ENSAIOS FOTOQUÍMICOS

Concomitante a escrita deste documento estudos fotoquímicos dos complexos RuL^ANO e Ru3L^PNO estão sendo realizados. Os ensaios fotoquímicos foram realizados em parceria com Prof. Dr. Roberto Santana da Silva e seu grupo de pesquisa, da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto, da Universidade de São Paulo (FCFRP-USP).

2.6.1 Acompanhamento de fotolabilização de NO por espectroscopia de absorção na região do infravermelho

Para a realização deste experimento, solubilizou-se o complexo RuLANO em ACN, em seguida a solução gerada foi irradiada em 377 nm, utilizando um lazer de diodo da marca Colibri QuantumTech®, por períodos de tempo previamente estabelecidos. A incidência de luz foi realizada a uma distância de 2 cm da fenda do laser. Após a irradiação as soluções tiveram o seu solvente removido e o sólido obtido foi analisado por espectroscopia de absorção na região do infravermelho. Os espectros foram registrados em um equipamento IR Prestige 21, da Shimadzu, na faixa de 4000 a 400 cm^-1, utilizando suporte de KBr anidro prensado.

2.6.2 Acompanhamento de fotolabilização de NO por espectroscopia de absorção na região do ultravioleta-visível

Os experimentos foram realizados preparando-se soluções do complexo RuL^ANO, em ACN, na concentração de 5 x 10^-5 mol L^-1. As soluções foram irradiadas por diferentes períodos de tempo, utilizando um laser de diodo da marca Colibri QuantumTech®. A incidência de luz foi realizada a uma distância de 2 cm da fenda do laser, no comprimento de onda de 377 nm. As alterações espectroscópicas foram acompanhadas por espectroscopia na região do Ultravioleta-Visível, utilizando-se um espectrofotômetro Agilent, modelo 8453,

com varredura na região de 200 a 800 nm e cubetas de quartzo de 1,0 cm de caminho óptico.

2.6.3 Acompanhamento de fotolabilização de NO por espectroscopia de fluorescência

Nesse experimento foi utilizado o reagente diaminofluoresceína (DAF), o qual é um sensor molecular fluorescente seletivo para NO. Para a realização desse, preparou-se soluções do complexo RuL^ANO, em ACN, na concentração de 5 x 10^-4 mol L^-1. Foi adicionado na solução do complexo 5 μL de uma solução de DAF em DMSO (5 x 10^-3 mol L^-1). Foram realizadas medidas fluorimétricas, com comprimento de onda de excitação de 488 nm, das soluções controle (sem irradiar) e após irradiação em 377 nm durante períodos de tempo pré-estabelecidos.

A detecção da fluorescência foi realizada a partir de um espectrofluorímetro RF-5301PC, da Shimadzu, utilizando cubetas de quartzo com quatro faces polidas de 1,0 cm de caminho óptico e fendas ótica 5/5. A irradiação foi realizada a partir de um laser de diodo da marca Colibri QuantumTech®, com incidência de luz a uma distância de 2 cm da fenda do laser.

2.6.4 Actinometria com ferrioxalato de potássio

A análise de actinometria foi realizada com base no trabalho de Rabek [72], para determinar a intensidade luminosa emitida pelo lazer em 377 nm. Para tanto, foram preparadas as seguintes soluções:

• Solução A - Solução aquosa de ferrioxalato de potássio triidratado (K3[Fe(C2O4)3]·3H2O) 6,0 x 10^-3 mol L^-1: foi solubilizado de 0,147 g de K3[Fe(C2O4)3]·3H2O em 50,0 mL de água deionizada, sendo o sal utilizado previamente sintetizado a partir da reação de FeCl3·6H2O com K2C2O4·H2O na proporção estequiométrica 1:3, em meio aquoso;

• Solução B - Tampão ácido (pH = 1,0): foi realizado a mistura de 60,0 mL de acetato de sódio 1,0 mol L^-1 e 36,0 mL de ácido sulfúrico 1,0 mol L^-1, diluído a um volume final de 100,0 mL;

• Solução C - Solução aquosa de 1,10-fenantrolina 0,10 % m/v (5,5 x 10-3 mol L^-1): foi solubilizado 0,1 g de 1,10-fenantrolina em 80 mL de água deionizada quente e, após resfriamento, a solução foi diluída para 100,0 mL.

A condução das medidas foi realizada no escuro. Inicialmente, foram transferidos, respectivamente, 3,0 mL (V1) da solução A para a cubeta de fluorescência e 2,0 mL da mesma solução para um balão volumétrico de 10,0 mL (solução controle).

A solução na cubeta foi irradiada durante 5 minutos (t), em 377 nm. Desta solução irradiada, 2,0 mL (V2) foram transferidos para um balão volumétrico de 10,0 mL (V3). A este balão, assim como ao balão da solução controle, foram adicionados 2,5 mL da solução B e 1,0 mL da solução C. Os volumes dos balões foram avolumetrados com água deionizada. As soluções foram agitadas e deixadas no escuro por 1 hora.

Mediu-se a absorbância em 510 nm das soluções controle e irradiadas em 377 nm. Esse procedimento foi realizado em triplicata.

O ferrioxalato de potássio quando irradiado, principalmente na faixa de 253 nm a 577 nm, desencadeia uma sequência de reações redox, culminando na formação de íons Fe²⁺ e CO2 (Equações 10 e 11) [73].

Os íons Fe²⁺ formados podem ser determinados espectrofotometricamente fazendo-se uso de um sensor molecular seletivo, no caso, a 1-10 fenantrolina (phen). Em meio ácido esses reagem formando o complexo [Fe(phen)3]²⁺, de coloração vermelha (Equação 12). O sensoriamento pode ser realizado por espectrofotometria na região do visível, devido a sua alta absortividade molar () (1,11 x 104 L mol^-1 cm^-1 em 510 nm).]

O número de íons de Fe²⁺ pode ser determinado a partir da Equação 13 [74].

n_Fe2+ = número de íons de Fe2+ formandos na solução do actinômetro A510 = absorbância em 510 nm

V1 = volume da solução A irradiada (0,003 L)

(10) (11) (12) n_Fe2+ = ^{6,02 x 10} 23 . A₅₁₀ . V₁ . V₃ V₂ . l . ε ⁽¹³⁾

V2 = volume da alíquota da análise (0,002 L)

V3 = volume final no qual a alíquota V2 foi diluída (0,010 L) l = caminho ótico

ε = coeficiente de absortividade molar do complexo [Fe(phen)3]²⁺ em 510 nm (1,11 x 10⁴ L mol^-1 cm^-1)

A partir desta informação, é possível determinar a intensidade da radiação emitida pelo laser utilizando a Equação 14 [74].

n_Fe2+ = número de íons de Fe²⁺ formandos na solução irradiada _Fe2+ = rendimento quântico de formação de íons de Fe²⁺ (1,25) t = tempo de irradiação (s)

A = absorbância da solução controle no comprimento de onda da excitação (377 nm)

Através dos cálculos apresentados foi possível chegar a um valor de intensidade luminosa de 2,86 x 1015 einstein s-1 no comprimento de onda 377 nm.