Comparação do método proposto com outros métodos

Algumas das características do método proposto foram comparadas com outros métodos da literatura empregados para determinar ânions em saliva, especialmente nitrato e tiocianato. As principais informações de cada um destes métodos estão resumidas na Tabela 2.6.

Tabela 2.610Comparação de algumas características do método proposto no presente trabalho para determinação de nitrato e tiocianato em amostras de saliva com outros métodos descritos na literatura.

Modificador Tempo de condicionamento (min) Tempo de separação (min)* LD nitrato (mg L-1₎ LD tiocianato (mg L-1₎ Referência sem modificador 3 6,2 - 0,041 (GLATZ; NOVÁKOVÁ; ŠTĚRBOVÁ, 2001) polibreno 10,5 2,8 1,1 5,4 (TANAKA et al., 2004) hidróxido de sódio e dodecilsulfato de sódio 11 7 0,21 - (GÁSPÁR; JUHÁSZ; BÁGYI, 2005) hidroxipropil celulose 4 9 4,6x10-3 3,8x10-3 (XU et al., 2008) QTS reticulada 0,5 0,38 0,11 0,19 presente trabalho

* Tempo final de separação considerando o tempo de migração do último ânion

de interesse (nitrato ou tiocianato) ou o padrão interno usado no método.

A análise comparativa mostrou que o método proposto usando QTS reticulada como modificador do EOF requereu menos tempo de condicionamento entre corridas e o tempo necessário para promover a separação também foi menor. Os valores de LD para nitrato e tiocianato foram tão bons quanto ou melhores que aqueles obtidos com os outros métodos. Além disso, o tempo de condicionamento e de separação

obtidos no método proposto foram os menores de todos os métodos listados. Outro ponto importante que confere uma vantagem ao método proposto, especialmente devido a boa frequência analítica obtida (21 corridas/h) é a estabilidade dos analitos na amostra. De acordo com um estudo realizado por TANAKA e colaboradores (TANAKA et al., 2004), a concentração dos ânions presentes em uma amostra de saliva, incluindo nitrato e tiocianato, é estável a temperatura ambiente durante cerca de 4 h e sob refrigeração de 3 °C esta estabilidade poderia ser mantida por 48 h. Assim, com o emprego de um método rápido para coleta das amostras e determinação, muitas amostras podem ser analisadas sem a necessidade de refrigeração.

2.5 CONCLUSÕES

O presente trabalho demonstrou que a CE é uma técnica de separação poderosa. A mesma foi aplicada no desenvolvimento de um novo método para reduzir o número de etapas no procedimento experimental, permitindo análises com mínimo tratamento da amostra. O revestimento do capilar com QTS reticulada apresenta características que previnem a adsorção de proteínas presentes nas amostras de saliva, possivelmente devido às cargas positivas do revestimento no pH baixo do eletrólito usado repelirem por repulsão eletrostática as proteínas que, neste pH, encontram-se também na forma protonada. Com isso, o tempo necessário de condicionamento entre corridas com o eletrólito para promover uma boa repetitividade dos tempos de migração dos analitos foi de apenas alguns segundos, o qual também contribuiu para o aumento da frequência analítica do método. Outra vantagem do revestimento é a possibilidade do seu uso com detector de massas, uma vez que o modificador não está presente no eletrólito de corrida, mas fixado nas paredes do capilar o que gera um espectro de massas mais limpo. O método proposto para coletar a amostra de saliva corrigindo o volume coletado tem potencial para ser aplicado na determinação de outras substâncias na saliva, pois este fluido biológico contém diferentes marcadores usados em diagnósticos e como indicadores de drogas de abuso. Além disso, essa estratégia para corrigir o volume de amostra coletada poderia ser também implementada e aplicada para outras amostras que são difíceis de pipetar devido sua viscosidade ou até mesmo para outros fluidos biológicos que são difíceis de coletar, assim como lágrimas ou suor.

REFERÊNCIAS

BERSTAD, D. A.; KNAPSTAD, B.; LAMVIK, M.; SKJØLSVIK, P. A.; TØRKLEP, K.; ØYE, H. A. Accurate measurements of the viscosity of water in the temperature range 19.5 – 25.5 0C. Physica A, v. 151, p. 246-280, 1988.

BOULARES, M.; MANKAI, M.; HASSOUNA, M. Effect of thiocyanate and hydrogen peroxide on the keeping quality of ovine, bovine and caprine raw milk. International Journal of Dairy

Technology, v. 64, p. 52-56, 2011.

FONTEH, F. A.; GRANDISON, A. S.; LEWIS, M. J. Variations of lactoperoxidase activity and thiocyanate content in cows' and goats' milk throughout lactation. Journal of Dairy Research, v. 69, p. 401-409, 2002.

BOONE, C. M.; WATERVAL, J. C. M.; LINGEMAN, H.; ENSING, K.; UNDERBERG, W. J. M. Capillary electrophoresis as a versatile tool for the bioanalysis of drugs—a review. Journal of Pharmaceutical and

Biomedical Analysis, v. 20, p. 831-863, 1999.

BUROW, M; BERGNER, A.; GERSHENZON, J.; WITTSTOCK, U. Glucosinolate hydrolysis in Lepidium sativum-identification of the thiocyanate-forming protein. Plant Molecular Biology, v. 63, p. 49-61, 2007.

CHEN, Y.; GUO, Z.; WANG, X.; QIU, C. Sample preparation. Journal

of Chromatography A, v. 1184, p. 191–219, 2008.

CHIAPPIN, S.; ANTONELLI, G.; GATTI, R.; DE PALO, E. F. Saliva specimen: A new laboratory tool for diagnostic and basic investigation.

Clinica Chimica Acta, v. 383, p. 30-40, 2007.

CUI, Z.; XIANG, Y.; SI, J.; YANG, M.; ZHANG, Q.; ZHANG, T. Ionic interactions between sulfuric acid and chitosan membranes.

GAŠ, B.; COUFAL, P.; JAROŠ, M.; MUZIKÁŘ, J.; JELÍNEK, I. Optimization of background electrolytes for capillary electrophoresis. I. Mathematical and computational model. Journal of Chromatography A, v. 905, p. 269-279, 2001.

GÁSPÁR, A.; JUHÁSZ, P.; BÁGYI, K. Application of capillary zone electrophoresis to the analysis and to a stability study of nitrite and nitrate in saliva. Journal of Chromatography A, v. 1065, p. 327-331, 2005.

GLATZ, Z.; NOVÁKOVÁ, S.; ŠTĚRBOVÁ, H. Analysis of thiocyanate in biological fluids by capillary zone Electrophoresis.

Journal of Chromatography A, v. 916, p. 273–277, 2001.

GRUBB, C. D.; ABEL, S. Glucosinolate metabolism and its control.

TRENDS in Plant Science, v.11, p. 89-100, 2006.

HEFLIN, L.; WALSH, S.; BAGAJEWICZ, M. Design of medical diagnostics products: A case-study of a saliva diagnostics kit.

Computers and Chemical Engineering, v.33, p. 1067-1076, 2009.

HONIKEL, K-O. The use and control of nitrate and nitrite for the processing of meat products. Meat Science, v. 78, p. 68-76, 2008.

JABEEN, R.; PAYNE, D.; WIKTOROWICZ, J.; MOHAMMAD, A.; PETERSEN, J. Capillary electrophoresis and the clinical laboratory.

Electrophoresis, v. 27, p. 2413–2438, 2006.

LANDERS, J. P. (Ed.) Handbook of Capillary and Microchip Electrophoresis and Associated Microtechniques. 3rd ed. New York: CRC Press, 2008.

LOYD, D. K. Capillary electrophoresis analysis of biofluids with a focus on less commonly analyzed matrices. Journal of Chromatography

LUCY, C. A.; MACDONALD, A. M.; GULCEV, M. D. Non-covalent capillary coatings for protein separations in capillary electrophoresis.

Journal of Chromatography A, v. 1184, p. 81–105, 2008.

MICKE, G. A. Otimização e simulação em Eletroforese Capilar. 2004. 311 f. Tese (Doutorado em Química) – Instituto de Química, Universidade de São Paulo, São Paulo. 2004.

MICKE, G. A.; COSTA, A. C. O.; HELLER, M.; BARCELLOS, M.; PIOVEZAN, M.; CAON, T.; OLIVEIRA, M. A. L. Development of a fast capillary electrophoresis method for the determination of propranolol—Total analysis time reduction strategies. Journal of

Chromatography A, v. 1216, p. 7957-7961, 2009.

PEAKMASTER: software livre. Versão 5.3. Disponível em: <http://web.natur.cuni.cz/gas/> Acesso em: 05 mar. 2010.

PERRETT, D.; ROSS, G. A. Rapid determination of drugs in biofluids by capillary Electrophoresis Measurement of antipyrine in saliva for pharmacokinetic Studies. Journal of Chromatography A, v. 700, p. 179– 186, 1995.

PYELL, U. (Ed.) Electrokinetic Chromatography: Theory, Instrumentation and Applications. England: John Wiley & Sons Ltd, 2006.

RIBANI, M.; BOTTOLI, C. B. G.; COLLINS, C. H.; JARDIM, I. C. S. F.; MELO, L. F. C. Validação em métodos cromatográficos e eletroforéticos. Química Nova, v. 27, p. 771-780, 2004.

SIMPSON JR., S. L.; QUIRINO, J. P.; TERABE, S. On-line sample preconcentration in capillary electrophoresis Fundamentals and applications. Journal of Chromatography A, v. 1184, p. 504–541, 2008.

ŠTĚDRÝ, M.; JAROŠ, M.; GAŠ, B. Eigenmobilities in background electrolytes for capillary zone electrophoresis. I. System eigenpeaks and resonance in systems with strong electrolytes. Journal of Chromatography A, v. 960, p. 187-198, 2002.

ŠTĚDRÝ, M.; JAROŠ, M.; VČELÁKOVÁ, K.; GAŠ, B. Eigenmobilities in background electrolytes for capillary zone electrophoresis: II. Eigenpeaks in univalent weak electrolytes.

Electrophoresis, v. 24, p. 536-547, 2003.

TANAKA, Y.; NARUISHI, N.; FUKUYA, H.; SAKATA, J.; SAITO, K.; WAKIDA, S. Simultaneous determination of nitrite, nitrate, thiocyanate and uric acid in human saliva by capillary zone electrophoresis and its application to the study of daily variations.

Journal of Chromatography A, v. 1051, p. 193–197, 2004.

WILLIAMS, B. A.; VIGH, G. Fast, accurate mobility determination method for capillary electrophoresis. Analytical Chemistry, v. 68, p. 1174-1180, 1996.

XU, Z.; DOI, T.; TIMERBAEV, A.R.; HIROKAWA, T. Sensitive determination of anions in saliva using capillary electrophoresis after transient isotachophoretic preconcentration. Talanta, v. 77, p. 278-281, 2008.

ZAUGG, S.; THORMANN, W. Enantioselective determination of drugs in body fluids by capillary Electrophoresis. Journal of Chromatography