Ensaio de mineralização de 14 C-propanil sob ação do fertilizante Bacsol ®

Para este ensaio, utilizou-se a mesma metodologia aplicada nos ensaios de mineralização descritos anteriormente.

O estudo da mineralização de propanil sob ação de um fertilizante organo mineral classe A em solo foi realizado em frasco biométrico (Figura 5) com o equivalente a 50 g de solo seco. Os frascos foram submetidos às mesmas condições de umidade, 60% e 100% da CMRA, descritas em ensaios anteriores.

O solo foi fortificado apenas com a concentração de 1,19 mg.mL-1 de propanil equivalente a 10 vezes a dose mínima agronômica (dose [2]), juntamente com 0,4 μCi de atividade do herbicida radiomarcado. Foram utilizadas duas repetições para cada tratamento incubados em BOD a 25 ºC.

As características e composição química do fertilizante resumem-se em: 5% nitrogênio, 42% carbono orgânico, pH 6,0, densidade 0,055g/cm, umidade 10% e capacidade de troca catiônica de 390, segundo rótulo de embalagem do produto.

Para o preparo da solução, com base na recomendação de uso de 1 kg.ha-1 para cultura de grãos aplicado no plantio, homogeneizou-se 8 gramas do fertilizante em 500 mL de água milli-Q, com repouso de seis horas. Nessa solução não foi adicionado qualquer tipo de substância ou elemento energético que pudesse alterar os dados.

Foram aplicados 4 mL dessa solução nas amostras que representavam a dose recomendada para campo [A], equivalente a 0,06 g de fertilizante e, 8 mL da solução para o dobro da dose recomendada para campo [B], equivalente a 0,12 g de fertilizante.

A coleta do 14CO2 proveniente da mineralização do propanil radiomarcado e capturado no braço lateral do frasco biométrico pela solução alcalina de KOH (0,1N) foi realizada nos intervalos de 1, 3, 5, 7, 14, 21 e 28 dias. Dos 10 mL de KOH coletados, 2 mL foram pipetados em 10 mL de solução cintiladora para solvente aquoso e contados por 10 minutos em ECL, após dois dias em repouso no escuro.

O experimento foi desmontado no 28º dia e o solo de cada frasco foi extraído com 150 mL de metanol em Soxhlet por 16 horas de acordo com metodologia descrita anteriormente. O propanil extraído na fração metanol foi quantificado por ECL.

Para fechar o balanço de radioatividade, utilizou-se o mesmo procedimento dos demais ensaios e os solos contidos nos frascos foram secos ao ar livre após extração e deles foram retiradas três amostras de 500 mg para realizar a combustão e calcular o teor de resíduo-ligado formado neste período de tempo.

5. 7 Ensaio com 14C-propanil em peixes em microcosmo

5.7.1 Teste de recuperação de 14C-propanil em peixes

Para verificar a eficiência da extração da análise, utilizou-se alevinos de carpa comum (Cyprinus carpio) e de tilápia do Nilo (Tilapia nilotica), sendo amostras de 10 g de peixes inteiros fortificadas com 1 mL de solução 10,85 g.mL-1 propanil + 0,004 μCi de atividade de 14C-propanil. Os organismos foram triturados em aparelho mixer Virtis45 por aproximadamente 5 minutos com 10 g de Na2SO4 + 30 mL de metanol grau CLAE, e em seguida, os extratos foram centrifugados por 8 minutos a 3000 rpm. Essa metodologia foi aplicada para carpa e tilápia separadamente.

Posteriormente, triplicatas de alíquotas de 1 mL do sobrenadante de cada extrato foram analisadas por espectrometria de cintilação em líquido (ECL).

5.7.2 Teste de sobrevivência e contaminação de peixes

Para o estudo da contaminação de peixes por 14C-propanil em água, foram utilizados dois aquários de vidro de 15 L de capacidade, com bombas submersas para oxigenação, contendo 40 alevinos de carpa comum (Cyprinus carpio) em um e 40 alevinos de tilápia do Nilo (Tilapia nilotica) em outro. A água utilizada no experimento foi coletada de área de rizicultura pertencente à Fazenda Experimental de Pesquisa e Produção da FCA – Botucatu, previamente avaliada por CLAE quanto à presença do herbicida.

Cada aquário foi fortificado com 1,2 mL de solução de propanil na concentração de 1,34 mg.mL-1 + 1,5 mL da solução 4 μCi.mL-1 de 14C-propanil. Os cálculos foram baseados em informações do OECD Guidelines for Testing of Chemicals 305 – Bioconcentration: Flow-through Fish Test.

Os peixes foram introduzidos no aquário logo após a fortificação da água e coletou-se cinco peixes por aquário (aproximadamente 10 g) para extração nos intervalos de tempo de 24, 48, 72, 96, 120 e 144 horas.

As extrações dos organismos seguiram a metodologia comprovada no teste de recuperação do 14_{C-propanil em peixes e,triplicatas de alíquotas de 1 mL do extrato} de cada espécie foram quantificadas por ECL.

5.7.3 Ensaio com 14C-propanil em um sistema de microcosmo

Para esse ensaio foi usado apenas um aquário de 15 L de volume, oxigenado por uma bomba submersa. Uma quantidade de 5 kg de solo proveniente de área de rizicultura foi adicionado ao aquário. Este solo foi fortificado com 50 mL de uma solução contendo 1,34 mg de propanil + 1,1 μCi de 14C-propanil, onde semeou-se o arroz pré- germinado. A semente utilizada foi fornecida pelos funcionários da Fazenda Experimental do Lageado e é a mesma plantada no arrozal da Edgárdia (cultivar Epagri 109) (Figura 7).

Após dois dias de descanso foram adicionados ao aquário, 15 L de água do lago do campo experimental, 10 alevinos de carpas comum e 10 alevinos de tilápias do Nilo. Passados 18 dias, adicionou-se mais 1 L dessa água ao aquário, para compensar o volume evaporado.

Figura 7. Representação esquemática do microcosmo com arroz e peixes.

Todos os peixes foram coletados após 30 dias e extraídos conforme a metodologia utilizada no teste de recuperação do 14C-propanil em peixes, e os extratos também foram contados em alíquotas de 1 mL por ECL. Não houve mortalidade no ensaio.

A extração de solo seguiu a mesma metodologia utilizada no teste de recuperação inicial do propanil em solo, realizada em Soxhlet por 16 h, com 50 g de solo equivalente ao peso seco retirados do microcosmo após os 30 dias do experimento. Os extratos finais foram quantificados e analisados por ECL.

Após a desmontagem do microcosmo, a extração de água também foi realizada sob a mesma metodologia utilizada no teste de recuperação inicial do propanil em água, sendo nove alíquotas de 1mL da água contadas diretamente por ECL.

5. 8 Metodologia estatística

As médias foram analisadas com comparações múltiplas entre médias a partir do teste de Tukey com nível de significância de 0,05. Essa análise foi realizada pelo software estatístico SANEST, do Instituto Agronômico de Campinas.

Os resultados foram apresentados em figuras contendo as médias, o valor do teste estatístico e as diferenças significativas deste, as quais foram indicadas por letras minúsculas para comparação dentro da mesma umidade e por letras maiúsculas para comparar as diferentes umidades. Para a interpretação das letras, deve-se proceder da seguinte maneira: as médias seguidas da mesma letra minúscula na horizontal e maiúscula na vertical não diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.

6 RESULTADOS

6.1 Testes de recuperação da extração de propanil e clomazone em solo e em