Toda vez que as células vermelhas do sangue ficam velhas, nosso organismo trata de destruí-las. O produto final desta tarefa é a bilirrubina indireta (não conjugada) a qual é encaminhada ao fígado para que este possa transformá-la em bilirrubina direta (conjugada – 2 moléculas de ácido glicurônico) para que possamos eliminá-la. Em algumas situações, o fígado não consegue dar conta de metabolizar toda a bilirrubina e então, esta se acumula no nosso organismo produzindo a icterícia.
PRINCÍPIO DA REAÇÃO
A Bilirrubina é dosada por diazotização e formação de azobilirrubina vermelha com absorção máxima em 525 nm. A Bilirrubina Direta (diglicurônide) é dosada em meio aquoso, enquanto a Total (Direta e Indireta) é dosada por ação de potente solubilizador de ação catalisadora.
APRESENTAÇÃO Ref. 31 31.1 - Acelerador 1 x 250 mL 31.2 - Ácido Sulfanílico 1 x 120 mL 31.3 - Nitrito de Sódio 1 x 5 mL Temperatura Armazenamento: 15 - 25 °C ESPECIFICAÇÕES
Metodologia: Sims Horn; (Malloy Evelyn)
Reação: Ponto Final
Sistema: Birreagente
Aplicação: Manual e semi-automático Comprimento Onda: 525 nm (500 a 540)
Amostra: Soro ou Plasma (heparina, EDTA) Linearidade: 25,0 mg/dL
Relação Amostra / Reagente: Ver Instruções de Uso ESPECIFICAÇÕES QUALIDADE ANALÍTICA EQA – Especificação: Ótima
Erro Total: BD: ≤15,5% BT: ≤22,3% Bias: BD: ≤ ±7,10% BT: ≤ ±5,0% CV: BD: ≤9,2% BT: ≤6,40% Bibliografia:
1- Fraser CG.Biological Variation: from principles to practise. Washington DC:AACC Press, 2001.141p. 2- Especificações da Qualidade Analítica, Labtest Diagnóstica SA.
CALIBRAÇÃO
Realizar a calibração utilizando o Padrão de Bilirrubina – Ref. 32 ou calibrador da série Calibra da Labtest. Os dados abaixo foram obtidos em espectrofotometro com banda de passagem de 2 nm, comprimento de onda de 525 nm e cubeta de 1 cm de espessura, servindo somente como orientação e podem variar em função das características e condições do analisador, diferenças no material volumétrico utilizado, temperatura do banho-maria, entre outros.
Absorbância do Reagente: < 0,025 Fator de Calibração médio: 30
LÍQUIDOS CORPORAIS (Carl Kjeldsberg, Joseph Knight. Body Fluids 187;1993) Líquido Pleural (relação líquido pleural / soro):
Transudato < 0,6 Exsudato > 0,6 ORIENTAÇÕES
Metodologia para teste de proficiência da SBAC: Malloy Evelyn Proteger as amostras e controles da ação da luz.
A estabilidade da Bilirrubina em controles e calibradores é reduzida. Verificar orientações nas instruções de uso dos produtos
BILIRRUBINA - Ref. 31
O padrão de Bilirrubina não acompanha o produto. Utilizar o Padrão de Bilirrubina Labtest Ref. 32.
Drogas que podem aumentar medições de bilirrubina:alopurinol, esteróides anabólicos, alguns antibióticos, antimalariais, azatioprina, clorpropamida, colinérgicos, codeína, diuréticos, epinefrina, meperidina, metotrexato, metildopa, inibidores da MAO, morfina, ácido nicotínico, contraceptivos orais, fenotiazinas, quinidina, rifampina, salicilatos, esteróides, sulfonamidas e teofilina.
Drogas que podem diminuir medições de bilirrubina: barbitúricos, cafeína, penicilina e doses altas de salicilatos.
REAÇÃO DE PONTO FINAL COM BRANCO DE AMOSTRA
Tempo (min) A bs or bânc ia Adição R1 e Amostra Leitura A1 Leitura A2 Adição R2
BILI-T Liquiform - Ref. 94
Toda vez que as células vermelhas do sangue ficam velhas, nosso organismo trata de destruí-las. O produto final desta tarefa é a bilirrubina indireta (não conjugada) a qual é encaminhada ao fígado para que este possa transformá-la em bilirrubina direta (conjugada) para que possamos eliminá-la. Em algumas situações, o fígado não consegue dar conta de metabolizar toda a bilirrubina e então, esta se acumula no nosso organismo produzindo a icterícia.
PRINCÍPIO DA REAÇÃO
A bilirrubina indireta da amostra é desligada da albumina e solubilizada por ação de um acelerador e as bilirrubinas direta e indireta são medidas por formação de azobilirrubina com dicloroanilina diazotada. A cor formada é proporcional à concentração de bilirrubina total na amostra.
APRESENTAÇÃO Ref. 94-1/104 94.1 - Reagente 1 1 x 80 mL 94.2 - Reagente 2 2 x 12 mL Temperatura Armazenamento: 2 - 8 °C ESPECIFICAÇÕES
Metodologia: Labtest DCA; (DCA-dicloroanilina diazotada)
Reação: Ponto Final
Sistema: Birreagente
Aplicação: Semi-automático e Automático Comprimento Onda: 546 nm (530 a 550)
Amostra: Soro ou Plasma (heparina, EDTA) Linearidade: Até 30,0 mg/dL
Relação Amostra / Reagente: Ver Instruções de Uso e Protocolo de Aplicação ESPECIFICAÇÕES QUALIDADE ANALÍTICA
EQA – Especificação: Ótima
Erro Total: ≤15,5% Bias: ≤ ±5,0% CVa: ≤6,4% Bibliografia:
1- Fraser CG.Biological Variation: from principles to practise. Washington DC:AACC Press, 2001.141p. 2- Especificações da Qualidade Analítica, Labtest Diagnóstica SA.
CALIBRAÇÃO
Realizar a calibração utilizando calibrador da série Calibra da Labtest.
Os dados abaixo foram obtidos em espectrofotometro com banda de passagem de 2 nm, comprimento de onda de 546 nm e cubeta de 1 cm de espessura, servindo somente como orientação e podem variar em função das características e condições do analisador, diferenças no material volumétrico utilizado, temperatura do banho-maria, entre outros.
Absorbância do Reagente: < 0,010 Fator de Calibração médio: 30
LÍQUIDOS CORPORAIS (Carl Kjeldsberg, Joseph Knight. Body Fluids 187;1993) Líquido Pleural (relação líquido pleural / soro):
Transudato < 0,6 Exsudato > 0,6 ORIENTAÇÕES
Proteger amostras e controles da ação da luz.
A estabilidade da Bilirrubina em controles e calibradores é reduzida. Verificar orientações nas instruções de uso dos produtos.
Amostras hemolisadas fornecem valores falsamente diminuídos na determinação da Bilirrubina Direta. Drogas que podem aumentar medições de bilirrubina incluem alopurinol, esteróides anabólicos, alguns antibióticos, antimalariais, azatioprina, clorpropamida, colinérgicos, codeína, diuréticos, epinefrina, meperidina, metotrexato, metildopa, inibidores da MAO, morfina, ácido nicotínico, contraceptivos orais, fenotiazinas, quinidina, rifampina, salicilatos, esteróides, sulfonamidas e teofilina.
BILI-T Liquiform - Ref. 94
As drogas que podem diminuir medições de bilirrubina incluem os barbitúricos, cafeína, penicilina e doses altas de salicilatos.
Para uso em equipamentos semi-automáticos e manual, utilizar o produto Bilirrubina Ref. 31 e
Padrão Bilirrubina Ref. 32
Em equipamentos semi-automáticos não tem como criar um protocolo pois o equipamento não tem memória para os cálculos necessários (correção do volume entre a absorbância A1 e A2).
No caso da reação ser realizada em equipamentos semi-automáticos com cubeta de fluxo, pode ser utilizado o procedimento a seguir:
Branco a Branco Teste a Teste Calibrador a Calibrador
Reagente 1 0,08 mL 0,08 mL 0,08 mL 0,08 mL 0,08 mL 0,08 mL
Água 0,05 mL 0,05 mL - - - -
Amostra - - 0,05 mL 0,05 mL - -
Calibrador - - - - 0,05 mL 0,05 mL
Homogeneizar e incubar em banho-maria a 37°C durante 5 minutos. Determinar as absorbâncias dos tubos Branco a, Teste a e Calibrador a,em 546 nm (530 a 550) acertando o zero com água. Esta será a absorbância A1.
- Branco - Teste - Calibrador
Reagente 2 - 0,2 mL - 0,2 mL - 0,2 mL
Homogeneizar e incubar em banho-maria a 37 °C durante 5 minutos. Determinar as absorbâncias do Teste e Calibrador em 546 nm (530 a 550), acertando o zero com o branco. Esta será a absorbância A2
Aplicar os cálculos da Instrução de Uso.
Aplicar os cálculos conforme orientações das Instruções de Uso.
Neste procedimento, o número de determinações será reduzido para 40 e haverá sobra do Reagente 2. REAÇÃO DE PONTO FINAL COM BRANCO DE AMOSTRA
Tempo (min) A bs or bânc ia Adição R1 e Amostra Leitura A1 Leitura A2 Adição R2