Cenário internacional

4.1.2.1 BioReliance Limited

Esta empresa possui unidades nos EUA (Rockville), Reino Unido (Glasgow e Stirling) e Japão (Tóquio). Ela realiza os seguintes testes de identidade: isoenzimas, cariologia, DNA fingerprinting e RAPD (random amplified polymorphic DNA – DNA polimórfico amplificado de forma randômica). Os muitos testes de pureza incluem microscopia eletrônica de transmissão, esterilidade por inoculação direta, filtração com membrana e transferência direta;

micoplasmas por cultivo, células indicadoras e PCR quantitativo; vírus específicos por PCR, ensaios de co-cultivo, testes in vitro e in vivo, micobactéria por inoculação direta, e retrovírus por microscopia, pesquisa por transcriptase reversa, PCR do genoma e infectividade. Estão disponíveis também testes de tumorigenicidade e oncogenicidade. Por fim, a estabilidade é monitorada pelo sequenciamento genético, estabilidade genética e do inserto.

De acordo com as informações disponíveis na seção de literatura de sua página na internet, a empresa afirma que gera os BCMs e BCTs em condições de BPF, o que inclui a manipulação das culturas em fluxo unidirecional ISO 5 (classe 100), dentro de uma sala limpa ISO 7 (classe 10.000), ou seja, em um ambiente grau C. Isto é importante pois demonstra a possibilidade de realizar tal manipulação segundo esta configuração de salas classificadas, em vez do que se exige para envase e conexões assépticas na produção de medicamentos biológicos (requerimento de operação em fluxo laminar grau A, cercado por ambiente grau B). A configuração “A circulado por C” é equiparável ao requerimento para envase de produtos submetidos a esterilização terminal, e pode apresentar menor dificuldade para instalação, operação e qualificação. Tal disposição condiz com o documento da OMS (2011) e com a proposta da presente dissertação.

4.1.2.2 Charles River Laboratories International, Inc.

Esta empresa sediada em Massachusetts (EUA) foi indicada como referência para o preparo, armazenamento e caracterização de bancos celulares. Sua página eletrônica informa que a empresa estabelece bancos em condições BPF a partir de linhagens germinais, bem como de mamíferos, micróbios, insetos, leveduras e aves.

Os testes passíveis de contrato investigam a identidade, pureza e estabilidade das culturas. A verificação da autenticidade engloba isoenzimas, cariótipo e DNA fingerprinting.

A segurança é averiguada através de testes de esterilidade, micoplasma, microscopia

eletrônica, ensaios de produção de anticorpos, pesquisa por retrovírus, ensaios in vitro e in vivo, e ainda PCR para vírus humanos, símios, porcinos e bovinos.

Através de contato por correio eletrônico, questionando sobre certificação quanto às BPF, a diretora de vendas esclareceu que esta empresa tem sido inspecionada pela FDA com frequência anual ultimamente, e que, além disso, estaria disposta a receber inspeção por outra Autoridade Sanitária. Adicionalmente, ela esclareceu que as operações assépticas com bancos de células são realizadas sob cabine de fluxo laminar grau A, circulado por ambiente de grau C, o que condiz com a proposta do presente trabalho.

4.1.2.3 Covance

Esta empresa está localizada em Nova Jersey (EUA) e disponibiliza o serviço de geração de BCMs e BCTs sob condições aderentes às BPF. As informações em sua homepage afirmam que ela possui uma licença de fabricação para produção de bancos celulares sob BPF, expedida pela Agência Reguladora de Medicamentos e Produtos para Saúde. Os bancos são preparados em salas limpas classificadas e validadas, com programas de limpeza e monitoramento ambiental. Há espaço para criopreservação das culturas e testes de viabilidade e estabilidade. A identidade das culturas é verificada por sequenciamento, número de cópias, mapa de restrição, isoenzimas, RAPD e cariologia.

A pesquisa por agentes adventícios inclui esterilidade, contaminação por micoplasma e espiroplasma (para linhagens derivadas de insetos). A contaminação viral é investigada por microscopia eletrônica, ensaios para vírus adventícios e retrovírus, bem como pelo uso de métodos específicos como a pesquisa por anticorpos e métodos moleculares.

4.1.2.4 Genibet Biopharmaceuticals

Esta empresa está localizada em Portugal e é especializada na produção e fornecimento de material para o desenvolvimento de medicamentos, estudos não-clínicos e atividades fabris em aderência às BPF. Segundo informações publicadas em sua homepage, uma unidade está em instalação, que será dedicada ao preparo de BCMs e BCTs de células de mamíferos, bem como de produtos para terapia gênica. Há espaço também para armazenamento das culturas e produção de células de insetos.

Esta empresa executa, junto com o IBET, as atividades e construção de sistemas de expressão, desenvolvimento de processos e desenvolvimento analítico.

4.1.2.5 Instituto de Biologia Experimental e Tecnológica (IBET)

Trata-se de uma instituição privada portuguesa, que faz a interface entre diversos centros, academia e indústria em ramos da biotecnologia. As atividades realizadas com células animais incluem o estabelecimento de linhagens, desenvolvimento de processo (inclusive etapas de escalonamento, downstream, estabilidade e preservação) para obtenção de proteínas recombinantes e vacinas virais. Além disso, também há pesquisa nas áreas de terapia gênica e celular.

4.1.2.6 Invitrogen

Esta empresa foi apontada, durante a análise dos questionários, como um importante contato para o comércio de linhagens celulares no Brasil, que incluem clones da linhagem 293 e de CHO. Em particular, o clone CHO DG44 foi estabelecido sob condições BPF e é destinado ao crescimento em suspensão.

4.1.2.7 Lonza

Apontada no retorno dos questionários como referência para comércio de culturas celulares, esta empresa desenvolve linhagens e processos, especialmente para obtenção de anticorpos monoclonais e outras proteínas recombinantes em células de mamíferos, usando células CHO e NS0. De acordo com as informações disponibilizadas on-line, os bancos mestre e de trabalho são gerados em uma planta BPF licenciada no Reino Unido.

4.1.2.8 Perkin Elmer

Esta empresa foi apontada no retorno dos questionários como parceira para comércio de linhagens. Outras atividades anunciadas em seu website incluem testes de citogenética, análise e sequenciamento de DNA, bem como uma ampla variedade de reagentes laboratoriais.

4.1.2.9 Sigma-Aldrich

Também apontada como referência para o comércio de linhagens, esta empresa trabalha junto com a ECACC e oferece culturas de células de anfíbios, humanos, de insetos, peixes, camundongos e tumores, dentre outras.

A tabela 4.11 apresenta o resumo das atividades desenvolvidas com culturas de células, bem como o status regulatório, de cada uma das empresas pesquisadas no exterior.

Tabela 4.11: Resumo das atividades realizadas com cultivos celulares e status regulatório dos centros internacionais investigados

Centro Atividade Status regulatório

BioReliance Ltd.

Produção e caracterização de

bancos Condições de BPF

Charles River

Produção e caracterização de

bancos Condições de BPF

Covance

Produção e caracterização de

bancos Condições de BPF

Genibet Biopharmaceuticals

Pesquisa e desenvolvimento de

atividades fabris Aderência às BPF

IBET Pesquisa, produção de bancos ^(*)

Invitrogen

Pesquisa, produção e

comercialização de bancos Condições de BPF

Lonza

Pesquisa, produção e

comercialização de bancos Planta licenciada com BPF

Perkin Elmer Comércio e caracterização de linhagens

(*)

Sigma-Aldrich Comércio de linhagens ^(*)

(*) Não foi possível detectar esta informação através da pesquisa eletrônica.

Em suma, a maioria dos centros internacionais pesquisados (6 dentre os 9, ou 66,7%) por via eletrônica afirma estabelecer bancos de acordo com as Boas Práticas de Fabricação.

Este é um contraste com os centros brasileiros investigados, que em sua maioria se dedicam à pesquisa e desenvolvimento usando culturas de células, e não exibem condição atual para

estabelecer bancos celulares em aderência às BPF, visando à produção de medicamentos biológicos.