Determinação dos estágios embrionários

Descrevemos 17 estágios de desenvolvimento para I. iguana iguana a partir do primeiro dia de incubação. A coleção completa perfaz 44 estágios de desenvolvimento dos quais os 27 primeiros correspondem no desenvolvimento intra-uterino dos embriões. Tais estágios foram classificados de acordo com dados da anatomia externa dos espécimes. O primeiro estágio descrito foi o estágio 28, visto características similares dos embriões com aquelas de outras descrições relatadas na literatura.

Segue abaixo uma descrição pormenorizada das características presentes nos espécimes classificados dentro de cada estágio, bem como um resumo (Tab. 1) com os principais eventos de desenvolvimento externo em I. iguana iguana.

Estágio 28 - Os embriões apresentam brotos dos membros torácicos e pelvinos, estes

primeiros ligeiramente mais pronunciados. 36 pares de somitos que se estendem da porção caudal da cabeça até a cauda. Estão presentes quatro arcos faríngeos dos quais o primeiro representa o processo maxilar e mandibular, que se estende até a área na porção média do olho (Fig. 25A). O coração tubular em desenvolvimento é visível (Fig. 26A). As vesículas cerebrais prosencéfalo e mesencéfalo são visíveis e o rombencéfalo permanece aberto. A flexura mesencefálica é evidente sendo a flexura cranial estabelecida no nível dos arcos faríngeos. A cauda está enovelada. O placóide optico é visível e parece se desenvolver em estágios anteriores. O embrião neste estágio exibe o início da formação da vesícula do cristalino e o placoide nasal (Figs. 25, 27, 28, 30 e 31).

Estágio 29 – O aspecto geral dos embriões permanece similar ao dos espécimes do estágio anterior, porém estão presentes cinco arcos faríngeos e a fossa nasal é facilmente identificada (Fig. 28). 38 pares de somitos. Não são notadas diferenças representativas no desenvolvimento dos membros. O broto torácico apresenta uma sutil curvatura e permanece ligeiramente maior que o broto pelvino. O coroação tubular se dobra (Figs. 26B, 27, 28, 30 e 31).

Estágio 30 – Os membros estão mais pronunciados em relação ao estágio anterior e iniciam a formação do disco digital. O broto do membro torácico está direcionado caudalmente. O processo maxilar é um pouco mais conspícuo. Os arcos faríngeos são menos distintos e os sulcos entre os mesmos desapareceram visto que o segundo arco recobre os demais. As vesículas cerebrais permanecem sem grandes alterações (Fig 28). O mesencéfalo é a porção mais proeminente do encéfalo em desenvolvimento. A abertura remanescente do tubo neural não é mais visível. A flexura cervical permanece formando um ângulo agudo ao

nível do arco faríngeo mais caudal. Os olhos apresentam uma ligeira pigmentação inicial (Figs. 27, 28, 30 e 31).

Figura 25: Desenvolvimento de embriões de I. iguana iguana. Microscopia eletrônica de

varredura. A; estágio 28 (com abertura do tubo neural, cabeça da seta). B; estágio 31. C; estágio 32. D; estágio 33. Me, mesencéfalo; Di, diencéfalo; Te, telencéfalo; Co, coração; Ps, pálpebra superior. Barra 300µm.

Estágio 31 – Estão presentes flexuras nos brotos dos membros torácicos que indicam a formação do cotovelo. Os olhos são bem proeminentes e a pigmentação agora bem evidente. O desenvolvimento do coração avança e é possível observar ventrículo e átrio distintos (Figs. 25, 26C, 27, 28, 30 e 31).

Estágio 32 – Aparecem flexuras nos brotos dos membros pelvinos indicando a formação dos joelhos. Em ambos os brotos dos membros é possível distinguir três segmentos. O desenvolvimento dos membros avança sendo possível visualizar o primórdio dos dígitos, principalmente nos membros torácicos. O processo maxilar se estende rostralmente e alcança

a margem dos olhos. Pigmentação é visível na margem periférica da íris. A fenda nasolabial ainda está presente. O coração é visível através da parede anterior do corpo, sendo possível identificar ventrículo, átrio e bulbo. A protuberância anterior na parede corporal permite ainda evidenciar o fígado em crescimento. Entre os membros pelvinos é visível neste estágio a abertura do poro genital (Figs. 25, 27, 28, 30 e 31).

Figura 26: Detalhes do desenvolvimento dos embriões de I. iguana iguana. A, estágio 28. B,

estágio 29. C, estágio 31. D, estágio 33. E, estágio 35. F, estágio 34. G, estágio 30. af, arcos faríngeos (* processo maxilar); at, átrio; co, coração; pg, papila genital; ve, ventrículo. Barra: 4mm.

Figura 27: Embriões de I. iguana iguana. A; estágio 28. B; estágio 29. C; estágio 30. D;

estágio 31. E; estágio 32. F; estágio 33. G; estágio 34. H; estágio 35. I; estágio 36. Barra 5mm.

Estágio 33 – Os arcos faríngeos estão aparentemente fundidos e o processo maxilar se avança rostralmente além da margem dos olhos. As placas digitais são bem conspícuas, porém mais pronunciadas nos membros torácicos. Os brotos dos membros neste estágio estão equivalentes. É possível observar a presença do olho pineal na porção mediana da superfície craniana. O crânio presumidamente avança sua formação e o encéfalo agora é menos proeminente (Figs. 25, 26D, 27, 30 e 31).

Estágio 34 – Os membros se encontram bem desenvolvidos com a presença de dígitos. Membrana digital bem pronunciada nos membros pelvinos e aumento na pigmentação no olho. É possível pela primeira vez visualizar a presença da pálpebra superior. Uma fossa suave marca a região nasal, que ainda é pouco pronunciada. Uma grande fontanela esta presente na porção parietal do crânio. Os globos oculares correspondem metade de todo tamanho do crânio neste estágio. A protuberância do coração é ainda visível, porém não tão pronunciada quanto em estágios anteriores (Figs. 27, 30 e 31).

Figura 28: Detalhes do desenvolvimento dos embriões de I. iguana iguana. A e B; estágio

29. C; estágio 30. D; estágio 31. E; estágio 32. af, arcos faríngeos; fc, fissura coroide; fn, fosseta nasal; ma, mandíbula; pa, placóide auditivo. Barra: 2mm.

Estágio 35 – Presença de membrana interdigital no membro torácico e uma suave pigmentação no membro pelvino. A boca está fechada, porém a mandíbula ainda é ligeiramente menor que a porção maxilar (Fig. 27).

Estágio 36 – Dígitos visivelmente formados em ambos os membros com redução considerável da membrana digital. Presença da pálpebra inferior. Está presente o primórdio das garras nos artelhos. A porção superior do crânio (supostamente a porção ocupada pelo parietal) permanece ainda com desenvolvimento lento. A fontanela cranial é bem visível e ampla, por onde é possível visualizar ainda a proeminência do mesencéfalo e o olho pineal. A íris apresenta coloração escura, estando as pálpebras ainda bem abertas. A abertura da fossa auditiva está bem marcada. Mandíbula e maxila possuem o mesmo tamanho (Figs. 27, 30 e 31).

Estágio 37 – Ausência completa de membrana digital. Presença do proeminente órgão genital no poro genital. A fossa auditiva está presente na face lateral do crânio com o primórdio do tímpano. Presença de garras nos dígitos dos membros pelvinos. O tamanho corporal é visivelmente maior a partir dos 24 dias, bem como a coloração que se apresenta de forma mais conspícua e cinza. Coração posicionado na cavidade pericárdica (Fig. 29 e 32).

Estágio 38 – As pálpebras se desenvolveram de modo a fechar metade do olho. A cauda apresenta tamanho considerável em relação aos embriões de outros estágios anteriores. Externamente pela primeira vez é possível observar a presença de elementos ossificados no crânio (Fig. 24B). Primórdios de escamas estão presentes no dorso dos espécimes, na região do pescoço. A barbela na porção inferior da mandíbula está presente. Presença de garras nos dígitos dos membros torácicos. Parte do órgão genital encontra-se incluso no poro genital (Figs. 29, 30, 31 e 32E).

Estágio 39 – A aparência da parede corporal expressa robustez. Coloração e tamanho do corpo, embora evidente, exibem pouco diferença (Fig. 32C). A fossa nasal está bem formada. Na cauda estão presentes primórdios de escamas nos membros torácicos e nos dedos. Presença da membrana timpânica na cavidade da orelha. Primórdio de escamas (Figs. 29, 30 e 31).

Figura 29: Embriões de I. iguana iguana. A; estágio 37. B; estágio 38. C; estágio 39. D;

estágio 40. E; estágio 41. F; estágio 42. G; estágio 43. H; estágio 44. I, recém eclodido. Barra 1cm.

Estágio 40 – Genitais completamente inclusos no poro genital. Primórdio de escamas nos membros pelvinos e aumento considerável do tamanho corporal (Figs. 29, 30 e 31).

Estágio 41 – Nestes embriões a pigmentação corporal expressa uma coloração cinza bem marcante e primórdios de escamas estão presentes em várias regiões do corpo como cabeça, dorso e pálpebras. O tamanho corporal sofre considerável aumento o que torna tais embriões bastante diferenciados a partir deste estágio (Figs. 29, 30, 31, 32H e 32J).

Figura 30: Sequência de desenvolvimento do membro torácico em embriões de I. iguana iguana. Microscopia eletrônica de varredura do broto do membro nos estágios 28 (A), 29 (B)

e 30 (C), onde é possível notar a formação e desenvolvimento da placa digital. Barra 300 µm. Fotografias nos estágios 31 (D), 32 (E), 33 (F), 34 (G), 36 (H), 38 (I), 40 (J), 43 (K) e 44 (L). Barra: 1 mm.

Figura 31: Sequência de desenvolvimento do membro pelvino em embriões de I. iguana iguana. Microscopia eletrônica de varredura do broto do membro nos estágios 28 (A), 29 (B)

e 30 (C). Em A é possível observar a presença da crista apical (seta) e em C o primórdio dos artelhos na superfície da placa digital (cabeça da seta). Barra 300 µm. Fotografias nos estágios 31 (D), 32 (E), 33 (F), 34 (G), 36 (H), 38 (I), 41 (J), 43 (K) e 44 (L). Barra: 1 mm.

Estágio 42 – Presença marcante de escamas pigmentadas e proeminentes na porção dorsal do tronco. Coloração se intensifica e o tamanho dos embriões aumenta. Primeira visualização do dente de ovo (Figs. 29, 30, 31 e 32K).

Estágio 43 – Presença de escalas bem desenvolvidas dispersas por todo o corpo. Coloração cinza escuro marcada por faixas claras. Formação dos dentes na mandíbula e maxila (Figs. 29, 30 e 31).

Estágio 44 – Embriões com Pigmentação da pele e olhos, escamas pelo corpo, parede corporal fechada. Olhos fechados e pouco vitelo residual. Narina aberta. Aspecto adulto (Figs. 29, 30 e 31, 32L).

Figura 32: Detalhes da sequência de desenvolvimento em embriões de I. iguana iguana. A;

estágio 37. B; estágio 38. C; estágio 39. D; estágio 44. E; estágio 37. F, G e J; estágio 40. H e I; estágio 41. K; estágio 42. L; estágio 44. os, ossículos da esclera; pa, pálpebra; pg, prega genital; do, dente do ovo; na, narina externa. Barra 3mm.

Tabela 1. Relação de dias de desenvolvimento in ovo por estágio, número de embriões

analisados e características chaves de cada estágio.

Estágio Dias

N. de embriões analisados

Principais características

28 1-2 9 Brotos dos membros (torácico maior que o pelvino); processo maxilar; quatro arcos faríngeos, fossa ótica, 36 pares de somitos, coração tubular, lente do cristalino.

29 3 6 Seis arcos faríngeos; fossa nasal, 38 pares de somitos.

30 4 6 Disco digital membro torácico, internalização dos arcos faríngeos, fechamento do tubo neural.

31 5 6 Formação do cotovelo, processo nasal, pigmentação íris.

32 6-8 12 Formação do joelho, poro genital, primórdio dos dígitos.

33 9-12 16 Arcos faríngeos fundidos; processo maxillar rostralmente a margem do olho; placa digital formada, membros torácicos e pelvinos equivalentes em tamanho, olho pineal.

34 14-16 5 Pigmentação do olho; membrana digital no membro pelvino; pálpebra superior.

35 17-18 3 Membrana digital no membro torácico, boca fechada.

36 20-22 5 Dígitos formados; redução da membrana digital; pálpebra inferior, mandíbula e maxila do mesmo tamanho.

37 24-26 6 Ausência de membrana digital; órgão genital proeminente; aumento no tamanho do corpo; pigmentação do membro torácico.

38 28-34 8 Pálpebra inferior e superior ultrapassam as papilas esclerais, e se aproximam da íris. Surgimento de pigmentos na cauda, dorso e cabeça.

39 35-40 11 Narinas; garras nos artelhos; escamas na cauda, membrana timpânica; escamas nos membros torácicos; garras nos membros torácicos.

40 42-46 3 Genitais dentro do poro genital.

41 48-52 6 Intensificação da pigmentação do corpo; escamas na cabeça, pálpebras e dorso, aumento do tamanho corporal.

42 54-62 8 Escamas proeminentes e pigmentadas no dorso, dente de ovo.

43 64 2 Pigmentação escura com listras claras; formação dos dentes.

4.3 ONTOGENIA DO ESQUELETO