade quimiopreventiva, além de possuir forte atividade antioxidante (MESKIN et al., 2004; COOKE et al., 2005; ANDERSEN; MARKHAM, 2006; VAREED et al., 2006; CHEN et al., 2006; VEIGAS et al., 2007; REYNERTSON

et al., 2008; ZHANG et al., 2008; CHARRON et al., 2009).

A avaliação da atividade genotóxica de produtos naturais vem sendo muito explorada nos últimos tempos e para melhor complementar os resultados obtidos pelo ensaio do cometa foi avaliada a atividade mutagênica dos extratos e frações de E.

jambolana por meio do teste do micronúcleo. A diferença entre os dois ensaios é

basicamente devido às variações entre os tipos de alterações no DNA.

Para a realização do teste do micronúcleo, foram utilizadas concentrações não genotóxicas determinadas a partir do ensaio do cometa. Os resultados obtidos durante a

avaliação da mutagenicidade em células HepG2 demonstraram que os extratos EB-Fo (Tabela11) e EB-Fr (Tabela13) e a fração HA-Fr (Tabela 14) não apresentaram diferença estatística do controle negativo, por esse fato são considerados não mutagênicos nas concentrações testadas. Porém a fração BU-Fo (Tabela 12) apresentou um aumento significativo na frequência de micronúcleos nas concentrações de 0,15 a 0,62 μg/mL, demonstrando assim diferença estatística do controle negativo, ou seja, um efeito mutagênico.

O índice de divisão nuclear (IDN) tanto para os extratos como para as frações demonstrou uniformidade na divisão, quando comparado com o controle negativo. A mensuração do IDN consiste na análise da frequência de núcleos para medir a extensão e a progressão da divisão nuclear de uma célula em divisão, fornece dados importantes sobre o efeito citostático de agentes químicos ou físicos, auxilia também na identificação de moléculas que podem estimular a divisão celular. Todos esses dados podem ser obtidos na mesma lâmina em que é realizada a leitura dos micronúcleos. Essas informações só são obtidas a partir da realização do bloqueio da citocinese (FENECH, 1997).

O fato da maioria dos extratos e frações testados não apresentarem efeito mutagênico pode estar novamente relacionado com os seus constituintes, pois de acordo com Bridle; Timberlake (1996), as antocianinas que estão presentes em diversas frutas e vegetais incluindo a E. jambolana, não são mutagênicas. Ao contrário, possuem propriedades terapêuticas, são capazes prevenir várias doenças relacionadas ao estresse oxidativo, pois são capazes de inibir, através da alimentação, os processos oxidativos e inflamatórios (MAILEN-AUBERT et al., 2001; ANDERSEN & MARKHAM, 2006; MULABAGAL et al., 2009)

Sabe-se que o ensaio cometa detecta lesões primárias no DNA, ou seja, danos passíveis de reparo, enquanto o teste do micronúcleo detecta lesões irreparáveis (SCOLASTICI et al., 2008; SALVADORI et al., 1993). Então, pode-se sugerir, frente aos resultados, que em menores concentrações somente a fração BU-Fo foi capaz de causar danos irreparáveis ao DNA observados através do teste do micronúcleo. No entanto, pelo ensaio do cometa, as concentrações iguais e inferiores a 2,5 μg/mL, dos extratos e frações de E. jambolana não causaram danos ao DNA.