Composição química da casca e folha da erva-mate

A umidade foi determinada em estufa a 105 ± 2oC e a fração cinzas em forno mufla a 550 ± 1o C. Fibras alimentares totais, solúveis e insolúveis foram determinadas pelo método enzimático-gravimétrico. A dosagem de nitrogênio total pelo método Kjeldahl foi utilizada para determinar o teor protéico (valor de nitrogênio x 6,25). A determinação lipídica foi realizada a partir do método de Soxhlet. Todas as análises seguiram as metodologias descritas pela Association of Official Analytical Chemists, métodos 925.09; 923.03; 991.43; 920.87 e 920.85, respectivamente (AOAC, 2005).

Os teores de minerais foram determinados segundo o método 985.35 descrito pela AOAC (2005). A concentração de cálcio (Ca), ferro (Fe), manganês (Mn), zinco (Zn) e cobre (Cu) da casca e folha de erva-mate foram determinadas a partir da digestão ácida das cinzas seguida pela análise em espectrofotometria de absorção atômica (Perkin-Elmer Analyst 300). Na determinação de Ca, óxido de lantânio foi adicionado na solução ácida e na solução padrão (1 % m/v) para evitar possíveis interferências

causadas por íons fosfatos. Potássio (K) e sódio (Na) foram determinados por fotometria de chama (B262 Micronal) com escala de leitura de 0 a 150 mg L-1. Curvas de calibração com padrões de grau analítico foram utilizadas para quantificação dos minerais (r2 = 0,99).

2.5.1. Determinação de lignina, açúcar total e ácido urônico

A concentração de lignina das amostras foi determinada pelo método de Klason (ADAMS, 1965). O filtrado proveniente da determinação do teor de lignina foi neutralizado com BaCO3 (carbonato de bário) e centrifugado. O sobrenadante da centrifugação foi utilizado para a dosagem de açúcar total pelo método fenol-ácido sulfúrico (DUBOIS et al., 1956) e para a dosagem de ácido urônico, segundo o método colorimétrico descrito por Filisetti-Cozzi e Carpita (1991).

Para a curva de calibração (r2 = 0,99) das análises de açúcar total e ácido urônico foram utilizados glucose e ácido galacturônico como padrões, respectivamente.

2.5.2 Composição monossacarídica

A composição monossacarídica das amostras, em termos de açúcares neutros foram analisados por cromatografia líquido-gasosa (CLG) como acetatos de alditóis após hidrólise ácida (WOLFROM; THOMPSON, 1963a, 1963b). Para diferenciar as glicoses provenientes da celulose daquelas pertencentes às hemiceluloses, as hidrólises foram efetuadas em duas etapas de acordo com o método proposto por Morrison (1988). Os acetatos de alditóis resultantes foram analisados em cromatógrafo gasoso Hewllet Packard, modelo HP-5890 S II , equipado com uma coluna capilar DB-210 (30 m x 0,25 mm I.D., espessura de filme de 0,25 µm) a 220o C, e detector de ionização de chama (FID). A temperatura de 250º C foi utilizada para o injetor e para o detector. Nitrogênio foi utilizado como gás de arraste.

2.5.3 Determinação de polifenóis totais e taninos condensados

O Teor de Polifenóis Totais (PT) das amostras de casca e folha de Ilex paraguariensis A. St. Hil. foi determinado espectrofotometricamente de acordo com o método de Folin-Ciocalteau descrito por Singleton e Rossi (1965), com algumas

modificações. As amostras foram, separadamente, diluídas em solução de metanol (80:20; v/v), sonicadas (freqüência 25 KHZ), em banho termostatizado (Maxi Clear 1650 A), por 10 minutos e filtradas. As diluições apropriadas dos extratos foram oxidadas pelo reagente Folin-Ciocalteau e a reação neutralizada com carbonato de sódio. A absorbância de cor azul resultante foi avaliada a 725 nm após 60 minutos, em espectrofotômetro UV-VIS (Hitachi Modelo U-1800). Para a quantificação dos PT, foi construída curva de calibração utilizando ácido gálico, concentrações de 0,05 – 0,8 mg/mL (r2 = 0,99). O teor de PT foi expresso em gramas de equivalentes de ácido gálico (EAG) por cem gramas de amostra em base seca.

O teor de taninos condensados foi determinado pelo método descrito por Prince, Scoyoc e Butler (1978). Alíquotas de 1 mL de diluições apropriadas das amostras em metanol acidificado foram colocadas em tubos de ensaio e adicionados de 5 mL do reagente vanilina. O material foi mantido ao abrigo da luz por 20 minutos e as medidas das absorbâncias foram realizadas em espectrofotômetro a 500 nm. A quantificação foi baseada na curva de calibração construída com concentrações de 0,3 a 10 mg/mL (r2 = 0,99) de uma solução de catequina. O teor de taninos foi expresso em gramas de equivalentes de catequina por cem gramas de base seca.

2.5.4 Determinação de óleos essenciais

Amostras de casca (50 g) e folha (100g) de erva-mate foram, separadamente, diluídas com 750 mL de água destilada e submetidas a hidrodestilação por 2h em aparato modificado de Clevenger (Figura 4) (GOTLIEB; MAGALHÃES, 1960). A extração foi conduzida em triplicata. O volume de óleo obtido foi isolado com diclorometano, sendo empregado sulfato de magnésio anidro para remover qualquer excesso de água. Foi realizada filtração gravimétrica e concentração dos voláteis pela evaporação do diclorometano com o uso de gás nitrogênio.

O óleo essencial obtido de cada amostra foi submetido à análise em Cromatógrafo Gasoso acoplado à Espectrômetro de Massa (CG-EM). O rendimento foi calculado a partir de extrações em triplicata, com base no peso seco das amostras (JANTAN et al., 2005; REHMAN et al., 2008).

As análises para os compostos voláteis da casca e folha da erva-mate foram realizadas com o emprego de um cromatógrafo gasoso (Varian, CP-3800) acoplado a um espectrômetro de massa (Saturn 2000R). O cromatógrafo foi equipado com coluna

capilar CP-Sil 8CB Low Bleed LMS (30 m x 0,25 mm x 0,25 µm), injetor a 250o C e o detector a 280oC. Hélio foi usado como gás de arraste com vazão de 1 mL/min. O volume injetado da amostra (0,5 µL) foi conduzido no modo split/ 1:100, tempo de corrida de 60 min., empregando-se a seguinte rampa de aquecimento: temperatura inicial 110o C, seguido de aquecimento a uma taxa de 5oC/min., até 280o C. Os espectros de massa foram adquiridos através de energia de ionização de 70 eV. As concentrações dos componentes foram calculadas com base nas áreas dos picos no cromatograma, seguindo a ordem de eluição da coluna.

Figura 4 - Extrator Clevenger modificado utilizado para a extração do óleo essencial da casca e folha da erva-mate por hidrodestilação.

Fonte: acervo do autor, 2008.

2.5.4.1 Identificação dos compostos voláteis

A identificação dos compostos voláteis foi baseada na comparação dos espectros de massa obtidos, com aqueles existentes na base de dados do espectrômetro de massa (biblioteca NIST 05) e através dos índices aritméticos de retenção calculados (IA calculado) para comparação com os valores publicados (IA teórico) (ADAMS, 2007). Os índices aritméticos de retenção foram calculados (IA calculado) a partir dos tempos de retenção dos componentes dos óleos e aqueles de uma série homóloga de n-alcanos (C10-C25).

Folha