dSPE e IV-PCR em uma única câmara reacional

A grande vantagem da integração entre SPE e IV-PCR em uma mesma câmara proposta neste trabalho é a simplicidade. Além da facilidade e baixo custo para produzir um microchip descartável de PT, a possibilidade de realizar extração e amplificação de DNA em uma mesma câmara agrega ainda mais vantagens a técnica. Os experimentos com uma única câmara para SPE-PCR envolve a etapa de pré-tratamento da amostra (SPE) e amplificação da amostra (PCR) sem a necessidade de transferência da mesma. O sucesso da integração entre dSPE-PCR em uma única câmara se deve em grande parte ao uso de partículas magnéticas “móveis” como fase sólida. A possibilidade de se manipular as partículas de MagneSil na câmara de acordo com a necessidade da técnica é extremamentte interessante. Isto permite que as partículas sejam movimentadas durante as etapas de adsorção e eluição das partículas de DNA, aumentando a eficiência de ambos processos, e sejam imobilizadas em uma pequena região na câmara durante a PCR. Além disso, as partículas podem ser movimentadas para lavagem com isopropanol e podem ser imobilizadas para lavagem com tampão. Esta etapa de lavagem das partículas com tampão é fundamental para o sucesso da reação de amplificação, uma vez que o isopropanol inibe a reação da PCR. Mais uma vez o uso das partículas magnéticas é crucial, já que o tampão é capaz de eluir as moléculas de DNA, mas não para o caso do uso das partículas de Magnesil, em que a dessorção das moléculas de DNA é dependente do movimento das partículas. Sendo assim, com as partículas imobilizadas foi possível retirar todo o isopropanol da câmara sem eluir as moléculas de DNA, e consequentemente, sem perder amostra.

única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado na extração. Isto pode ser útil principalmen

quantidade de amostra,

simples, sem a necessidade de válvulas aos dispositivos

minutos para as duas etapas.

fragmento de 520 pb do em uma única

Figura

microchip integrado de SPE Bioanalyzer.

DNA extraído das partículas de M

Outro grande benefício da integração entre extração e amplifi

única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado na extração. Isto pode ser útil principalmen

quantidade de amostra,

Desta forma, a extração

simples, sem a necessidade de válvulas aos dispositivos

minutos para as duas etapas. A Figura 6.6

fragmento de 520 pb do em uma única

Figura 6.6 - Eletroferograma most microchip integrado de SPE Bioanalyzer.

Para garantir que o DNA DNA extraído das partículas de M

Outro grande benefício da integração entre extração e amplifi

única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado na extração. Isto pode ser útil principalmen

quantidade de amostra, como é o caso em ta forma, a extração

simples, sem a necessidade de válvulas

aos dispositivos, reduzindo as possibilidades de contaminação e minutos para as duas etapas.

A Figura 6.6 apresenta fragmento de 520 pb do

câmara em um microchip de PT

Eletroferograma most microchip integrado de SPE

Para garantir que o DNA DNA extraído das partículas de M

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Outro grande benefício da integração entre extração e amplifi

única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado na extração. Isto pode ser útil principalmen

como é o caso em ta forma, a extração e PCR foram simples, sem a necessidade de válvulas

, reduzindo as possibilidades de contaminação e minutos para as duas etapas.

apresenta o eletroferograma mostrando a amplificação do fragmento de 520 pb do λDNA extraído das partículas de M

em um microchip de PT

Eletroferograma mostrando a amplificação do fragmento de 520 pb do microchip integrado de SPE-PCR em uma mesma câmara.

Para garantir que o DNA amplificado mostrado na Figura 6.6 DNA extraído das partículas de M

Outro grande benefício da integração entre extração e amplifi

única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado na extração. Isto pode ser útil principalmen

como é o caso em análises forenses. e PCR foram

simples, sem a necessidade de válvulas, que normalmente agregam complexidade , reduzindo as possibilidades de contaminação e

o eletroferograma mostrando a amplificação do DNA extraído das partículas de M

em um microchip de PT

rando a amplificação do fragmento de 520 pb do PCR em uma mesma câmara.

amplificado mostrado na Figura 6.6 DNA extraído das partículas de MagneSil

Tempo (s)

Outro grande benefício da integração entre extração e amplifi

única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado na extração. Isto pode ser útil principalmente nos casos em que se tem pouca

análises forenses.

e PCR foram feitas em um formato extremamente , que normalmente agregam complexidade , reduzindo as possibilidades de contaminação e

o eletroferograma mostrando a amplificação do DNA extraído das partículas de M

em um microchip de PT.

rando a amplificação do fragmento de 520 pb do PCR em uma mesma câmara.

amplificado mostrado na Figura 6.6 

e não de DNA que poderia ter ficado

Tempo (s)

Outro grande benefício da integração entre extração e amplifi

única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado te nos casos em que se tem pouca análises forenses.

feitas em um formato extremamente , que normalmente agregam complexidade , reduzindo as possibilidades de contaminação e

o eletroferograma mostrando a amplificação do DNA extraído das partículas de MagneS

rando a amplificação do fragmento de 520 pb do

PCR em uma mesma câmara. A análise foi realizada no

amplificado mostrado na Figura 6.6

e não de DNA que poderia ter ficado 1500

Outro grande benefício da integração entre extração e amplificação em uma única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado te nos casos em que se tem pouca

feitas em um formato extremamente , que normalmente agregam complexidade , reduzindo as possibilidades de contaminação em um tempo

o eletroferograma mostrando a amplificação do agneSil e amplificado

rando a amplificação do fragmento de 520 pb do

A análise foi realizada no

amplificado mostrado na Figura 6.6 é proveniente do e não de DNA que poderia ter ficado

1500

cação em uma única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado te nos casos em que se tem pouca

feitas em um formato extremamente , que normalmente agregam complexidade um tempo de 50

o eletroferograma mostrando a amplificação do e amplificado

rando a amplificação do fragmento de 520 pb do λDNA no A análise foi realizada no

é proveniente do e não de DNA que poderia ter ficado cação em uma única câmara é o fato de ser usado na reação de amplificação todo DNA recuperado te nos casos em que se tem pouca

feitas em um formato extremamente , que normalmente agregam complexidade 0

o eletroferograma mostrando a amplificação do e amplificado

DNA no A análise foi realizada no

é proveniente do e não de DNA que poderia ter ficado

aderido nas paredes do câmara, fez

controle negativo foi realizado exatamente da mesma forma que foi feito o experimento de integração SPE

da partículas de magn ausência

eletroferograma da Figura 6.6

Figura

experimento de integração de SPE