ESTABILIDADE DOS EXTRATOS E PREPARO DOS HIDROGÉIS

Tabela 7 - Características sensoriais (aspecto, cor e odor) e pH dos extratos da pasta de café verde (EPCV) nos tempos zero e após 1, 7 e 15 dias, consoante as condições de armazenamento.

EPCV

T0 T1 T7 T15

Freezer (- 20°C)

Aspecto translúcido translúcido translúcido translúcido Cor amarelo claro amarelo claro amarelo claro amarelo claro

Odor característico característico característico característico

pH 5,5 5,6 5,6 5,6

Geladeira (4-8°C)

Aspecto translúcido translúcido translúcido translúcido Cor amarelo claro amarelo claro amarelo claro amarelo claro

Odor característico característico característico Característico

pH 5,5 5,6 5,6 5,6

Temperatura ambiente (23°C ± 2°C)

Aspecto translúcido translúcido translúcido translúcido Cor amarelo claro amarelo claro amarelo claro amarelo claro

Odor característico característico característico Característico

pH 5,5 5,6 5,7 6,0

Estufa (40°C)

Aspecto translúcido translúcido opaco opaco Cor amarelo claro amarelo claro amarelo escuro amarelo escuro

Odor característico característico não característ

não característico

pH 5,5 5,7 6,0 6,0

Tabela 8 - Características sensoriais (aspecto, cor e odor) e pH dos extratos da pasta de café torrado (EPCT) nos tempos zero e após 1, 7 e 15 dias, consoante as condições de armazenamento.

EPCT

T0 T1 T7 T15

Freezer (- 20°C)

Aspecto translúcido translúcido translúcido translúcido

Cor marrom marrom marrom marrom

Odor característic característi característic característic

pH 5,2 5,3 5,3 5,1

Geladeira (4-8°C)

Aspecto translúcido translúcido translúcido translúcido

Cor marrom marrom marrom marrom

Odor característic característic característic característic

pH 5,2 5,2 5,2 5,1

Temperatura ambiente (23°C ± 2°C)

Aspecto translúcido translúcido opaco opaco Cor marrom marrom marrom escuro marrom

escuro Odor característic característic característi característi

pH 5,2 5,2 5,2 4,8

Estufa (40°C)

Aspecto translúcido translúcido opaco opaco Cor marrom marrom marrom escuro marrom escur Odor característic característico não característ não caracterís

pH 5,2 4,3 4,3 4,5

Fonte: Elaboração da autora.

Os resultados dos estudos de estabilidade revelaram que os extratos sofreram alterações nos parâmetros sensoriais de cor e odor, após sete dias sob a condição de temperatura ambiente e estufa, assim como no conteúdo de fenólicos dos extratos. A condição de manutenção dos extratos em freezer mostrou-se mais adequada à manutenção das características sensoriais e conteúdo de fenólicos totais, com redução não significativa ao longo do período experimental de 15 dias. O armazenamento dos extratos sob refrigeração (4 – 8ºC) preservou as características sensoriais ao longo de todo período experimental, contudo apresentou redução estatisticamente significativa no conteúdo total de fenólicos, ainda que inferiores ao observado sob condições de temperatura ambiente ou estufa. A manutenção dos extratos sob

temperatura ambiente, promoveu alteração na cor do extrato da pasta de café torrado, após 7 dias e do conteúdo de fenólicos totais (p < 0,05) a partir do 1° dia. Considerando que todo o material amostral permaneceu protegido de luz, ao longo do período experimental, pode-se inferir que tais alterações são decorrentes essencialmente da ausência de refrigeração. O material amostral armazenado em estufa (40°C) apresentou alterações significativas de aspecto, cor, odor e compostos fenólicos totais a partir dos registros do 7° dia.

O pH dos extratos das amostras de café estudadas variou em torno de 4,3 a 6,0 e corroboram com estudos anteriores (NASCIMENTO, 2006). Por sua vez, o pH dos hidrogéis dos extratos da pasta de café variou entre 5,0 – 5,2, podendo-se ressaltar que é similar ao pH da pele humana, considerando que o manto hidro-lipídico da superfície da pele possui pH ligeiramente ácido, em torno de 4,5 – 5,8, tendo efeito antimicrobiano. O pH dos hidrogéis de ácido clorogênico, alantoína e carbopol puro, variou entre 4,0 – 4,5, sendo mais ácidos que as amostras de extratos de café. O conhecimento do pH da superfície cutânea, assim como de produtos à serem aplicados topicamente tem motivado pesquisadores, considerando que o potencial hidrogeniônico do manto ácido cutâneo é visto como um indicador funcional e um atributo importante para o equilíbrio da pele (RODRIGUES, 1995).

O conteúdo de fenólicos totais dos extratos da pasta de café apresentou redução significativa a partir do 1° dia na ausência de refrigeração, sendo a queda mais expressiva sob acondição da estufa, a 40ºC (Figuras 17 e 18).

Figura 17 - Conteúdo de compostos fenólicos totais do extrato aquoso da pasta de café verde (EPCV) nos tempos zero, e após 1, 7 e 15 dias, mantidos em temperatura ambiente (23° C ± 2°C), estufa (40°C), freezer (- 20°C) e geladeira (4-8°C). Conteúdo expresso em µg equivalente de ácido gálico por grama de massa seca. a ab b c b c b b c d

Média de extrações em triplicata ± sd. Letras distintas denotam diferenças significativas, teste de Tukey, p<0.01. Fonte: Elaboração da autora.

Figura 18 - Conteúdo de compostos fenólicos totais do extrato aquoso da pasta de café torrado (EPCT)nos tempos zero, e após 1, 7 e 15 dias, mantidos em ambiente (23°C± 2°C), estufa (40°C), freezer (- 20°C) e geladeira (4-8°C). Conteúdo expresso em µg equivalente deácido gálico por grama de massa seca.

b b c b b c d b _c a

Média de extrações em triplicata ± sd. Diferentes letras denotam diferenças significativas, teste de Tukey, p<0.01. Fonte: Elaboração da autora.

O ensaio de estabilidade indicou que a conservação dos extratos em freezer (-20°) foi adequada à manutenção do conteúdo de compostos fenólicos totais, no período experimental de 15 dias. Os demais tratamentos estudados apresentaram menor eficiência de estabilização dos metabólitos secundários nos EPCV e EPCT, indicando que se deve manter os extratos refrigerados a -20°C após seu preparo, assim como deve-se utilizar substâncias associadas aos extratos quando forem utilizados na confecção de produtos, com intuito de protejer os compostos fenólicos da degradação natural ao longo de determinado tempo.

De outra forma, os hidrogéis investigados nos tratamentos foram elaborados adicionando-se à formulação as substâncias tamponantes EDTA e aminometil propanol, comumente utilizadas no preparo de hidrogéis em farmácias de manipulação. Considerando-se que os ensaios de estabilidade indicaram que a manutenção dos extratos sob baixas temperaturas apresentou reduções menores, optou-se por manter os hidrogéis de tratamento na geladeira, ao longo do período experimental. Os hidrogéis contendo os extratos, utilizados nos tratamentos das lesões, em modelo murino, mostraram-se eficazes reduzindo a área da lesão tratada ao longo de 15 dias comvariações nos valores de pHs consideradas não relevantes do ponto de vista dos ensaios biológicos (Tabela 9). Considerando que as propriedades físico-químicas originais dos extratos devem ser mantidas, alterações nesses fatores indicam fragilidade na estabilidade, sendo necessários estudos complementares e formulações que protejam de modo eficaz a estrutura química dos compostos bioativosnos extratos. Além desses aspectos, é necessário considerar também a manutenção das característicasdo produto quanto à funcionalidade e segurança

Tabela 9 - Valores de pH dos hidrogéis das pastas de cafés verde (HPCV) e torrado (EPCT), do ácido clorogênico (HCGA), de alantoína (HÁ) e de carbopol (HC), no tempo zero (T0) e após 15 dias (T15).

HPCV HPCT HCGA HÁ HC

T 0

pH 5,2 5,0 4,3 4,0 4,5

T 15

pH 5,0 5,1 4,2 4,0 4,5

Os carbopóis são polímeros sintéticos do ácido acrílico, de alto peso molecular e caráter aniônico, que formam dispersões em meio aquoso, hidroalcoólico e com diferentes solventes orgânicos. Há diversos tipos de carbopóis, os quais são designados por um número, sendo o carbopol 940, o utilizado neste ensaio, atualmente o mais utilizado em farmácias de manipulação. Os carbopóis cuja designação é acompanhada pela letra P são de elevada pureza, com um teor residual de benzeno muito baixo sendo, por exemplo, permitindo o uso includive por via oral como aglutinante em comprimidos. Os termos carboxipolimetileno, polímero carboxivinílico e ácido poliacrílico são sinônimos dos carobopóis. O hidrogel de carbopol é amplamente utilizado como agente emulsionante, viscosificante, suspensor e gelificante, em fórmulas como soluções, suspensões, cremes, géis e pomadas, que se podem administrar por via oftálmica, retal e tópica. Como emulsionante é utilizado na elaboração de emulsões para uso tópico, quando se quer diminuir a proporção de gorduras. Como gelificantes, os carbômeros formam géis neutros transparentes, sendo esta característica dependente dos solventes e dos princípios ativos utilizados. Também é utilizado como aglutinante na formulação de comprimidos. Em formulação magistral, os géis acrílicos de carbopol costumam ser os de primeira escolha dado que, salvo as suas incompatibilidades, possuem ótimas características reológicas. O gel de carbopol é uma base extensível não gordurosa, que aumenta a absorção de princípios ativos incorporados. É uma base utilizada em agentes anti- seborreicos, hidratantes e revitalizantes, sendo termoestável, pelo que pode ser esterilizado em autoclave, sendo, por todos os motivos expostos acima, escolhido para esta pesquisa (ACOFARMA, 2015).

O estudo de estabilidade fornece indicações sobre o comportamento do produto, em determinado intervalo de tempo, frente a condições ambientais a que possa ser submetido, desde a fabricação até o término da validade. De acordo com a Federação Internacional da Sociedade de Química Cosmética (IFSCC), o teste de estabilidade é considerado um procedimento preditivo e, como em todo procedimento preditivo, os resultados não são absolutos, mas têm probabilidade de sucesso. O estudo da estabilidade de produtos fornece informações que indicam o grau de estabilidade relativa de um produto nas variadas condições e orienta o desenvolvimento de formulações, o acondicionamento adequado, o prazo de validade, o monitoramento da estabilidade sensorial, físico-química e microbiológica, produzindo informações sobre a confiabilidade e segurança de produtos. (ANVISA, 2004).