2.3 Resultados e Discussão
2.3.11 Cromatografia em camada delgada
Os extratos dos isolados BCM 15, BCM 20 e BCM 24 que apresentaram maior halo de inibição, extraídos com acetato de etila, foram submetidos à CCD na tentativa de otimização na separação dos compostos presentes (Figura 16). Na técnica de CCD pôde-se constatar a presença no extrato de BCM 20 a presença de 2 “spots”; diferentes do extrato controle (meio de cultura extraído em acetato de etila). Os “spots” foram visíveis sob lâmpada UV nos comprimentos de
onde a 254 nm. Os “spots” dos respectivos extratos foram visualizados e suas distâncias de migração calculadas (Tabela 12).
1 2 3 4 5 0.86 0.78 0.67 1
Figura 16 - CCD dos extratos de BCM 15, BCM 20, BCM 24, BCM 82. 1) Meio de cultivo extraído em acetato de etila (controle); 2) Extrato de BCM 15; 3) Extrato de BCM 24; 4) Extrato de BCM 20; 5) Extrato de BCM 82. Solvente de eluição: ácido acético:acetato de etila:n-propanol (0,5:25:15) (v/v). Comprimento de onda = 254 nm. Imagem ao lado: BCM 20 com os respectivos “spots” (ACD/ChemSketch Freeware v.10.02).
Tabela 12 - Rfs das frações dos extratos visualizadas sob lâmpada UV com dois comprimentos de onda 254/366 nm. Extratos Rf 1 Rf 2 Rf 3 Controle 0,67 BCM 15 0,67 0,78 BCM 24 0,67 BCM 20 0,67 0,78 0,86 BCM 82 0,67
2.3.12 Espectrometria de massas
Os espectros obtidos em Q-TOF indicaram vários compostos. Esta caracterização molecular é fundamental no entendimento da bioprospecção de genes funcionais associados à produção de compostos bioativos.
Os espectros de massas dos isolados BCM 15, BCM 20 e BCM 24, os quais apresentaram resultados positivos nos testes anteriores foram obtidos por inserção direta do extrato no equipamento. O espectro foi obtido na faixa de 100 a 2000 Da (Figura 16 A e B) e apresentaram os íons moleculares, tais como: m/z 403, 469, 506, 552, 619, 815 e 861. A presença destes compostos não é observada no controle (meio de cultivo extraído em acetato de etila). Para a elucidação estrutural destas moléculas, posterior fragmentação em MS/MS foi realizada.
A identificação do metabólito presente nos extratos foi feita por ESI através da comparação de suas massas com dados de um dicionário químico de compostos (CHEMICAL DICTIONARY, 1997), o qual contém informações sobre substâncias químicas. Através desta busca pôde-se encontrar um metabólito conhecido por fenazina, produzido pela bactéria
Pseudomonas putida. A Figura 17 apresenta o espectro dos extratos dos isolados BCM 15, BCM 20 e BCM 24.
A
B
Figura 17 - Espectros de electrospray (ESI) de extrato de BCM 15, BCM 20 e BCM 24 em modo positivo. A) Meio Actino extraído em acetato de etila (controle); B) Extrato de BCM 15 em acetato de etila. C) Extrato de BCM 20 em acetato de etila. D) Extrato de BCM 24 em acetato de etila. (Continua)
C fenazina-ácido carboxílico Fosfodecina Bulgecina D D
Figura 17 - Espectros de electrospray (ESI) de extrato de BCM 15, BCM 20 e BCM 24 em modo positivo. A) Meio Actino extraído em acetato de etila (controle); B) Extrato de BCM 15 em acetato de etila. C) Extrato de BCM 20 em acetato de etila. D) Extrato de BCM 24 em acetato de etila. (Conclusão)
Após a obtenção dos espectros foi realizada a fragmentação para a elucidação estrutural destas moléculas. Apenas o composto fenazina produzido por P. putida BCM 20 foi confirmado pela fragmentação (Figura 18).
0 100 % lu20_cid01 23 (0.460) Cm (4:41) 241.11 130.06 169.07 157.06 198.07 l 20 135 (2 651) C (82 137)
Figura 18 - Fragmentação em MS/MS do composto fenazina de m/z 241
Depois de obtido o espectro com a fragmentação do composto, buscou-se em literaturas específicas a estrutura do composto fenazina. A estrutura pode ser observada de acordo com a Figura 18. N N CO2H H H OH
Figura 19 – Estrutura química da 6-hidroxifenazina-1-ácido carboxílico
As pesquisas sobre a biossíntese da fenazina nas últimas décadas têm sido principalmente sobre as espécies do gênero Pseudomonas. As recentes descobertas das vias biossintéticas em bactérias proporcionam oportunidades para explorar e obter uma maior compreensão sobre a
evolução biossintética da fenazina assim como os recursos genéticos para exploração biotecnológica capazes de produzir novas fenazinas de potencial no controle biológico, na indústria e em aplicações farmacêuticas. Muitas questões ainda precisam ser entendidas sobre o papel fisiológico da fenazina no seu ambiente natural. Um progresso considerável tem sido realizado para revelar a complexa regulação de genes que influencia a síntese da fenaziana particularmente em Pseudomonas (MAVRODI; BLANKENFELDT; THOMASHOW, 2006)
Em relação ao controle biológico segundo Mavrodi (2006) existe uma necessidade de esclarecer se os fatores que influenciam a síntese de fenazina in vitro são funcionalmente similares in situ, de como a estrutura da fenazina afeta as funções e se as falhas no controle biológico que dependem da fenazina são resultados de uma síntese inadequada ou interferência da atividade do antibiótico devido às condições desfavoráveis do solo.
De fato, estudos relataram a importância de várias Pseudomonas spp. fluorescens no controle biológico como produtores de sinais N-acil-homoserinas-lactonas (N-acil-HSL) que regulam genes, que por sua vez, codificam produtos envolvidos na supressão de patógenos. Esses sinais regulam a expressão da amplitude de várias características bacterianas envolvida nas interações entre microrganismos e hospedeiro-microrganismo. Todavia, para bactérias patogênicas, pouco é conhecido a respeito da regulação do gene mediado por N-acil-HSL em bactérias do controle biológico. O papel do N-acil-HSL é considerado na regulação do antibiótico fenazina, no controle biológico por Pseudomonas spp. fluorescens (PIERSON, 1998).
Recentes progressos na compreensão do papel da fenazina no contexto ecológico de comunidades microbianas onde estas são produzidas têm revelado o seu envolvimento em processos de formação de biofilme. Essas áreas de pesquisas estão em expansão e sem dúvida aumentará a compreensão de como esses compostos contribuem para sua sobrevivência nos habitats em que ocupam.
3 CONCLUSÕES
Foram isoladas 150 bactérias, estas classificadas em 6 gêneros diferentes. Concluindo-se que os solos de TPA proporcionam condições favoráveis para alguns gêneros específicos.
Com base nos resultados apresentados pode-se concluir que:
• A bioprospecção de três pontos de profundidade distintos (10, 30 e 50 cm) de solo de TPA mostrou uma diversidade relativamente baixa de isolados identificados. O cultivo de microrganismos ficou restrito à profundidade do solo, quanto mais próximo da superfície, maior foi à diversidade bacteriana.
• De todos os isolados estudados, 97% apresentaram produção de sideróforos, sugerindo que a maioria dos microrganismos deste solo tem um potencial para produzir uma diversidade de metabólitos secundários com várias aplicações em biotecnologia, como é o caso de muitos sideróforos.
• Os genes que codificam para as enzimas NRPS e PKS aparecem em 13 espécies seqüenciadas.
• Mais de 70% das bactérias seqüenciadas inibiram o crescimento de bactérias testes, como as espécies de Escherichia coli, Salmonella, Staphylococcus, Bacillus, Paracoccus e
Micrococcus, sendo estas potenciais patógenas, causadoras de doenças em humanos e
animais, observados pelos testes de bioatividade.
• Pseudomonas putida BCM 20 é a bactéria que apresenta um grande potencial de inibição
contra as bactérias patogênicas testadas.
• O espectro de Q-TOF-MS/MS identificou um composto antimicrobiano produzido pela
Pseudomonas putida BCM 20, denominado de fenazina.
A detecção dos genes NRPS e PKS nestes isolados sugere a produção de compostos bioativos pela via não-ribossomal e a técnica molecular combinada com a bioquímica mostrou ser útil para a busca de metabólitos secundários bioativos.
REFERÊNCIAS
ALTSCHUL, S. F.; GISH, W.; MILLER, W.; MEYERS, E.W.; LIPMAN, D.J. Basic local alignment search tool. Journal of Molecular Biology, London, v. 215, p. 403-410, 1990. ANDERSON, T. H.; DOMSCH, K. H. The metabolic quotient for CO2 (qCO2) as a specific activity parameter to assess the effects ofenvironmental conditions, such as pH, on the microbial biomass of forest soils. Soil Biology & Biochemistry, Oxford, v. 25, p. 393-395. 1993.
ANDERSON, A.S.; CLARK, D.; GIBBONS, P.; SIGMUND, J. The detection of diverse aminoglycoside phosphotransferases within natural populations of actinomycetes. Journal of
Industrial Microbiology and Biotechnology, Hampshire, v. 29, p. 60–69, 2002
BEIFUSS, U.; TIETZE, M. Methanophenazine and other natural biologically active phenazines. In MULZER, J.H (Ed.). Natural products synthesis II: targets, methods, concepts. Berlin: Springer, 2005. p. 77–113.
BENITE, A.M.; MACHADO, S.P.; MACHADO, B.C. Sideróforos: uma resposta dos microrganismos. Química Nova, São Paulo, v. 25, n. 6B, p. 1155-1164, 2002.
BERGGREN, J.W.; VUURDE, L. van; MARTENSSON, A.M. Factors influencing the effect of deleterious Pseudomonas putida rhizobacteria on initial infection of pea roots by Rhizobium
leguminosarum bv. viceae. Applied Soil Ecology, Amsterdam, v. 17, p. 97- 105, 2001.
BERTANI , G. Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia
coli. Journal of Bacteriology, Baltimore, v. 62, p. 293-300, 1951.
BENNER, R.S.; OPSHAL, S. ; CHIN, LEO, G.; RICHEY, J.; FORSBERG, B. Bacterial carbon metabolism in the Amazon River system. Limnology and Oceanography, Canmore, v. 40, p. 1262-1270, 1995.
BODE, H.B.; MÜLLER, R. The impact of bacterial genomics on natural product research.
Angewandte Chemie, New York, v. 44, p. 6828-6846, 2005.
BORNEMAN, J.; TRIPLETT, E. W. Molecular microbial diversity in solis from eastem
Amazonia: Evidence for unusual microorganisms and microbial population shifts associated with deforestation. Applied and Environmental Microbiology, Baltimore, v. 63, p. 2647-2653, 1997.
BOTELHO, G.R.; GUIMARÃES, V.; De BONIS, M.; FONSECA, M.E.F.; HAGLER, A.N.; HAGLER, L.C.M. Ecology of a plant growth-promoting strain of Pseudomonas fluorescens colonizing the maize endorhizosphere in tropical soil. World Journal of Microbiology and
Biotechnology, Amsterdam, v. 14, p. 499-504, 1998.
BRAUN, V.; KILLMANN, H.; Bacterial solutions to the iron-supply problem. Trends in
BRAUD, A.; JEZEQUEL, K.; LEGER, M.A.; LEBEAU, T. Siderophore production by using free and immobilized cells of two pseudomonas cultivated in a médium enriched with Fé and/or toxic metals (Cr, Hg, Pb). Biotechnology and Bioengineering, New York, v. 94, p. 1080-1088, 2006.
BULL, A.T.; WARD, A.C.; GOODFELLOW, M. Search and discovery strategies for
biotechnology: the paradigm shift. Microbiology and Molecular Biology Reviews, Washington, v. 64, n. 3, p. 573–606, 2000.
BYNG, G.S.; EUSTICE, D.C.; JENSEN, R. Biosynthesis of phenazine pigments in mutant and wild-type cultures of Pseudomonas aeruginosa. Journal of Bacteriology,Baltimore, v. 138, p. 846–852, 1979.
CAMARGO, F.C. de. Estudos de alguns perfis de solo coletados em diversas regiões da
Hiléia. Belém: IAN, 1941. 59 p.
CAMPBELL, M.N.; SAINSBURY, M.; SEARLE, P.A The biosynthesis and synthesis of shikimic acid, chorismic acid and related compounds. Synthesis, Stuttgart, v. 5, p. 179-193, 1993.
CANHOS, V.P. Views of a developing country: The brazillian experience In: KIRSOP, B.; HAWKSWORTH, D.L. (Ed.). The biodiversity of microorganisms and the role of microbial
resource centers. London: CABI International, 1994. p. 45-52.
CATTELAN, A.J. Aumento no rendimento de grãos de soja e trigo, a campo, através da inoculação com bactérias promotoras do crescimento. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CIÊNCIA DO SOLO, 28., Londrina, 2001. Programa e resumos ... Londrina: Editores Científicos, 2001. p. 61.
CECHINEL FILHO, V. Principais avanços e perspectivas na área de produtos naturais ativos: Estudos desenvolvidos no NIQFAR/UNIVALI. Química Nova, São Paulo, v. 23, n. 5, p. 680- 685, 2000.
CENTURION, M.A.P.C. Seleção de microrganismos antagônicos à ferrugem (Uromyces
phaseoli (Reben.) Wint.) do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.). 1990. 116 p. Tese (Doutorado
em Fitotecnia) - Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo, Piracicaba, 1990.
CHANWAY, C.P.; SHISHIDO, M.; NAIRN, J.; JUNGWIRTH, S.; MARKHAM, J.; XIAO, G.; HOLL; F.G. Endophytic colonization and field responses of hybrid spruce seedlings after inoculation with plant growth-promoting rhizobacteria. Forest Ecology and Management, Amsterdam, v. 133, p. 81-88, 2000.
CHALLIS, G.L.; NAISMITH, J.H. Strutural aspects of non-ribosomal peptide biosynthesis.
Current Opinion in Structural Biology, London, v. 14, p.748-756, 2004.
CHELIUS, M. K.; TRIPLETT, E.W. The diversity of archae and bacteria in association with the roots of Zea mays L. Microbial Ecology, New York, v. 41, p. 252-263, 2001.
CHEN, C.; BÉLANGER, R.R.; BENHAMOU, N.; PAULITZ, T.C. Defense enzymes induced in cucumber roots by treatment with plant growthM promoting rhizobacteria (PGPR) and Pythium
aphanidermatum. Physiological and Molecular Plant Pathology, London, v. 56, p. 13-23, 2000. CHEMICAL Dictionaries on Natural Products 1982-97. Los Angeles: Chapman & Hall, 1997. 1 CD-ROM.
CHIN-A-WOENG, T.F.C.; BLOEMBERG, G.V.; VAN DER BIJ, A.J.; VAN DER DRIFT, K.M.G.F.; SCHRIPSEMA, J. Biocontrol by phenazine-1-carboxamide-producing Pseudomonas
chlororaphis PCL1391 of tomato root rot caused by Fusarium oxysporum f. sp. radicis-
lycopersici. Molecular plant-microbe interactions, St. Paul, v. 11, p. 1069–1077, 1998.
CHOUDHARY, M.I.; ATTA-UR-RAHMAN Bioactivity-guided phytochemicals from medicinal plants. Royal Society of Chemistry – Special Publication,Christians, n. 200, p. 41-52, 1993.
CHRISTIANSEN, G.; DITTMANN, E.; ORDORIKA, L.V.; RIPPKA, R.; HERDMAN,M.; BO¨RNER, T. Nonribosomal peptide synthase genes occur in most cyanobacterial genera as evidenced by their distribution in axenic strains of the PCC. Archives of microbiology, Heidelberg, v. 176, p. 452–458, 2001.
COLLINS, H. C.; BRAGA. L. G; BONATO, S. P. Introdução a métodos cromatográficos. Campinas: Editora da UNICAMP, 1990. p. 9-279.
COLWELL, R. Microbial diversity: the importance of exploration and conservation. Journal of
Industrial Microbiology and Biotechnology, Hampshire, v.18, n.5, p. 302-307, 1997.
CRAWFORD, D.L. Biodegradation of agricultural and urban wastes. In: GOODFELLOW, M.; WILLIANS, S.T.; MORDARSKY, M. Actinomycetes in biotechnology. London: Academic Press, 1988. p. 433-459
CULLIMORE, D.R. Gram negative strictly aerobic rods and cocci. In: CULLIMORE, R.
Practical atlas for bacterial identification. Boca Raton: CRC Press, 2000. p.13-25.
CUNHA, T.J.F. Horizonte A antrópico em novas classes de solos na Amazônia Brasileira. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CIÊNCIA DO SOLO, 28., 2001, Londrina. Resumos ... Londrina: Sociedade Brasileira de Ciência do Solo, 2001. p. 238.
DIARRA, M. S.; LAVOIE, M. C.; JACQUES, M.; DARWISH, I.; DOLENCE, E. K.;
DOLENCE, J. A.; GHOSH, A.; GOSH, M.; MILLER, M. J.; MALOUIN, F.; Species selectivity of new siderophore-drug conjugates that use specific iron uptake for entry into bacteria
Antimicrobial agents and chemotherapy, Washington, v. 40, n.11, p. 2610-2617, 1996
DITTMANN, E.; NEILAN, B.A.; BÖRNER, T. Molecular biology of peptide and polyketide biosynthesis in cyanobacteria. Applied Microbiology and Biotechnology, Berlin, v. 57, p.467- 473, 2001.
DOYLE, J. J. T.; DOYLE, J. L. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus, Rochester, v. 12, p. 13-18, 1990.
DUBEY, S. K.; TRIPATHI, A. K., UPADHYAY, S. N. Exploration of soil bacterial com communities for their potential as bioresource. Bioresource Technology, New York, v.97, p.2217-2224, 2006.
DUKE, S.O.; DAYAN, F.E. ROMAGNI, J.G.; RIMANDO, A.M. Natural products as sources of herbicides: current status and future trends. Weed Research, Oxford ,v. 40, n. 1, p. 99-111, 2000a.
DUKE, S.O.; DAYAN, F.E. ROMAGNI, J.G.; RIMANDO,A.M. Natural products and herbicide discovery. In: COBB, A.H.; KIRKWOOD, R.C. Herbicides and their mechanisms of action. Sheffield: Academic Press, 2000b. p.105-133.
EMBRAPA. Centro Nacional de Pesquisa de Solos. Sistema brasileiro de classificação de
solos. Brasília, 1999. 412 p. (Documentos, 5).
ERWIN, T. L. The tropical forest canopy- the heart of biotic diversity. In: WILSON, E.O. (Ed.).
Biodiversity. Washington, D.C.: National Academy Press, 1988. p. 123-129.
ETCHEGARAY, A. Biossíntese de antibióticos peptídicos em microrganismos. In: MELO, I.S.; AZEVEDO, J.L. Ecologia microbiana. Jaguariúna: Embrapa-CNPMA, 1998. p.393-419. ETCHEGARAY, A.; RABELLO, E.; DIECKMANN, R.; MOON, D.H.; FIORE, M.F.; VON DÖHREN, H.; TSAI, S.M.; NEILAN, B.A. Algicide production by the filamentous
cyanobacterium Fischerella sp. CENA19. Journal of Applied Phycology, Dordrecht, v.16, p.237-243, 2004.
EWING, B.; HILLIER, L. WENDL, M.C.; GREEN, P. Base –calling of automated sequencer traces using phred. I. Accuracy assessment. Genome Research, Woodbury, v. 8, p. 175-185, 1998.
FALESI, I. C. O estado atual dos conhecimentos sobre os solos da Amazônia Brasileira. In: INSTITUTO DE PESQUISA AGROPECUÁRIA DO NORTE. Zoneamento agrícola da
Amazônia: 1. aproximação. Belém, 1972. p.17-67. (IPEAN. Boletim Técnico, 54).
FAO. Soil map of the world Rome, 1988. (World Resources Report, 60).
FAO. Soil map of the world. revised legend: reprinted with corrections. Rome, 2001. (World Resources Report, 60).
FARIA, J. B. A cerâmica da Tribo Uaboí dos rios Trombetas e Jamundá: contribuição para o estudo da arqueologia pré-histórica do baixo Amazõnas. Rio de Janeiro: Ministério da
Agricultura. 1946. (Publicação, 89).
FELSKE, A.; RHEIMS, H.; WOLTERNICK, A.; STRACKEBRANDT, E., AKKERMANS, A.D. Ribosome analysis reveals prominent activity of an uncultured member of class
FLEURI, L.F.; SATO, H.H. Produção, purificação, clonagem e aplicação de enzimas líticas.
Química Nova. São Paulo, v. 28, p. 871-879, 2005.
FLOOD, M.E.; HERBERT, R.B.; HOLLIMAN, F.G. 1972. Pigments of Pseudomonas species. Part V. Biosynthesis of pyocyanin and the pigments of Ps. aureofaciens. Journal of the Chemical Society Perkin Transactions, London, v. 1, p.622–26, 1972.
FRANCO, E.C. As terras pretas do planalto de Santarém. Revista da Sociedade dos Agrônomos
e Veterinários do Pará, Belém, v. 8, p.17-21, 1962.
FREITAS, S.S.; PIZZINATTO, M.A. Interações de Pseudomonas sp. E Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici na rizosfera de tomateiro (Lycopersicon esculentum). Summa Phytopathologica, Piracicaba, v. 17, p. 105-112, 1997.
GARRETT, T. M.; MCMURRY, T. J.; HOSSEINI, M. W.; REYES, Z.E.; HAHN, F.E.; RAYMOND, K. N.; Ferricion sequestering agents. 22. Synthesis and characterization of macrobicyclic iron(III) sequestering agents. Journal of the American Chemical Society, Easton, v. 113, n.8, p. 2965-2977, 1991,
GESSARD, C. Sur les colorations bleu et verte des lignes `a pansements. Comptes Rendus de
l'Académie des sciences, Paris, v. 94, p. 536–68, 1882
GLASER, B. Burning residues as conditioner to sustainable improve fertility improve in highly weathered soils of the Brazilian Amazon region. In: BSSS CONFERENCE, 1999, Edinburgh.
Proceedings ... Edinburgh: 1999. p. 5.
GLASER, B.; BALASHOV, E.; HAUMAIER, L.; GUGGENBERGER, G., ZECH, W. Black carbon in density fractions of anthropogenic soils of the Brazilian Amazon region. Organic
Geochemistry, Amsterdam, v. 31, p. 669-678, 2000.
GLASER, B.; ZECH,W.I.; WOODS, W.I. History, current knowledge and future perspectives of geoecological research concernig the origin of amazonian anthropogenic dark earths (terra preta). In: GLASER, B.; WOODS, W.I. (Ed.). Amazonian dark earths: exploration in space and time. New York: Springer. 2004. p. 9-17.
GOODELL, B.; JELLISON, J.; LIU, J.; DANIEL, G.; PASZCZYNSKI, A.; FEKETE, F.; KRISHNAMURTHY, S.; JUN, L.; XU, G.; Low molecular weight chelators and phenolic compounds isolated from wood decay fungi and their role in the fungal biodegradation of wood.
Journal of Biotechnology, Amsterdam, v. 53, n. 2/3, p. 133-162, 1997
GORDON, D.; ABAJIAN, C.; GREEN, P. Consed: a geographical tool for sequence finishing.
Genome Research, Woodbury, v. 8, p. 195-202, 1998.
GUTTE, B. Peptides: synthesis, structure, and applications. New York: Academic Press, 2000. 511 p.
HALL, T. BioEdit: version 5.0.6. Raleigh: North Caroline State University, Department of Microbiology, 2001. 192 p.
HALVERSON, L.J.; HANDELSMAN, J. Enhancement of soybean nodulation by Bacillus cereus VW 85 in the field and in a growth chamber. Applied and Environmental Microbiology,
Baltimore ,v.57, n.9, p. 2767-2770, 1991.
HANCOCK, R.E.W.; CHAPPLE, D.S. Peptide antibiotics. Antimicrobial Agents and
Chemotherapy, Washington, v. 43, n. 6, p. 1317-1323, 1999.
HARDMAN, J. Goodman & Gilman: the farmacological basis of therapeutics. 10.ed. Rio de Janeiro: McGraw Hill, 2003. p. 67-71
HARTT, F. Contribuição para a etnologia do Vale do Amazonas. Arquivos do Museu Nacional
do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, v. 6, p.10-14, 1885.
HASSAN, H.M.; FRIDOVICH I. Mechanism of the antibiotic action of pyocyanine. Journal of bacteriology. Baltimore, v. 141, p. 156–63, 1980.
HERNLEM, B. J.; VANE, L. M.; SAYLES, G.D.; The application of siderophores for metal recovery and waste remediation: examination of correlations for prediction of metal affinities.
Water Research, New York, v. 33, n. 3, p.951-960. 1999.
HOLLIMAN, F.G. Pigments of Pseudomonas species. Part I. Structure and synthesis of
aeruginosin A. Journal of the Chemical Society. C. Organic, London, v.18, p.2514–16, 1969.
HUNTER-CEVERA, J.C. The value of microbial diversity. Current Opinion in Microbiology, London, v. 1, p. 278-285, 1998.
HWANG, P.M; VOGEL, H.J. Structure-function relationships of antimicrobial peptides.
Biochemistry and Cell Biology, Ottawa, v.76, p.235-246, 1998.
JENKE-KODAMA, H.; SANDMANN, A.; MULLER, R.; DITTMANN, E. Evolutionary implications of bacterial polyketide synthases. Molecular Biology and Evolution, Chicago, v.22, p.2027-2039, 2005.
JOLIK C. Zinsser microbiología. 20.ed. Buenos Aires: Médica Panamericana, 2003. 1696 p.
JORGENSEN, R.A.; CLUSTER, P.D. Modes and temps in the evolution of nuclear ribosomal DNA: new characters for evolutionary studies and new markers for genetic and population studies. Annual Missouri Botanical Garden, Saint Louis, v. 75, p. 1238-1247, 1989. KÄMPF, N, W. WOODS, W. SOMBROEK, D. KERN, TJF CUNHA. Classification of Amazonian Dark Earths and other ancient anthropoic soil. In: . LEHMANN J.; KERN, D., GLASER, B., WOODS,W. Amazonian dark earth: origin, properties, management. Dordrecht: Kluwer Academic, 2003. p. 78-98.
KATE, K. Biotechnology in fields other than healthcare and agriculture. In: KATE, K.; LAIRD, S. A. (Ed.). The commercial use of biodiversity. London: Earthscan Publications Ltd., 1999. p. 228-261.
KEATING, T.A.; WALSH, C.T. Initiation, elongation, and termination strategies in polyketide and polypeptide antibiotic biosynthesis. Current Opinion in Chemical Biology, London, v. 3, p. 598-606, 1999.
KENNEDY A.C. Bacterial diversity in agroecosystems. Agriculture Ecosystems and
Environment. Amsterdam, v.74, p. 65-76. 1999
KERN, D.C. Caracterização de solos com Terra preta Arqueológica na região de Oriximiná,
Pará. 1988. 232 p. Dissertação (Mestrado em Agronomia). Faculdade de agronomia da
Universidade Federal Rural do Rio Grande do Sul. Porto Alegre. 1988.
KERN, D.C.; KÄMPF, N. Antigos assentamentos indígenas na formação de solos com Terra Preta Arqueológica na região de Oriximiná, Pará. Revista Brasileira de Ciência do Solo, Campinas, v.13, p. 219-225, 1989.
KERN, D. C.; D’AQUINO, G.; RODRIGUES, T.E.; FRAZÃO, F.J.L.; SOMBROEK, W.; MYERS, T.P. E NEVES, E.G. Distribution of Amazonian Dark Earths in the Brazilian Amazon. In: LEHMAM, J.; KERN, D.C.; GLASER, B.; WOODS, W.I.(Ed.). Amazonian dark earths: origin, properties & management. Dordrecht: Kluwer Academic Publishers, 2003. p. 51-75. KERN, D.C.M.; COSTA, L.; FRAZÃO, F. Evolution of scientific knowledge regarding archaeological black earths in Amazonia. In: GLASER, B.; WOODS, W.I. Amazonian dark
earth: exploration in space and time. Berlin: Springer, 2004. p. 19-28.
KIRK, J.L.; BEAUDETTE, L.A.; HART, M.; MOUTOGLIS, P.; KLIRONOMOS, J.N.; LEE, H.; TREVORS, J. T. Methods of studying soil microbial diversity. Journal of Microbiological
Methods, Dordrecht, v.58, p.169-188, 2004.
KLEINKAUF, H.; VON DÖHREN, H. A nonribosomal system of peptide biosynthesis.
European Journal of Biochemistry, Oxford, v. 236, p.335-351, 1996.
KLOEPPER, J. W; LEONG, J.; TEINTZE, M.; SCROTH, M.N. Enhanced plant growth by siderophores produced by plant growth-promoting rhizobacteria. Nature, London, v.286, p.885- 886, 1980a.
KLOEPPER, J. W; LEONG, J.; TEINTZE, M.; SCROTH, M.N. Pseudomonas siderophores: a mechanism explaining disease supressive soils. Current Microbiology, New York, v.4, p. 317- 320, 1980b.
KO, L.; , MAITLAND, A.; . FEDAK, P. W.; DUMONT, M A. S.; BADIWALA, M.; LOVREN, F.; TRIGGLE, C. R.; ANDERSON, T. J.; RAO V.; VERMA, S. Endothelin
blockade potentiates endothelial protective effects of ace inhibitors in saphenous veins Annals of
Thoracic Surgery, Worcester, v. 73, n. 4, p.1185-1188, 2002
KOLTER, R.; MORENO, F. Genetics of ribosomally synthesized peptide antibiotics. Annual
KRAES, J.; LOPER, J. E. Characterization of a genomic region required production of the pyoluteorin by biological control agent Pseudomonas fluorescens Pf-5. Applied and
Environmental Microbiology, Washington, v. 61, n. 3, p. 849-854, 1995.
KUMAR, S.; TAMURA, K.; NEI, M. MEGA 3: Integrated Software for Molecular Evolutionary Genetic Analysis and Sequence Alignment. Briefings in Bioinformatics, Oxford, v. 5, p. 150- 163, 2004.
KURTBÖKE, D.I.; SWINGS, J.; STORMS, V. Microbial genetic resources and Biodiscovery. In: KURTBÖKE, I.; SWINGS, J. (Ed.). Microbial genetic resources and biodiscovery Queensland: WFCC Publications, 2004. p. 163-184.
LAURSEN, J.B.;NIELSEN, J. Phenazine natural products: biosynthesis, synthetic analogues, and biological activity. Chemical Reviews, Baltimore, v. 104, p. 1663–1685, 2004.
LIMA, H. N. Gênese, química e micromorfologia de solos da Amazônia Ocidental. 2001. 176 p. Tese (Doutorado em Agronomia) - Universidade Federal de Viçosa. Viçosa, 2001
LOVIC, B.; HECK, C.; GALLIAN-,J.J.; ANDERSON, A J. Inhibition of the sugarbeet pathogens
Phoma betae and Rhizoctonia solani by bacteria associated with sugarbeet seeds and roots.
Journal of Sugar Beet Research, Boca Raton, v. 30, n. 3, p. 169- 184, 1993.
LUTON, P. E.; WAYNE, J.M.; SHARP, R.J.; RILER, P. W. The mcrA gene as an alternative to 16rRNA in the phylogenetic analysis of methanogen population in landfill. Microbiology, Reading, v. 148, p. 3521-3530, 2002.
MACIEL, M.A.M.; PINTO, A.C.; VEIGA J.R. Plantas medicinais: A necessidade de estudos multidisciplinares. Química Nova, São Paulo,v. 25, n. 3, p. 429-438, 2002.
MARAHIEL, M.A.; STACHELHAUS, T.; MOOTZ, H.D. Modular peptide synthetases involved in nonribosomal peptide synthesis. Chemical Reviews, Baltimore, v.97, p. 2651-2673, 1997.
MAVRODI, D. V.; BLANKENFELDT, W.; THOMASHOW, L. S. Phenazine Compounds in Fluorescent Pseudomonas spp.. Biosynthesis and Regulation. Annual Review of
Phytopathology, Palo Alto, v.44, p.417-45, 2006.
MAZZOLA, M. COOK, R. J.; THOMAXHOW, L.S.; WELLER, D.M.; PIERSON, L.S.