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CONCLUSÃO E PERSPECTIVAS
Os venenos das serpentes da família Viperidae são conhecidos por apresentar vasta atividade farmacológica, sendo as fosfolipases A2,os seus principais constituintes.
Apesar dessas toxinas serem objetivo de muitos estudos, ainda há controvérsias quanto as atividades farmacológicas das Asp49-PLA2s miotóxicas (BthTX-II e PrTX-III), uma
vez que consistem numa exceção em comparação as demais Asp49-PLA2s, que
apresentam alta atividade catalítica. É ainda carente o número de proteínas Asp49 miotóxicas conhecidas e cujas estruturas nativas ou complexadas foram elucidadas, sendo a BthTX-II/Ca2+ de grande contribuição para compreensão da baixa ou
inexistente atividade catalítica.
Foi possível concluir que a BthTX-II cristalizada em presença dos íons cálcio não apresentou este íonno sítio de coordenação do cálcio (loop de cálcio), ao contrário do observado nas PLA2s clássicas. Não foram perceptíveis diferenças substanciais entre
as estruturas cristalográficas da apo e BthTX-II/Ca2+, sendo que apenas uma região demonstrou-se distorcida e sem relação aparente com os resíduos responsáveis pela atividade catalítica. A oligomerização apresentada a partir da submissão ao PISA foi diferente da cristalográfica, havendo naquela exposição de resíduos do loop de cálcio de forma diferente das demais Asp49-PLA2s, o que pode ser o motivo da baixa atividade
catalítica. A estrutura da PrTX-I em presença de íons manganês conta com 10 regiões candidatas a possuir tais íons que deverão ser confirmadas por outros experimentos. Possivelmente essas regiões são importantes para a atividade miotóxica, incluindo a região do C-terminal. Assim, a conclusão deste estudo pode contribuir para a compreensão do mecanismo ação das Lys49-PLA2s.
Diante das dúvidas e hipóteses levantadas, algumas perspectivas podem ser traçadas para que mais informações sejam geradas com o objetivo de esclarecê-las e auxiliar a compreenção do mecanismo de ação da miotoxicidade e das diferenças entre as PLA2s, uma vez que são toxinas semelhantes e apresentam atividades diferentes.
• A co-cristalização da BthTX-II com inibidores pode apresentar as diferenças conformacionais responsáveis pela redução de sua atividade.
• A co-cristalização da BthTX-II com composto que provoque mudança no grupo espacial e na sua oligomerização, podendo se aproximar ao dímero biológico apontado pelo programa PISA e podendo gerar novos dados para comparação com a forma nativa.
• Virtual screening e Docking de possíveis ligantes nas regiões apontadas pela presença dos íons de cálcio na BthTX-II e dos íons de manganês na PrTX-I, podendo assim gerar informações sobre moléculas com potencial farmacológico.
• Dinâmicas moleculares do dímero encontrado na BthTX-II/Ca2+ e do
dímero sugerido pelo programa PISA, comparação dos resultados gerados e inferência do dímero mais adequado.
As serpentes, animais temidos e surpreendes, podem contribuir ainda mais para a compreensão de fenômenos farmacológicos. Embora seja necessário produzir mais informação para chegar a conclusões efetivas sobre o mecanismo de ação das PLA2s,
grandes avanços já foram alcançados. As novas perspectivas descritas bem como novos experimentos realizados por outros grupos apresentam grande potencial para compreenção do mecanismo de ação de fosfolipases e podem oferecer informações úteis para elaboração de novos fármacos envolvidos com os processos farmacológicos dessas proteínas e com os males provocados pelos acidentes ofídicos.
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APÊNDICE
Segue abaixo resumo publicado no Livro Anais do 11º Encontro Regional de Biomedicina:
1.6.2 ESTUDOS ESTRUTURAIS PRELIMINARES SOBRE A PrTX-I EM PRESENÇA DE ÍONS MANGANÊS.
BORGES, R. J.1; SANTOS, J. I.1; SOARES, A. M.2; FONTES, M. R. M.1;
1 UNESP - Campus Botucatu. 2 Universidade de São Paulo - Campus Ribeirão Preto.
Serpentes do gênero Bothrops representam um assunto de grande interesse científico, médico e social no
Brasil, pois são responsáveis mais de 90% do total de acidentes ofídicos que ocorrem no país. Venenos botrópicos contêm diversas toxinas, sendo um de seus principais componentes as fosfolipases A2. Fosfolipases A2 (PLA2s) são enzimas pequenas, estáveis e cálcio-dependentes que hidrolisam a ligação éster sn-2 de fosfolipídios, liberando lisofosfolipídios e ácidos graxos. Estas toxinas induzem diversos efeitos farmacológicos, como atividade hipontensora, cardiotóxica, neurotóxica e miotóxica, sendo esta última objetivo de diversos estudos, já que a lesão muscular não é eficazmente neutralizada pela soroterapia. Recentes estudos demonstraram redução da atividade miotóxica da bothropstoxina-I (BthTX- I, uma Lys49-PLA2) na presença de íons divalentes quando injetados em ratos, sendo que a maior redução foi observada com íons manganês quando pré-incubados com a toxina antes da injeção. Nesse
trabalho, relatamos a co-cristalização da piratoxina-I (PrTX-I), uma PLA2 dimérica e básica de Bothrops
pirajai, com íons manganês, bem como estatísticas dos dados de difração de raios-X. A estrutura
cristalográfica foi determinada utilizando técnicas de substituição molecular através do programa AMoRe. Os dados da difração de raios-X foram coletados a 1,9 Å (LNLS, Campinas) com dados 92,3% completos e Rmerge =10.1%. O cristal pertence ao grupo espacial P3121 com célula unitária de a = b = 55,17, c =
126.28 Å. Resultados preliminares indicam duas densidades eletrônicas que podem corresponder ao manganês. A proteína está sendo refinada através do programa CNS e estudos comparativos serão realizados com o intuíto de compreender a redução da atividade miotóxica quando o mangânes interage com a toxina.
Segue abaixo resumo publicado na revista The Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases decorrente da participação do 11º Encontro Regional de Biomedicina: