3 MATERIAIS E MÉTODOS
4.2 Identificações e avaliação biológica e funcional
4.2.12. Determinação da letalidade em camundongos e avaliação dos efeitos do
A letalidade da peçonha solúvel, diluída em PBS, foi avaliada através de injecção via
i.p. utilizando grupos de camundongos BALB/c. De acordo com os dados apresentados na
tabela 4, a DL50 do Tsti resultou em 11,5 μg/20g de animal (0,575 mg/kg), demostrando ser
uma peçonha de composição com elevada toxicidade. A DL50 da peçonha analisada nesse
trabalho foi 34,4% menor do que a relatada anteriormente (NISHIKAWA et al., 1994). Os animais foram observados durante as duas primeiras horas para manifestações clínicas. Entre os sinais de intoxicação ao realizar esse experimento estão a agressividade, hiperatividade, hipersensibilidade, movimentos de cauda (movimento ondulatório em forma de espiral),
piloereção, saltos e vocalizações nos primeiros 15 min após a injeção da peçonha. Após 30 min, os sinais de intoxicação foram agravados, somando-se aos sinais anteriormente mencionados, ataxia, contorções abdominais, defecação, dificuldade respiratória (dispnéia), hipoatividade, prostração, produção e liberação excessiva de lágrimas, priapismo, sialorréia, sudorese, e convulsão seguida de morte. Após as primeiras 24 h da aplicação da peçonha, nenhuma morte foi registrada.
Tabela 4 - Avaliação da letalidade para a peçonha de T. stigmurus. Peçonha ou PBS (grupo de controle) foram
injetados via i.p. (200µL) em camundongos BALB/c e observados durante 48 h.
Tsti
(µg/20 g peso animal) (Camundongos mortos/número total Letalidade de animais) 0.0 0/6 5.0 0/6 7.5 1/6 10.0 2/6 13.5 4/6 17.0 6/6
As manifestações cardio-respiratórias são as principais causas de morte após o envenenamento (BAHLOUL et al., 2013). Sinais de envenenamento como coma e convulsões - manifestações de graves complicações neurológicas - podem ser explicados por edema pulmonar e fatores associados a ele, como liberação maciça de catecolaminas induzida pelas toxinas escorpiônicas e choque cardiogênico que pode resultar em isquemia cerebral (BAHLOUL et al., 2013; BAHLOUL et al., 2005; CLOT-FAYBESSE et al., 1999; SOFER; GUERON, 1990). A sintomatologia no sistema nervoso causada por envenenamento por T.
serrulatus, por exemplo, é indicada como resultado dos efeitos primários das neurotoxinas
nos canais iônicos, causando uma liberação maciça de neurotransmissores como catecolaminas, acetilcolina, entre outros (PUCCA et al., 2015). Os canais iônicos são responsáveis pelo controle de funções essenciais como no potencial de ação celular, atividade neuronal, secreção hormonal, liberação de neurotransmissores e contração muscular (DE PAULA SANTOS-DA-SILVA et al., 2017). A excitação do sistema nervoso autônomo é caracterizada por respostas parassimpáticas e simpáticas, induzindo mudanças fisiológicas e comportamentais. Além dos efeitos importantes sobre o sistema nervoso periférico, as neurotoxinas também são responsáveis pela ação indireta em outros sistemas anatômicos (PUCCA et al., 2015; VASCONCELOS et al., 2005).
6 CONCLUSÃO
Esse estudo contribuiu para a ampliação do conhecimento sobre o repertório molecular presente na peçonha de T. stigmurus, bem como a caracterização das peçonhas de
T. neglectus e T. pusillus, sendo esse o primeiro relato na literatura. Utilizando abordagem de
PSM e sequenciamento de novo, famílias de proteínas como serina proteinase e fosfolipase A2
foram descritas pela primeira vez para T. stigmurus. Dentre as famílias de toxinas identificadas nas peçonhas de T. neglectus e T. pusillus estão NaTxs, KTxs, CRISPs, AMPs, hipotensinas, inibidores do tipo serpina, serina proteases, metaloproteases, fosfolipases A2 e
hialuronidases. Importante porcentual de metaloproteases em Tsti, hipotensinas em Tpus e antimicrobianos em Tneg foi verificado e demonstram que apesar de pertencerem a um mesmo gênero, existem diferenças importantes no tocante a equalização das classes de toxinas identificadas.
As peçonhas foram funcionamente caracterizadas utilizando testes bioquímicos. Atividade hialuronidásica foi positiva em todas as peçonhas avaliadas. Atividade fosfolipásica foi detectada apenas em Tneg. Embora as peçonhas de Tneg e Tsti tenham apresentado em seus constituintes inibidores do tipo serpina (Tneg) e enzimas proteolíticas (ambos), com a presença da atividade fibrinogenolítica, foi observado apenas um discreto efeito na alteração do tempo de coagulação. Reatividade cruzada com baixa intensidade foi verificada para Tneg e Tpus em tratamento com o soro anti-escorpiônico produzido com as peçonhas de T.
serrulatus e T. bahiensis. Tneg demonstrou ser citotóxico para células normais (macrófagos,
3T3 e Hek) além de propriedade imunomoduladora. Tsti demonstrou citotoxicidade apenas para a linhagem celular Hek e revelou ser altamente tóxica para camundongos, com as principais manifestações do envenenamento descritas. Análises de espectrometria de massas são essenciais para caracterizar amostras complexas, especialmente úteis no estudo de componentes de baixa abundância, para os quais freqüentemente são encontradas limitações para sua detecção por testes biológicos. Esforços para expandir bancos de dados para a ordem Scorpiones são necessários, a fim de permitir uma melhor caracterização dessas amostras biológicas, que são importantes em medicina e biotecnologia. Esta base de dados sobre as peçonhas de T. stigmurus, T. neglectus e T. pusillus é essencial para compreender o mecanismo de ação destas peçonhas, bem como para isolar e caracterizar peptídeos potencialmente aplicáveis em farmacologia e biotecnologia.
7 PERSPECTIVAS FUTURAS
Dentre as perspectivas futuras desta abordagem, está a realização de análise transcriptômica para Tneg e Tpus com a finalidade de ampliar o repertório de identificações. A síntese e/ou isolamento de compostos são necessárias para comprovar as atividades propostas nesse estudo, bem como viabilizar o desenvolvimento de novas moléculas com aplicações farmacológicas e biotecnológicas. Dentre os testes de atividade biológica e funcional não realizados nesta tese, mas almejados pelo grupo, estão a avaliação da citotoxicidade em células normais do sistema nervoso, bem como a avaliação dos efeitos sobre linhagens celulares tumorais, aprofundamento dos estudos sobre os efeitos imunomoduladores, e realização de testes para propriedades antiparasitárias e antivirais para Tsti, Tpus e Tneg. Além disso, estudo para a determinação da letalidade e a caracterização dos efeitos do envenenamento in vivo das peçonhas de T. neglectus e T. pusillus são fundamentais, uma vez que as informações sobre envenenamento com esses artrópodes são escassas.
8 PRODUÇÃO CIENTÍFICA Artigos publicados
FÉLIX-SILVA, J.; GOMES, J. A. S.; FERNANDES, J. M.; MOURA, A. K. C.; MENEZES,
Y. A. S.; SANTOS, E. C. G.; TAMBOURGI, D. V.; SILVA-JUNIOR, A. A.; ZUCOLOTTO,
S. M.; FERNANDES-PEDROSA, M. F. Comparison of two Jatropha species (Euphorbiaceae) used popularly to treat snakebites in Northeastern Brazil: Chemical profile, inhibitory activity against Bothrops erythromelas venom and antibacterial activity. Journal of
ethnopharmacology, v. 213, p. 12-20, 2017. Fator de impacto: 2.98
SOARES, K. S. R.; GLÁUCIA-SILVA, F.; DANIELE-SILVA, A.; TORRES-RÊGO, M.; ARAÚJO, N. K.; MENEZES, Y. A. S.; DAMASCENO, I.; TAMBOURGI, D. V.; SILVA- JÚNIOR, A. A.; FERNANDES-PEDROSA, M. F. Antivenom Production against Bothrops
jararaca and Bothrops erythromelas Snake Venoms Using Cross-Linked Chitosan
Nanoparticles as an Immunoadjuvant. Toxins, v. 10, n. 4, p. 158, 2018.
CAVALCANTI-FREIRE, M. C. L.; MENEZES, Y. A. S.; FERRAZ, M. V. F.; CRUZ, C. H. B.; FERREIRA, L. S.; FERNANDES-PEDROSA, M. F., BARBOSA, E. G. Molecular basis of Tityus stigmurus alpha toxin and potassium channel kV1.2 interactions. Journal of
Molecular Graphics and Modelling, v. 87, p. 197-203, 2019. Fator de impacto: 1.81
REFERÊNCIAS
ABDEL-RAHMAN, M. A.; HARRISON, P. L.; STRONG, P. N. Snapshots of scorpion venomics. Journal of Arid Environments, v. 112, n., p. 170-176, 2015.
ABDEL-RAHMAN, M. A.; QUINTERO-HERNANDEZ, V.; POSSANI, L. D. Venom proteomic and venomous glands transcriptomic analysis of the Egyptian scorpion Scorpio maurus palmatus (Arachnida: Scorpionidae). Toxicon, v. 74, p. 193-207, 2013.
ACHARYA, K. R. et al. Ace revisited: A new target for structure-based drug design. Nature
Reviews Drug Discovery, v. 2, n., p. 891, 2003.
AEBERSOLD, R.; GOODLETT, D. R. Mass Spectrometry in Proteomics. Chemical
Reviews, v. 101, n. 2, p. 269-296, 2001.
AEBERSOLD, R.; MANN, M. Mass spectrometry-based proteomics. Nature, v. 422, p. 198, 2003.
ALBUQUERQUE, C. M. R. D.; BARBOSA, M. O.; IANNUZZI, L. Tityus stigmurus (Thorell, 1876) (Scorpiones; Buthidae): response to chemical control and understanding of scorpionism among the population. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, v. 42, p. 255-259, 2009.
ALBUQUERQUE, C. M. et al. Scorpionism caused by Tityus pusillus Pocock, 1893 (Scorpiones; Buthidae) in State of Pernambuco. Revista da Sociedade Brasileira de
Medicina Tropical, v. 42, n. 2, p. 206-208, 2009.
ALMAAYTAH, A.; ALBALAS, Q. Scorpion venom peptides with no disulfide bridges: A review. Peptides, v. 51, p. 35-45, 2014.
ALMEIDA, D. et al. Profiling the resting venom gland of the scorpion Tityus stigmurus through a transcriptomic survey. BMC Genomics, v. 13, n. 1, p. 362, 2012.
ALMEIDA, D. D. et al. Molecular approaches for structural characterization of a new potassium channel blocker from Tityus stigmurus venom: cDNA cloning, homology modeling, dynamic simulations and docking. Biochem Biophys Res Commun, v. 430, n. 1, p. 113-118, 2013.
ALMEIDA, F. M. et al. Enzymes with gelatinolytic activity can be found in Tityus bahiensis and Tityus serrulatus venoms. Toxicon, v. 40, n. 7, p. 1041-1045, 2002.
ALTSCHUL, S. F. et al. Basic local alignment search tool. Journal of Molecular Biology, v. 215, n. 3, p. 403-410, 1990.
ALVARENGA, E. R. et al. Transcriptome analysis of the Tityus serrulatus scorpion venom gland Open Journal of Genetics, v. 2, p. 210-220, 2012.
AMITAI, Y. Clinical manifestations and management of scorpion envenomation. Public
BAHLOUL, M. et al. Pulmonary edema following scorpion envenomation: Mechanisms, clinical manifestations, diagnosis and treatment. International Journal of Cardiology, v. 162, n. 2, p. 86-91, 2013.
BAHLOUL, M. et al. Neurological complications secondary to severe scorpion envenomation. Medical Science Monitor, v. 11, n. 4, p. CR196-CR202, 2005.
BARNES, K.; BROWN, C.; TURNER, A. J. Endothelin-Converting Enzyme. Hypertension, v. 31, n. 1, p. 3, 1998.
BARONA, J. et al. Proteomic analysis of the venom and characterization of toxins specific for Na+- and K+-channels from the Colombian scorpion Tityus pachyurus. Biochimica et
Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics, v. 1764, n. 1, p. 76-84, 2006.
BATISTA CESAR, V. F. et al. Proteomic analysis of Tityus discrepans scorpion venom and amino acid sequence of novel toxins. Proteomics, v. 6, n. 12, p. 3718-3727, 2006.
BATISTA, C. V. F. et al. Proteomics of the venom from the Amazonian scorpion Tityus cambridgei and the role of prolines on mass spectrometry analysis of toxins. Journal of
Chromatography B, v. 803, n. 1, p. 55-66, 2004.
BATISTA, C. V. F. et al. Venom characterization of the Amazonian scorpion Tityus metuendus. Toxicon, v. 143, n., p. 51-58, 2018.
BATISTA, C. V. F. et al. Proteomic analysis of the venom from the scorpion Tityus stigmurus: Biochemical and physiological comparison with other Tityus species.
Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology, v. 146,
n. 1, p. 147-157, 2007.
BECERRIL, B. et al. Toxic peptides and genes encoding toxin gamma of the Brazilian scorpions Tityus bahiensis and Tityus stigmurus. v., n. 0264-6021 (Print), p.,
BECERRIL, B.; MARANGONI, S.; POSSANI, L. D. Toxins and genes isolated from scorpions of the genus Tityus. Toxicon, v. 35, n. 6, p. 821-835, 1997.
BORGES, A.; ROJAS-RUNJAIC, F. J. M. Tityus perijanensis González-Sponga (Scorpiones, Buthidae): Molecular assessment of its geographical distribution and venom lethality of Venezuelan populations. Toxicon, v. 50, n. 7, p. 1005-1010, 2007.
BORGES, M. H. et al. Venomous extract protein profile of Brazilian tarantula Grammostola iheringi: searching for potential biotechnological applications. Journal of Proteomics, v. 136, p. 35-47, 2016.
BOSMANS, F.; TYTGAT, J. Voltage-gated sodium channel modulation by scorpion α- toxins. Toxicon, v. 49, n. 2, p. 142-158, 2007.
BOURTSALA, A.; GALANOPOULOU, D. Phospholipases. Reference Module in Food
Science, p. 1-10, 2018. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B978008100596521651X>. Acesso em 20 out. 2018.
BRASIL et al. Manual de controle de escorpiões. SAÚDE, M. D. Brasília: Ministério da Saúde: 72 p. 2009.
BRAZÓN, J. et al. Fibrin(ogen)olytic enzymes in scorpion (Tityus discrepans) venom.
Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology,
v. 168, p. 62-69, 2014.
BRINGANS, S.; ERIKSEN, S.; KENDRICK, T.; GOPALAKRISHNAKONE, P.; LIVK, A.; LOCK, R.; LIPSCOMBE, R. Proteomic analysis of the venom of Heterometrus longimanus (Asian black scorpion). Proteomics, v. 8, p. 1081-1096, 2008.
BROGDEN, K. A. Antimicrobial peptides: pore formers or metabolic inhibitors in bacteria?
Nature Reviews Microbiology, v. 3, p. 238, 2005.
CAJADO-CARVALHO, D. et al. Insights into the Hypertensive Effects of Tityus serrulatus Scorpion Venom: Purification of an Angiotensin-Converting Enzyme-Like Peptidase. Toxins, v. 8, n. 348, p. 1-16, 2016.
CALISKAN, F. et al. Characterization of venom components from the scorpion Androctonus crassicauda of Turkey: Peptides and genes. Toxicon, v. 48, n. 1, p. 12-22, 2006.
CALISKAN, F. et al. Turkish scorpion Buthacus macrocentrus: General characterization of the venom and description of Bu1, a potent mammalian Na+-channel α-toxin. Toxicon, v. 59, n. 3, p. 408-415, 2012.
CAMARGO, A. C. M. et al. Bradykinin-potentiating peptides: Beyond captopril. Toxicon, v. 59, n. 4, p. 516-523, 2012.
CAMARGOS, T. S. et al. The new kappa-KTx 2.5 from the scorpion Opisthacanthus cayaporum. Peptides, v. 32, n. 7, p. 1509-1517, 2011.
CARMO, A. O. et al. Molecular and functional characterization of metalloserrulases, new metalloproteases from the Tityus serrulatus venom gland. Toxicon, v. 90, p. 45-55, 2014. CARVALHO, P. C. et al. Search Engine Processor: filtering and organizing PSMs.
Proteomics, v. 12, n. 7, p. 944-949, 2012.
CATTERALL, W. A. Voltage-Gated Sodium Channels: Structure, Function, and Pathophysiology A2 - Lennarz, William J. In: LANE, M. D. (Ed.). Encyclopedia of
Biological Chemistry. ed. Waltham: Academic Press, p. 564-569, 2013.
CATTERALL, W. A. et al. Voltage-gated ion channels and gating modifier toxins. Toxicon, v. 49, n. 2, p. 124-141, 2007.
CESTÈLE, S. et al. Structure and Function of the Voltage Sensor of Sodium Channels Probed by a β-Scorpion Toxin. Journal of Biological Chemistry, v. 281, n. 30, p. 21332- 21344, 2006.
CHEN, C.-C.; LIN-SHIAU, S.-Y. Mode of inhibitory action of melittin on Na+-K+-ATPase activity of the rat synaptic membrane. Biochemical Pharmacology, v. 34, n. 13, p. 2335- 2341, 1985.
CHEN, Z. et al. Cloning and characterization of a novel Kunitz-type inhibitor from scorpion with unique cysteine framework. Toxicon, v. 72, p. 5-10, 2013a.
CHEN, Z. et al. Genomic and Structural Characterization of Kunitz-Type Peptide LmKTT-1a Highlights Diversity and Evolution of Scorpion Potassium Channel Toxins. PLOS ONE, v. 8, n. 4, p. e60201, 2013b.
CHIARIELLO, T. M. Veterinary Care of Scorpions. Journal of Exotic Pet Medicine, v. 26, n. 2, p. 114-122, 2017.
CHIPPAUX, J. P.; GOYFFON, M. Epidemiology of scorpionism: A global appraisal. Acta
Tropica, v. 107, n. 2, p. 71-79, 2008.
CID URIBE, J. I. et al. Comparative proteomic analysis of female and male venoms from the Mexican scorpion Centruroides limpidus: Novel components found. Toxicon, v. 125, p. 91- 98, 2017.
CLOT-FAYBESSE, O. et al. Toxicity during early development of the mouse nervous system of a scorpion neurotoxin active on sodium channels. Life Sciences, v. 66, n. 3, p. 185- 192, 1999.
COLEMAN, J. W. Nitric oxide in immunity and inflammation. International
Immunopharmacology, v. 1, n. 8, p. 1397-1406, 2001.
COLLET, C.; CANDY, J. How many insulin-like growth factor binding proteins? Molecular
and Cellular Endocrinology, v. 139, n. 1, p. 1-6, 1998.
COLOGNA CAMILA, T. et al. Investigation of the relationship between the structure and function of Ts2, a neurotoxin from Tityus serrulatus venom. The FEBS Journal, v. 279, n. 8, p. 1495-1504, 2012.
CONDE, R. et al. Phospholipin, a novel heterodimeric phospholipase A2 from Pandinus imperator scorpion venom. FEBS Letters, v. 460, n. 3, p. 447-450, 1999.
COSTA, J. D. O. et al. Structural and functional comparison of proteolytic enzymes from plant latex and snake venoms. Biochimie, v. 92, n. 12, p. 1760-1765, 2010.
CRAIK, D. J.; DALY, N. L.; WAINE, C. The cystine knot motif in toxins and implications for drug design. Toxicon, v. 39, n. 1, p. 43-60, 2001.
CREMONEZ, M. C. et al. Structural and Functional Elucidation of Peptide Ts11 Shows Evidence of a Novel Subfamily of Scorpion Venom Toxins. Toxins, v. 8, n. 10, 2016.
CSÓKA, T. B.; FROST, G. I.; STERN, R. Hyaluronidases in tissue invasion. Invasion &
Metastasis, v. 17, p. 297-311, 1997.
D'SUZE, G. et al. Relationship between plasmatic levels of various cytokines, tumour necrosis factor, enzymes, glucose and venom concentration following Tityus scorpion sting.
Toxicon, v. 41, n. 3, p. 367-375, 2003.
D'SUZE, G. et al. Molecular cloning and nucleotide sequence analysis of genes from a cDNA library of the scorpion Tityus discrepans. Biochimie, v. 91, n. 8, p. 1010-1019, 2009.
DE-SIMONE, S. G.; NETTO, C. C.; SILVA, F. P. Simple affinity chromatographic procedure to purify β-galactoside binding lectins. Journal of Chromatography B, v. 838, n. 2, p. 135-138, 2006.
DE ALBUQUERQUE, C. M. R.; DE ARAUJO LIRA, A. F. Insights into reproductive strategies of Tityus (Archaeotityus) pusillus Pocock, 1893 (Scorpiones, Buthidae). Comptes
Rendus Biologies, v. 339, n. 5, p. 179-184, 2016.
DE LA VEGA, R. C. R.; POSSANI, L. D. Novel paradigms on scorpion toxins that affects the activating mechanism of sodium channels. Toxicon, v. 49, n. 2, p. 171-180, 2007.
DE OLIVEIRA, F. et al. Biochemical and functional characterization of BmooSP, a new serine protease from Bothrops moojeni snake venom. Toxicon, v. 111, n., p. 130-138, 2016. DE OLIVEIRA, U. C. et al. The transcriptome recipe for the venom cocktail of Tityus bahiensis scorpion. Toxicon, v. 95, n., p. 52-61, 2015.
DE PAULA SANTOS-DA-SILVA, A. et al. Some pharmacological effects of Tityus obscurus venom in rats and mice. Toxicon, v. 126, n., p. 51-58, 2017.
DIAS, N. B. et al. Profiling the short, linear, non-disulfide bond-containing peptidome from the venom of the scorpion Tityus obscurus. Journal of Proteomics, v. 170, n., p. 70-79, 2018.
DIAS, S. C.; CANDIDO, D. M.; BRESCOVIT, A. D. Scorpions from Mata do Buraquinho, João Pessoa, Paraíba, Brazil, with ecological notes on a population of Ananteris mauryi Lourenço (Scorpiones, Buthidae). Revista Brasileira de Zoologia, v. 23, n., p. 707-710, 2006.
DIEGO-GARCÍA, E. et al. The Brazilian scorpion Tityus costatus Karsch: genes, peptides and function. Toxicon, v. 45, n. 3, p. 273-283, 2005.
DIEGO‐GARCÍA, E. et al. Molecular diversity of the telson and venom components from Pandinus cavimanus (Scorpionidae Latreille 1802): Transcriptome, venomics and function. Proteomics, v. 12, p. 313-328, 2012.
DIXON, D. C.; CUTT, J. R.; KLESSIG, D. F. Differential targeting of the tobacco PR-1 pathogenesis-related proteins to the extracellular space and vacuoles of crystal idioblasts. The
ESTRADA-GÓMEZ, S. et al. Characterizing the biological and biochemical profile of six different scorpion venoms from the Buthidae and Scorpionidae family. Toxicon, v. 130, n., p. 104-115, 2017.
FÉLIX-SILVA, J. et al. Inhibition of local effects induced by Bothrops erythromelas snake venom: Assessment of the effectiveness of Brazilian polyvalent bothropic antivenom and aqueous leaf extract of Jatropha gossypiifolia. Toxicon, v. 125, p. 74-83, 2017.
FÉLIX-SILVA, J. et al. Aqueous Leaf Extract of Jatropha gossypiifolia L. (Euphorbiaceae) Inhibits Enzymatic and Biological Actions of Bothrops jararaca Snake Venom. PLOS ONE, v. 9, n. 8, p. e104952, 2014.
FENG, L. et al. Cloning and molecular characterization of BmHYA1, a novel hyaluronidase from the venom of Chinese red scorpion Buthus martensi Karsch. Toxicon, v. 56, n. 3, p. 474-479, 2010.
FENN, J. B. et al. Electrospray ionization for mass spectrometry of large biomolecules.
Science, v. 246, n. 4926, p. 64, 1989.
FERNANDES-PEDROSA, M. D. F.; FÉLIX-SILVA, J.; MENEZES, Y. A. S. Toxins from Venomous Animals: Gene Cloning, Protein Expression and Biotechnological Applications. In: RADIS-BAPTISTA, G. (Ed.). An Integrated View of the Molecular Recognition and
Toxinology. ed.: InTech, 2013. cap. 2, p. 72.
FERREIRA, L. A. F.; ALVES, E. W.; HENRIQUES, O. B. Peptide T, a novel bradykinin potentiator isolated from Tityus Serrulatus scorpion venom. Toxicon, v. 31, n. 8, p. 941-947, 1993.
FIALHO, E. M. S.; MACIEL, M. C. G.; SILVA, A. C. B.; REIS, A. S.; ASSUNÇÃO, A. K. M.; FORTES, T. S.; SILVA, L. A.; GUERRA, R. N. M.; KWASNIEWSKI, F. H.; NASCIMENTO, F. R. F. Immune cells recruitment and activation by Tityus serrulatus scorpion venom. Toxicon, v. 58, n. 6–7, p. 480-485, 2011.
FINNEY, D. J. Probit analysis. Cambridge: Cambridge University Press: 333 p. 1971. FLETCHER, P. L. et al. Vesicle-associated Membrane Protein (VAMP) Cleavage by a New Metalloprotease from the Brazilian Scorpion Tityus serrulatus. The Journal of Biological
Chemistry, v. 285, n. 10, p. 7405-7416, 2010.
GAO, B. et al. Functional evolution of scorpion venom peptides with an inhibitor cystine knot fold. Bioscience Reports, v. 33, n. 3, p. e00047, 2013.
GILLET, L. C.; LEITNER, A.; AEBERSOLD, R. Mass Spectrometry Applied to Bottom-Up Proteomics: Entering the High-Throughput Era for Hypothesis Testing. Annual Review of
Analytical Chemistry, v. 9, n. 1, p. 449-472, 2016.
GIRISH, K. S.; KEMPARAJU, K. The magic glue hyaluronan and its eraser hyaluronidase: A biological overview. Life Sciences, v. 80, n. 21, p. 1921-1943, 2007.
GIRISH, K. S. et al. Isolation and characterization of hyaluronidase a “spreading factor” from Indian cobra (Naja naja) venom. Biochimie, v. 86, n. 3, p. 193-202, 2004.
GODOVAC‐ZIMMERMANN, J. et al. Perspectives in spicing up proteomics with splicing.
Proteomics, v. 5, n. 3, p. 699-709, 2005.
GORDON, D. et al. Functional Anatomy of Scorpion Toxins Affecting Sodium Channels.
Journal of Toxicology: Toxin Reviews, v. 17, n. 2, p. 131-159, 1998.
GOUDET, C.; CHI, C.-W.; TYTGAT, J. An overview of toxins and genes from the venom of the Asian scorpion Buthus martensi Karsch. Toxicon, v. 40, n. 9, p. 1239-1258, 2002.
GREEN, L. C. et al. Analysis of nitrate, nitrite, and [15N]nitrate in biological fluids.
Analytical Biochemistry, v. 126, n. 1, p. 131-138, 1982.
GROSS, J. H. Tandem Mass Spectrometry. In: GROSS, J. H. (Ed.). Mass Spectrometry: A
Textbook. ed. Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg, 2011, p. 415-478.
GUO, X. et al. Two peptides, TsAP-1 and TsAP-2, from the venom of the Brazilian yellow scorpion, Tityus serrulatus: Evaluation of their antimicrobial and anticancer activities.
Biochimie, v. 95, n. 9, p. 1784-1794, 2013.
HANCOCK, I. W. K. H. R. E. W. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC)of antimicrobial substances. NATURE PROTOCOLS, v. 3, n. 2, p. 13, 2008.
HARRIS, J. B. Phospholipases in snake venoms and their effects on nerve and muscle.
Pharmacology & Therapeutics, v. 31, n. 1, p. 79-102, 1985.
HE, Y. et al. Molecular diversity of Chaerilidae venom peptides reveals the dynamic evolution of scorpion venom components from Buthidae to non-Buthidae. Journal of
Proteomics, v. 89, p. 1-14, 2013.
HIGA, A.; DORES NORONHA, M. D.; LÓPEZ-LOZANO, J. L. Degradation of Aα and Bβ chains from bovine fibrinogen by serine proteases of the Amazonian scorpion Brotheas amazonicus. BMC Proceedings, v. 8, n. 4, p. P12, 2014.
HOFFMAN, E. D.; STROOBANT, V. Mass spectrometry: principles and applications. Jonh
Wiley & Sons, p. 502, 2007.
HOLADAY, S. K. et al. NMR Solution Structure of Butantoxin. Archives of Biochemistry
and Biophysics, v. 379, n. 1, p. 18-27, 2000.
HOOPER, N. M. Families of zinc metalloproteases. FEBS Letters, v. 354, n. 1, p. 1-6, 1994. HOUSLEY, D. M. et al. Scorpion toxin peptide action at the ion channel subunit level.
HUBER, R.; CARRELL, R. W. Implications of the three-dimensional structure of .alpha.1- antitrypsin for structure and function of serpins. Biochemistry, v. 28, n. 23, p. 8951-8966, 1989.
HUBERT, C. et al. Structure of the angiotensin I-converting enzyme gene. Two alternate promoters correspond to evolutionary steps of a duplicated gene. Journal of Biological
Chemistry, v. 266, n. 23, p. 15377-15383, 1991.
INCAMNOI, P. et al. Heteromtoxin (HmTx), a novel heterodimeric phospholipase A2 from Heterometrus laoticus scorpion venom. Toxicon, v. 61, p. 62-71, 2013.
INCEOGLU, B. et al. One scorpion, two venoms: Prevenom of <em>Parabuthus transvaalicus</em> acts as an alternative type of venom with distinct mechanism of action. Proceedings of the National Academy of Sciences, v. 100, n. 3, p. 922, 2003.
ISBISTER, G. K.; BAWASKAR, H. S. Scorpion Envenomation. New England Journal of
Medicine, v. 371, n. 5, p. 457-463, 2014.
JIMÉNEZ-VARGAS, J. M.; POSSANI, L. D.; LUNA-RAMÍREZ, K. Arthropod toxins acting on neuronal potassium channels. Neuropharmacology, v. 127, p. 139-160, 2017. JONES, J. I.; CLEMMONS, D. R. Insulin-Like Growth Factors and Their Binding Proteins: Biological Actions*. Endocrine Reviews, v. 16, n. 1, p. 3-34, 1995.
JRIDI, I. et al. Hemilipin, a novel Hemiscorpius lepturus venom heterodimeric phospholipase A2, which inhibits angiogenesis in vitro and in vivo. Toxicon, v. 105, p. 34-44, 2015.
JRIDI, I. et al. The small subunit of Hemilipin2, a new heterodimeric phospholipase A2 from Hemiscorpius lepturus scorpion venom, mediates the antiangiogenic effect of the whole protein. Toxicon, v. 126, p. 38-46, 2017.
KANOO, S.; DESHPANDE, S. B. Involvement of phospholipase A2 pathway for the Indian red scorpion venom-induced augmentation of cardiopulmonary reflexes elicited by phenyldiguanide. Neuroscience Letters, v. 440, n. 3, p. 242-245, 2008.
KARAS, M.; HILLENKAMP, F. Laser desorption ionization of proteins with molecular masses exceeding 10,000 daltons. Analytical Chemistry, v. 60, n. 20, p. 2299-2301, 1988. KAZEMI-LOMEDASHT, F. et al. The first report on transcriptome analysis of the venom gland of Iranian scorpion, Hemiscorpius lepturus. Toxicon, v. 125, p. 123-130, 2017.
KIM, J.-Y. et al. Protease Inhibitors from Plants with Antimicrobial Activity. International
Journal of Molecular Sciences, v. 10, n. 6, p. 2860-2872, 2009.
KINI, RM. Phospholipase A2-a complex multifunctional protein puzzle. . In: (Ed.). Venom
phospholipase A2 enzymes: structure, function and mechanism. ed. Chichester, England:
John Wiley and Sons, 1997, p. 1-28.
KISHORE, U.; EGGLETON, P.; REID, K. B. M. Modular organization of carbohydrate recognition domains in animal lectins. Matrix Biology, v. 15, n. 8, p. 583-592, 1997.
KLOOG, Y. et al. Sarafotoxin, a novel vasconstrictor peptide: phosphoinositide hydrolysis in rat heart and brain. Science, v. 242, n. 4876, p. 268-270, 1988.
KONDOH, G. et al. Angiotensin-converting enzyme is a GPI-anchored protein releasing factor crucial for fertilization. Nature Medicine, v. 11, p. 160, 2005.
KREIL, G. Hyaluronidases--a group of neglected enzymes. Protein Science : A Publication
of the Protein Society, v. 4, n. 9, p. 1666-1669, 1995.
KUDO, I. Foreword. Biological and Pharmaceutical Bulletin, v. 27, n. 8, p. 1157-1157, 2004.
KUDO, I.; MURAKAMI, M. Phospholipase A2 enzymes. Prostaglandins Other Lipid
Mediat, v. 68-69, p. 3-58, 2002.
LAEMMLI, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, v. 227, p. 680-685, 1970.
LIRA-DA-SILVA, R. M.; AMORIM, A. M. D.; BRAZIL, T. K. Envenenamento por Tityus