3 MATERIAIS E MÉTODOS
3.1 BACTÉRIAS E PLASMÍDEOS
Os microrganismos e os plasmídeos utilizados neste trabalho estão listados nas tabelas 1 e 2: RNA polimerase do fago T7).
SAMBROOK et al., 1989
JM109 (DE3) recA1 supE44 endA1 hsdR17 gyrA96 relA1 thi Δ (lac-proAB) F´[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] NalR (produtora da RNA polimerase do fago T7)
SAMBROOK et al., 1989
YMC 10 lacUΔ169, endA1, thi-1, hsdR17, supE44 BACKMAN et al, 1981 S17.1 RP4-2 Tc::Um Km::Tn7 tra+, recA, SmR SIMON, et al., 1983
R confere resistência ao referido antibiótico
TABELA 2 – PLASMÍDEOS
Plasmídeos Principais Características
Referência/Fonte pDK7 Vetor de expressão/ promotor tac,lacIq, CmR KLEINER et al., 1988 pKD7LAC-cisY18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pDK7LAC-cisL52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pDK7LAC-cis3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina e da valina 138 por ácido glutâmico clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pDK7LAC-L14P/Y18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 14 por prolina e da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pDK7LAC-L52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pDK7LAC-I96V Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pDK7LAC-R157H
Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da arginina 157 por histidina clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pDKLAC-4 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pDK7, CmR
Este trabalho
pEMS140 Contém a fusão nifB::lacZ de H. seropedicae no vetor pPW452, TcR.
REGO, 1997
pET28a Vetor de expressão/promotor T7 /com fusão His-tag , KmR NOVAGEN pETLAC-cisY18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLAC-cisL52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLAC-cis3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina e da valina 138 por ácido glutâmico clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLAC-L14P/Y18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 14 por prolina e da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLAC-L52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLAC-I96V Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLAC-R157H Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da arginina 157 por histidina clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLAC-4 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pET28a, KmR
Este trabalho
pETLET-Y18F Contém a seqüência codificadora do domínio N-terminal da NifA de H. seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pET28a, KmR
ETTO, 2006
pETLET-L52Q Contém a seqüência codificadora do domínio N-terminal da NifA de H. seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pET28a, KmR
ETTO, 2006
pETLET-4.2 Contém a seqüência codificadora do domínio N-terminal da NifA de H. seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pET28a, KmR
ETTO, 2006
pLAFR3.18 Vetor de ampla faixa hospedeira com sítio de policlonagem do vetor pTZ-18R, TcR, CmR
SOUZA, et al., 1999
pLAFR3.18nifACT Contém a seqüência codificadora da região promotora e os domínios Central+C-terminal da proteína NifA de H. seropedicae clonada no vetor pLAFR3.18
NOINDORF, 2006
pLAC-cisY18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pLAC-cisL52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pLAC-cis3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina e da valina 138 por ácido glutâmico clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pLAC-L14P/Y18F Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 14 por prolina e da tirosina 18 por fenilalanina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pLAC-L52Q Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da leucina 52 por glutamina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pLAC-I96V Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pLAC-R157H Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da arginina 157 por histidina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pLAC-4 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae com troca da isoleucina 96 por valina, do ácido glutâmico 134 por valina, da valina 138 por ácido glutâmico e da arginina 157 por histidina clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
Este trabalho
pMP220 Vetor para fusão transcricional lacZ, TcR SPAINK et al., 1987
pMPLAC-NifA pRAMM3 co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-ΔNNifA pRAMM4 co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-cisY18F pDKLAC-cisY18F co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-cisL52Q pDKLAC-cisL52Q co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-cis3 pDKLAC-cis3 co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-L14P/Y18F pDKLAC-DUPLO co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-L52Q pDKLAC-L52Q co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-I96V pDKLAC-I96V co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pMPLAC-R157H pDKLAC-R157H co-integrado com pMP220, CmR, TcR Este trabalho pRAM1 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae clonadano vetor pET28a, KmR
MONTEIRO et al., 1999
pRAM2 Contém a seqüência codificadora dos domínios Central+C-terminal da proteína NifA de H. seropedicae clonada no vetor pET28a, KmR
MONTEIRO et al., 1999
pRAMM1 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
OLIVEIRA, M.A.
pRAMM2 Contém a seqüência codificadora dos domínios Central+C-terminal da NifA de H. seropedicae clonada no vetor pLAFR3.18, TcR, CmR
OLIVEIRA, M.A.
pRAMM3 Contém a seqüência codificadora da proteína NifA de H.
seropedicae clonada no vetor pDK7, CmR
OLIVEIRA, M.A.
pRAMM4 Contém a seqüência codificadora dos domínios Central+C-terminal da NifA de H. seropedicae clonada no vetor pDK7, CmR
OLIVEIRA, M.A.
pRT22 Contém a fusão nifH::lacZ de K. pneumoniae, CmR TULI & MERRICK, et al., 1988
R confere resistência ao referido antibiótico