O câncer é um problema de saúde pública. Oíndice de pessoas acometidas por esta doençacresce a cada ano, o que exige maiores gastos do dinheiro público com diagnósticos e tratamentos. As estimativas indicam uma realidade preocupante: no ano de 2012, estimou-seaproximadamente 14,1 mi de casos novos e 8,2 mi de mortes por câncer no mundo, sendo as estimativas para o ano de 2030 de 21,4 mi de casos novos e 13,2 mi de mortes por câncer no mundo (INCA, 2014). As leucemias e linfomas contribuem com o aumento da carga
global de câncer no Brasil e no mundo atingindo mais fortemente crianças e idosos. Sabendo que os cânceres estão relacionando tanto com fatores endógenos (genético) quanto com fatores exógenos (ambiente), investir em medidas de prevenção para esta doença é a melhor opção para diminuir a carga mundial do câncer e tem sido o foco de vários órgãos nacionais e internacionais nos últimos anos.O Ensaio Cometa e o Teste do Micronúcleo contribuem para a prevenção e a optimização do tratamento do câncer quando aplicados no estudo da carcinogênese e no desenvolvimento de fármacos antineoplásicos mais eficientes e seletivos, podendo utilizar diversas linhagens de leucemias e linfomas,sendo a padronização de ambos os testes importante para garantir resultados reprodutíveis e confiáveis.
Assim, o objetivo deste Trabalho de Conclusão de Curso foi investigar e analisar a relevância do Ensaio Cometa e do Teste do Micronúcleo in vitro no estudo da carcinogênese hematopoiética por meio de linhagens celulares de leucemias e linfomas, assim como analisar as divergências e convergências entre os protocolos utilizados nesses estudosem virtude das dificuldades encontradas na padronização destas técnicas por esta acadêmica. Por meio da revisão bibliográfica, reuniu-se 38 artigos acerca do tema com ano de publicação entre 2005 e 2015 e constatou-se que:
• A maioria dos estudos empregou o Ensaio Cometa in vitro em meio alcalino sozinho (20 artigos), seguido do Ensaio Cometa in vitro em meio alcalino em conjunto com o Teste do Micronúcleo/Teste do CBMN in vitro (12 artigos), sendo menos utilizado o Teste do Micronúcleo/Teste do CBMN in vitro sozinho (seis artigos) para as linhagens celulares de leucemias e linfomas;
• As linhagens mais utilizadas pelos artigos coletados foram a L5178Y de linfoma de rato, a HL-60 de leucemia promielocítica humana, a K562 de leucemia mieloide aguda e a Jurkat T de leucemia de células T humana para o Ensaio Cometa in vitro e as linhagens L5178Y e Hl-60 para o Teste do Micronúcleo/ Teste do CBMN in vitro, as demais linhagensforam utilizadas esporadicamente;
• O Ensaio Cometa eTeste do CBMN/Teste do Micronúcleo in vitro com linhagens celulares de leucemia e linfoma são constantementeempregados na investigação da genotoxicidade e damutagenicidade de novos fármacos (principalmente para investigação de seu potencial
antineoplásico) e de substâncias químicas de interesse comercial (usadas em alimentos, processos industriais, produtos finais, entre outros), na investigação dos mecanismos pelos quais esses fármacos atuam nas células malignas e mais raramente nos mecanismos envolvidos na transformação das células malignas e na padronização do Teste do Micronúcleo in vitro sem o bloqueio da citocinese;
• Apesar do Teste do CBMN in vitro proporcionar diversas vantagens além da detecçãodo aumento da frequência dos micronúcleos em células binucleadas, o Teste do Micronúcleo (sem o bloqueio da citocinese) in vitro tem sido testado e defendido por vários autores como reprodutível e confiável quando empregado com linhagens celulares estáveis e de ciclos de divisão bem estabelecidos (como a L5178Y). Os artigos coletados defenderam o uso deste teste sem o bloqueio demonstrando a sua capacidade para detectar o aumento da frequência dos micronúcleos em células mononucleadas, com a justificativa de corresponder melhor ao sistema encontrado in vivo;
• Quanto à comparação dos protocolos utilizados nos artigos, foi possível notar diferençasao compará-los entre os artigos que utilizaram a mesma linhagem celular no Ensaio Cometa e no Teste do Micronúcleo/CBMN in vitro, apesar dos esforços investidos nas suas padronizaçõespara testes toxicológicos. As divergências encontradas entre os protocolos para a mesma linhagem celular dificultam a padronização em laboratório, uma vez que muitas variáveis devem ser consideradas quando há falha na obtenção de resultados confiáveis. A padronização dependerá de testesconsecutivos por meio do método “erro e acerto” dos diversos protocolos existentes, acarretando em gastos desnecessários de materiais.
• Os protocolos utilizados para a linhagem HL- 60 variaram menos em comparação aos protocolos das outras linhagens em ambas as técnicas, demonstrando uma melhor padronização para esta linhagem e sugerindo-se sua utilizaçãono Ensaio Cometa e no Teste do CBMN in vitro;
• Um fato interessante observado durante a revisão bibliográfica foi a falta de informações detalhadas sobre as técnicas em vários artigos. Alguns citaram outras publicações como protocolo para a técnica, porém estas
publicações não estão disponíveis para consulta em nenhum portal ou base de dados, impossibilitando a sua comparação com outros artigos ea reprodução daquele protocolo. Outros utilizaram kits prontos para o Ensaio Cometa, como o Trevigen, que não fornece a fórmula detalhada das soluções, impossibilitando a comparação com os demais protocolos. Outros ainda não forneceram os tempos de execução (como o da neutralização ou da fixação das amostras) das etapas, o que também dificulta a padronização.
Portanto, a revisão bibliográfica evidenciou a falta de padronização do Ensaio Cometa e do Teste do Micronúcleo/Teste do CBMN in vitro entre os laboratórios quando utilizadas linhagens celulares de leucemia e linfoma, sugerindo-se o uso de protocolos mais detalhados para ambos os testese a padronização destes paracada tipo de linhagem celular.
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