Nos últimos anos, a eletroforese capilar de alta eficiência (ECAE) tem-se tornado uma técnica promissora para a separação de uma ampla variedade de amostras, devido a sua alta resolução, alta eficiência, rapidez e pequeno consumo
de amostras e solventes, quando comparada a CLAE12. Desta forma, esta técnica pode ser uma excelente alternativa para identificação e separação das SFAs podendo está ser empregada de dois modos: eletroforese capilar (EC) ou eletrocromatografia cinética capilar micelar (ECCM). A preparação das amostras é semelhante às descritas para os métodos de CLAE. Tampões fosfato ou borato são os mais comumente utilizados como modificadores eletrolíticos para a separação dos analitos no modo ECCM. No modo de EC a separação é controlada pelo ajuste
adequado do pH do tampão empregado 12.
A ordem de migração das SFAs depende da razão carga massa e é determinada primariamente pelos valores de pKa. Deste modo, a precisa otimização do pH do tampão é indispensável para uma separação adequada. Para a EECM além do pH a concentração do surfactante é crucial. Além da importância dos valores de pKa, a separação é governada pelas constantes de ligação do soluto micela.
LI et al.48 desenvolveram um método de eletroforese capilar para
determinação de sulfametoxazol e sulfadiazina. Foi utilizada uma coluna capilar de sílica fundida (60,2 cm × 75 mM, comprimento efetivo de 50 cm), a temperatura do cartucho. foi de 25 °C e a amostra foi introduzida a partir do ânodo com injeção sob pressão, e a detecção UV no comprimento de onda de 214 nm. O pH 6,0 apresentou os melhores resultados para a separação com uma voltagem de 25,7 kV para determinação dos compostos. Uma faixa linear foi observada entre as
concentrações de 0,1 a 1000 ȝg mL-1.A recuperação média de SFAs na análise de
amostras de medicamentos foram na faixa de 95,6 % a 105,0 %.
FUH e CHU49 propuseram o uso da ECAE combinado a etapa de clean-up por
EFS para a determinação de oito SFAs em amostras de carne. Com o uso de uma
solução tampão de Na3PO4 – H3PO4 (pH 6,5) aplicando uma voltagem de 25 kV se
obteve a completa separação dos analitos. Relações lineares foram observadas para concentrações de SFA de 0,5 – 5,0 ppm, com LDs variando de 5 a 10 ppb. As porcentagens de recuperação foram de 80 % a 97 %.
I. 2.2.3 Métodos microbiológicos
Para utilização de métodos microbiológicos não são necessários equipamentos caros e especializados. Porém, uma analise mais precisa requer o uso células com populações altamente homogêneas. Entretanto, métodos
microbiológicos são limitados apenas à analitos que promovem ou inibem o crescimento microbiológico. Isto obriga que outras substâncias que promovam ou inibam o crescimento não estejam presentes na amostra de teste para não afetarem
a resposta para o analito12.
GAUDIN et al19. apresentou um método microbiológico para screening de
sulfonamidas em leite. As placas usadas foram de Bacillus Stearothermophilus para sulfonamidas e beta lactâmicos, e a detectabilidade foi igual ou inferior ao limite máximo de resíduos para algumas sulfonamidas.
I.2.2.4. Métodos imunológicos
Para a detecção em 'tempo real' de sulfonamidas em matadouros, pode-se usar fluidos corporais (urina, bile e sangue) como marcadores para presença de
resíduos em tecidos animais50,51. Geralmente estes fluidos corporais podem ser
analisados diretamente, sem extração.
Os conjuntos reativos que empregam princípios imunológicos baseiam-se na competição por sítios de ligação em receptores de células bacterianas que são específicos para várias classes de antibióticos. Por se tratar de um material biológico, tais conjuntos são sensíveis às variações de ambiente e devem ser mantidos a temperatura conveniente para conservação, bem como realizar o teste em sala apropriada para esta finalidade, evitando a ocorrência de resultados falso
positivos30. Além disso, as orientações fornecidas pelo fabricante devem ser
seguidas rigorosamente, principalmente no que se refere à alíquota de leite tomada para o ensaio, ao uso adequado dos reagentes e cumprimento dos períodos de
incubação, quando necessários52.
Existem atualmente alguns métodos que oferecem alternativas práticas aos procedimentos microbiológicos, baseados em reações imunológicas e/ou
enzimáticas53-55.
ZHANG et al.53 descreveram um método empregando enzimas (ELISA) para
screening de várias sulfonamidas em diversas matrizes tais como, músculo de porco, carcaça de frango, peixe e ovos. A extração foi realizada de forma simples com uso de um tampão fosfato na proporção de 5:1 tampão/amostra. Outros métodos de extração também foram testados, sendo a faixa de recuperação encontrada entre 77,3 % a 123,7 %.O limite de detecção do método foi menor que
0,1 μg g-1 o que garante a aplicação de método em análise de alimentos para detecção de sulfonamidas.
I.2.2.5. Outros métodos
Outros métodos descritos na literatura para determinação de resíduos de
sulfonamidas empregam técnicas como: eletroanalitica56-60, absorção atômica61-63,
métodos volumétricos com medidas espectrofotométricas64 ou potenciométricas65
para determinação do ponto de equivalência, cromatografia de camada delgada
(CCD)66, procedimentos em fluxo67-69 com detecção espectrofotométrica e
fluriométrica70,71.
Dentre tais métodos DIEZ et al. 2007 descreve um procedimento para
determinação de sulfmetoxazole (SMTX) e sulfaguanidine (SGN) com
ȕ-ciclodextrina, em solução aquosa com detecção por fluorescência. As
sulfonamidas foram determinadas separadamente e em mixturas em urina humana
em concentrações inferiores a 0,5 μg mL-1 e 1,0 μg mL-1para SMTX e SGN
respectivamente.
I. 3 Métodos de Screening: considerações gerais.
Sistemas de triagem de amostras ou métodos screening são procedimentos de análises rápidos, baratos e exatos que servem de alternativa a métodos de analise tradicionais morosos e dispendiosos.
Os métodos de screening (rastreamento, reconhecimento, varredura), fornecem respostas binárias sim/não o qual indicarão se o analíto de interesse está presente em concentração abaixo ou acima de uma concentração pré-
estabelecida72.
As metodologias screening têm importantes vantagens tais como: redução de custos, rapidez, simplicidade e minimização de erros operacionais pela demora entre a amostragem e a análise. Contudo, é importante ressaltar que esse tipo de sistema de análise não substitui completamente métodos mais específicos de análise, mas sim faz uma averiguação preliminar a qual ocasionalmente requer de confirmação posterior.
As principais características dos sistemas screening que os diferenciam de métodos analíticos convencionais são:
1 Tendem a ter uma ênfase mais qualitativa do que quantitativa nas análises. 2 Envolvem pouco ou nenhum tratamento prévio de amostras.
3 Emprega metodologias rápidas.
4 A resposta binária obtida algumas vezes requer confirmação por meio de um método convencional.
5 A resposta é usada para tomar decisões imediatas.
Nem todos os sistemas screening apresentam todas as cinco características,
embora devam apresentar três ou mais72
Os objetivos principais objetivos de sistemas screening podem ser resumidos nos seguintes tópicos:
• Fornecer uma resposta rápida e confiável em relação a uma propriedade
específica de analito, objeto ou sistema, de modo a evitar o processamento completo de um grande número de amostras e, assim, obter medidas globais de substâncias tóxicas e/ou tomar decisões rápidas;
• Diminuir as operações preliminares de um processo analítico convencional.
Estas operações preliminares, normalmente são trabalhosas e são as maiores fontes de erros sistemáticos ou aleatórios, sendo o ponto fraco do processo
analítico73.Além disso, em alguns casos, oferecem perigo para o operador e para o
ambiente devido a exposição a solventes e substâncias tóxicas.
• Minimizar a necessidade do uso permanente de instrumentos com altos
custos de aquisição e manutenção. Ao invés de serem usados para avaliar todas as amostras, estes poderiam ser reservados para processar somente aquelas amostras para as quais o sistema de screening previamente fornecesse uma resposta positiva confiável.
A figura 4 ilustra o papel seletivo de um sistema screening usado para distinguir um conjunto de amostras. Na maioria dos casos um pequeno subconjunto apresenta resposta positiva e deve ser direcionado a uma analise convencional completa.
Figura 4. Classificação de um conjunto de amostras através de métodos de screening. As amostras
em vermelho contêm um analito em nível de concentração acima do valor de corte (Extraído de: VALCÁRCEL et al.72).
A resposta binária (sim/não) obtida pelo sistema, muitas vezes possui conotações quantitativas o que pode ser útil na escolha do método de analise completa a ser adotado. Entretanto, nestes casos, algumas informações quantitativas devem ser levadas em conta: o limite de detecção do procedimento utilizado; o limite imposto pelo cliente ou pela legislação em vigor; o nível de concentração de corte adotado pelo analista; as incertezas nas quantificações prévias.
Sendo o sistema screening um passo fundamental na continuidade do processo, definindo novas amostragens e posterior investigação detalhada, este deve oferecer analises rápidas e baratas com relação a analise convencional ou completa.
I.4 Análise Química por Injeção em Fluxo
A análise por injeção em fluxo (FIA do inglês: Flow Injection Analysis) é uma técnica analítica que consiste na injeção de uma amostra em um fluido carregador
que a transporta até um detector74. Este processo automatizado de análises (FIA)