Como os dois substratos desenvolvidos nesta pesquisa se mostraram sensíveis quanto a determinação direta de β-1,3 glucanase, foi realizado um
levantamento de custos5 de sua produção, em comparação com o substrato
comercial AZCL-Curdlan® (tabela 8).
Os dados levantados demonstraram que o substrato Escleroglucana- RBB tem um custo por amostra menor em relação ao comercial, representando aproximadamente 25% de economia. Dessa forma, sua utilização é vantajosa, pois além de superior na determinação de β-1,3 glucanase é um substrato econômico, podendo ser produzido de forma fácil em qualquer laboratório de pesquisa.
Tabela 8 – Comparação dos custos de substratos para determinação direta de β-1,3 glucanase.
UTFPR, Pato Branco – PR, 2019.
Substrato produto final (R$)Custo/g de analisadas a partir de 1gNúmero de amostras do produto 6
Custo/ amostra (R$) Escleroglucana-RBB 37,47 65 amostras de 100mgcada 0,58
Curdlana-RBB 72,00 72 amostras de 100mgcada 1,00 AZCL-Curdlan® 192,25 250 amostras de 100µLcada 0,77 Fonte: autor, 2019.
6 Corresponde a 1g de Escleroglucana ou Curdlana em pó, antes de ser obtido o estado coloidal e 1g de AZCL-Curdlan pronta para uso.
5 CONCLUSÃO
A partir dos resultados obtidos, foi possível responder ao problema levantado nesta pesquisa de forma satisfatória, pois foram desenvolvidos dois substratos enzimáticos coloidais para determinar β-1,3 glucanase: a Escleroglucana- RBB e o Curdlana-RBB.
Por meio dos testes de eficiência enzimática, apenas a Escleroglucana- RBB, apresentou eficiência superior ao substrato comercial AZCL-Curdlan®, demonstrando que a produção e utilização desse substrato é viável, já que se mostrou também economicamente mais barato.
A utilização do indutor de resistência ASM, não se mostrou eficiente na indução de β-1,3 glucanase em plantas de soja, uma vez que não há diferença estatística, em nível de 5% de probabilidade de erro, entre os tratamentos. Isso demonstra a necessidade de mais estudos para indicação de indutores resistência para a cultura da soja.
O uso da inoculação artificial do fungo Phakopsora pachyrhizi Syd. & P. Syd. em plantas de soja mostrou-se eficiente para estimular a produção da enzima, já que tanto a testemunha como o tratamento responderam de forma similar, produzindo quantidades crescentes de β-1,3 glucanase de acordo com os tempos de coleta de material vegetal, demonstrando, que as plantas não são seres passivos, mas respondem ativamente ao ataque de seus inimigos, nesse caso produzindo essa proteína PR.
A determinação de β-1,3 glucanase em plantas de soja foi possível por meio da utilização dos quatro substratos testados, no entanto, o substrato Escleroglucana-RBB apresentou melhor eficiência, seguido do comercial AZCL- Curdlan®. O método da laminarina de determinação indireta, além de mais trabalhoso se mostrou menos eficiente que os dois substratos mencionados (determinação direta), comprovando que métodos diretos, além de mais rápidos são mais seguros. A Curdlana-RBB, também desenvolvida nesta pesquisa, embora tenha permitido a determinação enzimática nos testes de eficiência, teve o menor desempenho em relação aos demais substratos.
alternativa para testes de novos indutores de resistência para a cultura da soja, assim como para outras culturas, por meio de pequenos ajustes metodológicos.
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ÍNDICE DE APÊNDICES
APÊNDICE A – Curva Padrão de BSA...102 APÊNDICE B – Teor de Proteínas da Soja...103 APÊNDICE C – Dados de determinação direta de β-1,3 glucanase, a partir do substrato Escleroglucana-RBB, obtida pela equação y=0,0844x + 0,0103, com R2=98,67%...105 APÊNDICE D – Dados de determinação direta de β-1,3 glucanase a partir do