Criopreservação de gametas e embriões

As técnicas de criopreservação consistem em conservar tecidos por períodos extensos em temperaturas baixas. No caso de congelamento e conservação em nitrogênio líquido (-196°C), é necessário o uso de aditivos crioprotetores, para reduzir danos causados pela formação de gelo. Os crioprotetores são classificados em função de sua capacidade de trânsito pela membrana plasmática como permeáveis (dimetilsulfóxido, glicerol e 1,2 propanodil (PrOH)) ou não-permeáveis (sacarose, glicose, frutose e trealose (ARGYLE, HARPER E DAVIES, 2016). O congelamento lento tem como princípio a formação de gelo extracelular, sendo dividido nas fases de pré-congelamento, congelamento, armazenamento, descongelamento e pós-descongelamento (BEHR E SHU, 2010). O processo de vitrificação é caracterizado pela rapidez no processo de resfriamento e pelo uso de uma alta concentração de crioprotetores, o que impede a formação de cristais de gelo, diminuindo os danos as moléculas, sendo hoje em dia o método de vitrificação mais utilizado, devido a sua alta taxa de sucesso (COWARD E WELLS, 2013).

Há vários obstáculos para o sucesso dessa técnica, em razão do ovócito ser uma célula única com baixa permeabilidade e muito suscetível às injurias causadas pela toxicidade dos crioprotetores e ao choque osmótico (GARDNER, RIZK E FALCONE, 2011). A técnica de vitrificação é preferível nessas situações, devido a melhor preservação das características ultraestruturais do ovócito, como a conservação do fuso mitótico normal (YURCHUK, et al., 2020).

Assim como no caso dos gametas femininos, é importante o uso de crioprotetores no processo de congelamento de sêmen. Porém, estes crioprotetores podem ser associados com efeitos negativos, como estresse osmótico, estresse oxidativo, toxicidade e danos a integridade do DNA espermático. A maior parte dessas injúrias são causadas no processo de descongelamento (MARTINS, AGARWAL E

HENKEL, 2019). Apesar de existirem esforços para a implantação das técnicas de vitrificação, o congelamento lento ainda é a mais utilizada nas clínicas. Os resultados obtidos com o uso desse protocolo são os bons parâmetros de movimento, incluindo velocidade curvilínea e em linha reta dos espermatozoides, após o descongelamento (AGARWAL E TVRDA, 2017; RIOS E BOTELLA, 2019).

A criopreservação de embriões é uma ferramenta conveniente em casos de cancelamento da transferência embrionária devido ao risco de hiperestimulação ovariana ou sangramento endometrial, e também evita o desperdício de embriões excedentes não transferidos obtidos em um ciclo, dentre outros eventos desfavoráveis a implantação embrionária (HERRERO, MARTÍNEZ E GARCIA-VELASCO, 2011). Por serem estruturas multicelulares, os embriões são mais resistentes aos danos provenientes do congelamento e descongelamento. Esses podem ser congelados tanto no estágio de clivagem (dia 2 ou 3 de cultivo), ou no estágio de blastocisto (dia 5 ou 6 de cultivo), sem indícios de alteração da viabilidade pós congelamento. Além disso, gestações obtidas de embriões congelados não estão ligadas ao aumento do risco de aborto ou gravidez ectópicas, quando comparadas transferência de embriões a “fresco” (RODRIGUEZ-WALLBERG, WATERSTONE E ANASTÁCIO, 2019). A vitrificação de embriões é o protocolo atualmente adotado, pois apresenta uma taxa de sobrevivência alta, maior eficiência na recuperação e transferência embrionária e elevadas taxas de gravidez (NAGY, SHAPIRO E CHANG, 2020).

Sabe-se então que a fisiologia reprodutiva é um sistema altamente complexo, e inúmeros fatores podem contribuir causando danos severos á reprodução. É importante encontrar formas de promover hábitos de vida mais saudáveis, com intuito de instigar as pessoas á práticas mais benéficas para sua saúde, tendo assim uma redução de influências externas no potencial de fertilidade.

A medicina e a biotecnologia são de suma importância na área da embriologia. Quando os hábitos saudáveis não são suficientes para manutenção da fertilidade, as inovações dessas áreas tornam possível a união de gametas fora do ambiente uterino, levando esperança a um grande número de casais que não abrem mão do sonho de filhos biológicos. As técnicas de reprodução assistida podem contribuir ativamente para uma melhoria da vida daquelas pessoas que sofrem com problemas decorrentes da incapacidade de reprodução e suas pesquisas vêm buscando cada vez mais aperfeiçoar esse processo afim de obter maiores sucessos.

Considerações finais

O presente trabalho buscou abordar a relação entre a infertilidade e o estilo de vida em mulheres através de uma revisão bibliográfica. Objetivou-se trazer como os hábitos, tais como o consumo de álcool, cigarros, hábitos alimentares e distúrbios psicológicos afetam a taxa de fertilidade feminina, bem como a importância das técnicas de reprodução assistida para auxiliar mulheres a engravidar.

É sabido que existem em torno de 48 milhões de casais sofrendo com a infertilidade no mundo. O diagnóstico de infertilidade pode levar a diversos problemas psicológicos e isolamento das mulheres que experienciam essa condição. Os estudos cada vez mais afirmam que os hábitos podem alterar a fisiologia reprodutiva, causando a infertilidade.

Componentes do cigarro como o cádmio, nicotina e bezo(a)pireno (BaP) são os principais responsáveis pelos efeitos deletérios na fertilidade e na gravidez. A exposição a fumaça do cigarro acarreta em alterações na esteroidogênese ovariana, prejuízos na função e viabilidade do ovócito, deleção de reservas ovocitárias e menopausa precoce. Durante a gravidez, o cigarro pode causar aborto espontâneo, baixa receptividade uterina, danos na metilação do DNA, quebra de dupla fita e altas taxas de embriotoxicidade.

O consumo de álcool pode levar ao desequilíbrio do ciclo menstrual através de flutuações nos níveis de hormônios esteroides, causando desregulação do epigenoma e transcriptoma dos ovócitos, efeitos deletérios nos folículos secundários, antrais, e diminuição prematura das reservas ovarianas. Essa substância pode também afetar a fertilização e a pré-implantação embrionária, levando a diminuição de blastocistos, embriões com morfologia anormal e aumento do risco de aborto.

O microambiente folicular de mulheres com sobrepeso ou obesidade é afetado, resultando em complexos cumulus-oophurus com morfologia anormal, altas taxas de aneuploidias e aumento da apoptose. Há também um aumento da taxa de aborto nessas mulheres e a presença de blastocistos com menos células do trofoblasto. Já o sub peso pode resultar em múltiplos distúrbios como amenorreia anovulatória, menstruação encurtada e irregularidades dos ciclos menstruais. Além de baixa receptividade uterina, implantação embrionária pobre e restrição do crescimento fetal.

Condições de depressão, estresse e ansiedade podem impactar a função do corpo lúteo, competência do ovócito e diminuir as taxas de gravidez. Os ovócitos apresentam meiose atrasada, aneuploidias, mudanças no fluido folicular, ambiente folicular mais pobre e aumento do número de folículos em atresia. Embriões expostos a condições de estresse tem uma diminuição expressiva no número de células do trofoblasto e na massa celular interna dos blastocistos. O estresse durante a gravidez pode aumentar em 42% o risco de aborto.

Contudo, apesar da infertilidade ainda ser um problema que afeta uma parcela significativa da sociedade, a reprodução assistida contempla técnicas que objetivam aumentar as taxas de gravidez de casais inférteis. A fertilização in vitro tem uma taxa de sucesso entre 50% e 70%. Quando o fator masculino é responsável pela infertilidade, busca-se pela Injeção intracitoplasmática de espermatozoide (ICSI), a qual tem como vantagem a utilização de apenas um espermatozoide para que ocorra a fertilização.

A criopreservação dos gametas e embriões pode auxiliar para a preservação da fertilidade por um período prolongado. Existem duas principais técnicas de criopreservação, a vitrificação e o congelamento lento. A vitrificação apresenta maior taxa de sucesso na criopreservação de ovócitos e embriões, e o congelamento lento é preferível na criopreservação de espermatozoides.

Existem algumas limitações frente a esse tema da pesquisa, pelo fato de terem pouquíssimos estudos que utilizam dados humanos e, apesar de modelos animais apresentarem uma boa opção para obtenção de resultados, algumas características que derivam da diferença entre as espécies podem atrapalhar a obtenção de respostas. Estudos in vitro também são limitantes e não conseguem dispor resultados que dependem da fisiologia. Embora haja uma grande literatura acerca das causas da infertilidade, foram encontradas algumas brechas de estudos, na influência do estresse durante as fases de foliculogênese e ovogênese e na influência dos assuntos abordados no trabalho durante embriogênese, deixando uma margem para que mais pesquisas sejam feitas.

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