A principal problemática da neosporose em bovinos é sua manutenção pela transmissão vertical em animais assintomáticos, principalmente na ausência do hospedeiro definitivo. Além disso, o impacto econômico da neosporose se dá, principalmente, em função desta doença provocar abortos em consequência desta característica (CANTÓN et al., 2014). Isso porque ainda não existem outros prejuízos considerados, como despesas com programas de controle, o descarte de fêmeas infectadas dos rebanhos de matrizes, nem com o próprio tratamento da mesma. Buscando um método que controle a infecção e a transmissão do patógeno nos rebanhos bovinos, diversas vacinas experimentais estão sendo desenvolvidas com formulações contendo o parasito vivo (ROJO- -MONTEJO et al., 2009; WEBER et al., 2013), vacinas utilizando ve- tores biológicos (JIA et al., 2013; PENARETE-VARGAS et al., 2010), vacinas de DNA (ZHAO et al., 2009; MONNEY et al., 2011) e vacinas compostas por subunidades recombinantes, geralmente proteínas rela- cionadas ao processo de invasão da célula hospedeira (UCHIDA et al., 2013; LV et al., 2015).
Ensaios baseados na imunização de modelos animais – normalmente camundongos – concluem sobre a capacidade de estas vacinas indu- zirem uma resposta protetora que impeça a infecção pelo parasito e, principalmente, sua transmissão vertical através da sua capacidade de
estimular a produção de citocinas fundamentais para a resposta imu- ne mediada por células (por exemplo IFN-γ e TNF-α) e para a resposta imune humoral (por exemplo: IL-4 e IL-10).
Na literatura, é possível observar diferentes níveis de proteção induzi- dos pela vacinação. Algumas vacinas conferem até 100% de proteção, em que todos os animais de um grupo desafiado permanecem sem apresentar sinais clínicos da doença (MONNEY et al., 2011). No entan- to, outras não são capazes de estimular o sistema imune a impedir de forma eficaz a infecção e transmissão congênita de taquizoítos (ADRIA- NARIVO et al., 1999).
Contudo, é importante destacar que estes estudos diferem quanto à concentração de proteína por dose, ao número de imunizações, à via de inoculação, ao adjuvante vacinal, ao modelo animal, à cepa de de- safio e à concentração de taquizoítos, entre outros fatores relevantes ao processo de análise de eficácia de uma vacina para o controle da neosporose. Assim, há uma dificuldade na comparação entre os níveis de proteção conferidos pelas vacinas testadas, demonstrando que este tipo de estudo deve ser feito de forma criteriosa e considerando as variáveis citadas (GOODSWEEN et al., 2014). Além disso, mesmo que uma vacina testada em modelos murinos apresente eficácia na proteção contra a neosporose, essa ainda deverá ser testada e validada em modelos animais bovídeos. Sendo assim, entende-se que há uma grande lacuna entre os protótipos vacinais pesquisados hoje e a dispo- nibilização de um produto capaz de controlar a neosporose bovina. A busca de candidatos para vacinas experimentais por meio da vacino- logia convencional, baseada na cultura de patógenos e posterior purifi- cação de suas estruturas proteicas, ainda é um campo ativo na pesqui- sa (HEINSON et al., 2015). No entanto, a disponibilização de anotações de sequências genômicas, proteômicas e transcriptômicas em bancos de dados possibilitou, por meio de bioinformática, a predição de an- tígenos com maior potencial imunogênico, iniciando uma abordagem chamada de vacinologia reversa (SERRUTO et al., 2009).
Análises in silico foram executadas por Monney et al. (2011) para predição de peptídeos importantes para indução de uma resposta imune protetora e, após definição das sequências aminoacidicas, os autores desenvolveram quimeras para imunização de modelos murinos. Assim como esses cientistas, o grupo de pesquisa do Laboratório de Biologia do Carrapato da Embrapa Gado de Corte, em parceria com o grupo do Laboratório de Microbiologia do Centro de Desenvolvimento Tecnoló- gico da Universidade Federal de Pelotas, estuda vacinas experimentais e testes de imunodiagnóstico que utilizam regiões imunodominantes e quimeras de proteínas como NcROP2 e NcSRS2 (LIMA et al., 2007; GONÇALVES et al., 2008; PINHEIRO et al., 2013), cujos envolvimen- tos no processo de infecção da célula hospedeira já estão descritos, associadas a proteínas moduladoras de resposta imune, como LTB (subunidade B da enterotoxina termolábil de E. coli) e OprI (lipoproteína da membrana externa de Pseudomonas aeruginosa).
A LTB é uma alternativa válida para a função de molécula carreadora
já que é composta por cinco polipeptídios idênticos (com peso molecu- lar de 11,6 kDa cada), sendo capaz de modular a resposta do sistema imunológico e caracterizada como um potente adjuvante de mucosas (DA HORA et al., 2011). OprI é um ligante TLR2, com características de modulação da resposta imune humoral e celular, com potencial uso como adjuvante de mucosas (CORNELIS et al., 1996; LOOTS et al., 2008; BASTO et al., 2012; BASTO et al., 2014).
Na busca por uma diminuição do impacto econômico, é comum se fazer referência a diminuição de casos de aborto no rebanho como uma resposta positiva da vacina. Porém, é preciso considerar que o aborto impede a propagação de N. caninum e que a diminuição da taxa de aborto não significa, necessariamente, que a transmissão vertical não ocorreu, mas sim que esta vacina influenciou na infecção do feto, po- dendo ter inibido a ação de alguma molécula responsável por sua pato- genicidade durante esta infecção, reduzindo o seu potencial infeccioso. A vacinação via mucosas poderia ser uma solução, inibindo a invasão intestinal pelos esporozoítos, pela atuação do sistema imune de mu-
cosas com a participação de células e IgAs secretoras. Porém, mesmo que se consiga uma vacina capaz de proteger os bovinos contra a infecção por esporozoítos, os animais infectados teriam que ser descar- tados da reprodução e ir para abate. Só assim se teria uma redução na disseminação do parasito.
Alternativas simples como a utilização de diferentes adjuvantes tam- bém poderiam auxiliar nesta busca. Com a utilização de Montanide, que são microemulsões de água em óleo composta de esqualeno estabili- zado com surfactante (XU et al., 2009), teríamos, possivelmente, uma alta secreção de anticorpos, alta proliferação de células T e um perfil equilibrado de citocinas Th1/Th2, estimulando-se uma resposta imune eficiente contra a propagação de N. caninum. Esse adjuvante também é conhecido por aumentar o recrutamento, a atividade e a migração de células apresentadoras de antígenos para os linfonodos, além de intera- gir com as membranas celulares, favorecendo a captação de antígenos (MATA et al., 2013).
Dessa forma, uma vacina eficaz deverá não somente diminuir o abor- to, mas sim, inibir a infecção e reduzir a propagação de N. caninum. Como consequência, a doença seria controlada e os casos de aborto por neosporose reduzidos sem impacto nos plantéis de fêmeas bovinas reprodutoras.
Mais pesquisas são necessárias para se aumentar o leque de opções de antígenos hoje existentes. Além disso, se faz necessário testar vaci- nas promissoras diretamente em bovinos. Porém, antes de se testar, é preciso que haja a determinação de um sistema seguro para tal, com a padronização dos desafios, tornando os estudos comparáveis entre si e possibilitando interpretações mais conclusivas.
A lacuna existente pela falta de vacinas de alta eficácia e confiabilidade no mercado pode ser preenchida com o desenvolvimento de produtos biotecnológicos de características comerciais atrativas que possam atender a cadeia produtiva da bovinocultura como alternativa eficaz no combate à neosporose.
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