Coleta do material vegetal

O material foi coletado em populações naturais de dois biomas do estado de São Paulo: Cerrado e Mata Atlântica, que preferencialmente estavam localizados em unidades de conservação sendo elas:

Bioma Cerrado: Parque Estadual de Vassununga - Reserva Pé-do- Gigante (Santa Rita de Passa Quatro-SP), Parque Estadual de Furnas de Bom Jesus (Pedregulhos-SP), Reserva Biológica e Estação Experimental de Mogi-Guaçu (Mogi- Guaçu-SP).

Bioma Mata Atlântica: Fragmento de Mata da Fazenda Edgardia e Fazenda Lageado da Faculdade de Ciências Agronômicas da UNESP (Botucatu-SP); Estação Experimental do IAC de Capão Bonito (Capão Bonito - SP) e Parque Estadual Turístico do Alto Ribeira (Iporanga-SP).

- Parque Estadual de Vassununga Reserva Pé-do-Gigante : A reserva está localizada no município de Santa Rita do Passa - Quatro, com área total da Reserva totaliza 1.225 ha, entre 21° 36-39’S e 47° 36-38 W com clima, segundo classificação de Köppen Cwag, caracterizado por precipitação anual em torno de 1500mm, e altitude média variando de 590 a 740 m. O solo foi classificado como Latossolo vermelho amarelo (Pivello, 1998). O nome Pé-de-Gigante foi dado em função da formação geomorfológica em forma de pé A área de coleta tem representadas todas as fisionomias do cerrado (campo cerrado, cerrado stricto sensu e cerradão), sendo

considerada Área de Relevante Interesse Ecológico, de acordo com a legislação brasileira. As temperaturas médias de verão e inverno são respectivamente: 25,3°C e 14, 6 °C. A coleta foi realizada em 13 de janeiro de 2002 em indivíduos de beira de mata.

- Parque Estadual de Furnas de Bom Jesus:

O parque localiza-se no município de Pedregulho, com uma área de 2.069,06 ha, entre as coordenadas 28°11'14'' a 20°16'03'' S e 47°22'13'' a 47°29'17'' W. Fazem parte da área do parque dois ecossistemas: mata atlântica (floresta tropical semi- decídua) e cerrado. As coletas ficaram concentradas nas áreas de cerrado. As temperaturas médias no verão quente e úmido são: mínima de 18°C e máxima de 32° C; já no inverno são observados valores no inverno frio e seco, de mínima de 3° C e máxima de 13° C. a coleta foi realizada em 18 de outubro de 2001 em área de cerrado ralo, onde se verificou a presença de gado.

- Reserva Biológica e Estação Experimental de Mogi-Guaçu: A Reserva Biológica com área de 470 ha está localizada entre as coordenadas 22°18’S e 47°11’W no município de Mogi-Guaçu. Essa reserva é parte da antiga Fazenda Campininha e é coberta predominantemente por cerrado, com variações do cerradão ao campo cerrado, possuindo também matas ciliares. Segundo informações da estação metereológica da reservas as temperaturas máxima e mínima no ano de 2002 foram de 33° C e 10°C, respectivamente, e temperatura média anual de 21,4° C, com

precipitação media de 1350,5 mm. A coleta foi realizada no dia 16 de abril de 2002, com vinte indivíduos coletados no interior das áreas de cerrado e vinte coletados nas beiras da mata ciliar.

- Parque Estadual Turístico do Alto Ribeira (PETAR):

de 35.712 ha entre as coordenadas: 24° 17' a 24° 38' S- 48° 27' a 48° 44' W. O parque está localizado no município de Iporanga, sendo que 85% da área do município pertence ao PETAR. Os principais grupos de solos presentes na área do parque são: litossolos,

podozolizados hidromorfos. A precipitação média anual está entre 1400 e 1700 mm, sendo a temperatura média do mês mais frio de 18° C com verões quentes onde a temperatura média é de 22° C. O clima segundo Köppen é classificado como cfa (quente com inverno menos seco). A coleta foi realizada no dia 20 de agosto de 2002, quando coletaram-se indivíduos na beira da mata ao longo de trilha pré-existente.

- Fragmento de Mata da Fazenda Lageado e Fazenda Edgardia da Faculdade de Ciências Agronômicas da UNESP:

As duas fazendas são unidades de ensino e pesquisa da

UNESP/Campus de Botucatu e estão localizadas no município de Botucatu. A primeira área de coleta fica localizada na área experimental do Departamento de Produção Vegetal - Horticultura - compreende fragmento de vegetação natural de Floresta Estacional

Semidecidual. Segundo Jorge & Sartori (2002), a Fazenda Experimental Edgardia, está localizada em área de Cuesta, inclui em seus limites cinco fragmentos de vegetação natural das tipologias Floresta Semidecidual e cerradão, situada nas coordenadas de 22o _{48’51’’ S} e 48o _{24’15’’W. Segundo a classificação de Köeppen, o clima é do tipo Cfa, que}

corresponde ao clima Temperado, típico de região constantemente úmida, tendo quatro ou mais meses com temperaturas médias superiores a 22°C. A precipitação média anual para região é de 1300 mm, oscilando entre 650 mm e 1850 mm, respectivamente, para os anos mais secos e mais úmidos. O solo é do tipo Neossolo Litólico próximo ao Neossolo Flúvico (solos aluviais) (Vital, 2002; Fonseca & Rodrigues, 2000). A coleta foi realizada nos dias 11 e 12 de dezembro de 2002, sendo os dezoito primeiros indivíduos coletados na

Fazenda Edgardia em beira de mata ao longo de estrada e, os dez indivíduos restantes coletados na Fazenda Lageada, no interior da mata localizada na área experimental do Departamento de Horticultura.

- Estação Experimental de Capão Bonito (Unidade de Pesquisa e Desenvolvimento de Capão Bonito):

A coleta foi realizada em fragmento de mata que está localizada na área de pesquisa da Estação. A estação experimental do IAC, com as coordenadas

geográficas de 24° S e 48° 27’W, está localizada no sudoeste do Estado de São Paulo, a 6 km da cidade de Capão Bonito, apresentando relevo, suave ondulado a ondulado. A região apresenta temperatura média anual de 18,8°C, variando de 14,7°C, em julho a 22,1°C em fevereiro. A precipitação apresenta índice anual médio de 1236 mm de chuva. O clima foi classificado com cfa de acordo com a classificação de Köppen. O solo foi classificado como latossolo vermelho-escuro distrófico ou álico com textura argilosa (Menk et al., 1987). A coleta foi realizada no dias 15 e 15 de abril de 2002, em beira da mata.

As expedições de coleta foram realizadas no período de outubro de 2001 a dezembro de 2002. Nas coletas foram registrados dados de localização geográfica (altitude, latitude e longitude) através de GPS (Global Positioning System). O receptor portátil de sinal de satélite usado foi o GPS (Garmin Modelo Legendado 79728002), com unidade de recepção e antena embutida. O equipamento sintoniza satélites simultaneamente com capacidade de medição instantânea em coordenadas geográficas (latitude/longitude e UTM). O dados obtidos no GPS foram processados no software Trackmaker (versão 11.4 by Odilon Ferreia Jr.), do qual se obteve as distâncias entre os indivíduos dentro das populações e entre populações.

(Marshall & Brown, 1975 citados por Moraes, 1997). Esse número ficou determinado pelo tamanho da população encontrada, ou seja, coletaram-se todos os indivíduos possívéis. Para cada ponto de coleta teve-se também o cuidado de coletar material de plantas não muito próximas (no mínimo 10 m).

Foram coletadas aproximadamente 10 folhas jovens de cada indivíduo para facilitar a extração de DNA, que foram limpas com gaze e acondicionadas em tubos Falcon de 50 mL com sílica gel, devidamente identificados. Os tubos contendo as folhas coletadas foram estocados em freezer a -2°C até o momento de extração. Além do material coletado para estudo genético foi coletado material botânico para confecção de exsicatas de todos indivíduos coletados, de preferência material fértil. As exsicatas de todos os indivíduos foram depositadas no Herbário da Universidade de Ribeirão Preto (Herbário HPM -UNAERP). Além disso, para o estudo fitoquímico também foram coletadas

amostras das folhas de todos os indivíduos que foram acondicionadas em sacos de papel para posterior secagem em estufa a 40ºC por 48 horas.

Amostras compoostas de solo do local de coleta (0-20 cm) foram coletadas e conduzidas ao laboratório de Análises de Solo do Departamento de Ciência do Solo da FCA/UNESP - Botucatu.