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3 MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 BACTÉRIAS E PLASMÍDEOS

Os microrganismos e os plasmídeos utilizados neste trabalho estão listados nas tabelas 1 e 2: RNA polimerase do fago T7).

SAMBROOK et al., 1989

JM109 (DE3) recA1 supE44 endA1 hsdR17 gyrA96 relA1 thi Δ (lac-proAB) F´[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] NalR (produtora da RNA polimerase do fago T7)

SAMBROOK et al., 1989

YMC 10 lacUΔ169, endA1, thi-1, hsdR17, supE44 BACKMAN et al, 1981 S17.1 RP4-2 Tc::Um Km::Tn7 tra+, recA, SmR SIMON, et al., 1983

R confere resistência ao referido antibiótico

TABELA 2 – PLASMÍDEOS

Plasmídeos Principais Características

Referência/Fonte pDK7 Vetor de expressão/ promotor tac,lacIq, CmR KLEINER et al., 1988 pKD7LAC-cisY18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pDK7LAC-cisL52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pDK7LAC-cis3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina e da valina 138 por ácido glutâmico clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pDK7LAC-L14P/Y18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 14 por prolina e da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pDK7LAC-L52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pDK7LAC-I96V Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pDK7LAC-R157H

Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da arginina 157 por histidina clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pDKLAC-4 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pDK7, CmR

Este trabalho

pEMS140 Contém a fusão nifB::lacZ de H. seropedicae no vetor pPW452, TcR.

REGO, 1997

pET28a Vetor de expressão/promotor T7 /com fusão His-tag , KmR NOVAGEN pETLAC-cisY18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLAC-cisL52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLAC-cis3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina e da valina 138 por ácido glutâmico clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLAC-L14P/Y18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 14 por prolina e da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLAC-L52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLAC-I96V Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLAC-R157H Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da arginina 157 por histidina clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLAC-4 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pET28a, KmR

Este trabalho

pETLET-Y18F Contém a seqüência codificadora do domínio N-terminal da NifA de H. seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pET28a, KmR

ETTO, 2006

pETLET-L52Q Contém a seqüência codificadora do domínio N-terminal da NifA de H. seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pET28a, KmR

ETTO, 2006

pETLET-4.2 Contém a seqüência codificadora do domínio N-terminal da NifA de H. seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pET28a, KmR

ETTO, 2006

pLAFR3.18 Vetor de ampla faixa hospedeira com sítio de policlonagem do vetor pTZ-18R, TcR, CmR

SOUZA, et al., 1999

pLAFR3.18nifACT Contém a seqüência codificadora da região promotora e os domínios Central+C-terminal da proteína NifA de H. seropedicae clonada no vetor pLAFR3.18

NOINDORF, 2006

pLAC-cisY18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pLAC-cisL52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pLAC-cis3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina e da valina 138 por ácido glutâmico clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pLAC-L14P/Y18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 14 por prolina e da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pLAC-L52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pLAC-I96V Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pLAC-R157H Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da arginina 157 por histidina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pLAC-4 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

Este trabalho

pMP220 Vetor para fusão transcricional lacZ, TcR SPAINK et al., 1987

pMPLAC-NifA pRAMM3 co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-ΔNNifA pRAMM4 co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-cisY18F pDKLAC-cisY18F co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-cisL52Q pDKLAC-cisL52Q co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-cis3 pDKLAC-cis3 co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-L14P/Y18F pDKLAC-DUPLO co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-L52Q pDKLAC-L52Q co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-I96V pDKLAC-I96V co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-R157H pDKLAC-R157H co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pRAM1 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae clonadano vetor pET28a, KmR

MONTEIRO et al., 1999

pRAM2 Contém a seqüência codificadora dos domínios Central+C-terminal da proteína NifA de H. seropedicae clonada no vetor pET28a, KmR

MONTEIRO et al., 1999

pRAMM1 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

OLIVEIRA, M.A.

pRAMM2 Contém a seqüência codificadora dos domínios Central+C-terminal da NifA de H. seropedicae clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR

OLIVEIRA, M.A.

pRAMM3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.

seropedicae clonada no vetor pDK7, CmR

OLIVEIRA, M.A.

pRAMM4 Contém a seqüência codificadora dos domínios Central+C-terminal da NifA de H. seropedicae clonada no vetor pDK7, CmR

OLIVEIRA, M.A.

pRT22 Contém a fusão nifH::lacZ de K. pneumoniae, CmR TULI & MERRICK, et al., 1988

R confere resistência ao referido antibiótico

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