Gênero Fusarium

O isolado do gênero Fusarium foi identificado como sendo Fusarium verticillioides (Saccardo) Nirenberg, apresentando colônia de crescimento rápido e micélio aéreo branco com microconídios formados no micélio aéreo em cadeias e macroconídios em esporodóquios formados por monofiálides, além da ausência de escleródios (LESLIE; SUMMERELL, 2006).

Apesar de ocorrer mais comumente em milho (FIGUEIRA; COELHO; HIROOKA, 2003), essa espécie também é encontrada em café (FERNANDES, 2009; PFENNING; MARTINS, 2000).

76 3.2 Teste in vitro para determinação do tempo de início da germinação dos esporos fúngicos de cada espécie isoladamente

Este ensaio foi realizado com o intuito de determinar o tempo de início da germinação dos esporos de cada espécie fúngica isoladamente para depois se avaliar a ocorrência de competição entre cada espécie juntamente com Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries.

77 3.2.1 Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries

De acordo com o teste de germinação in vitro, após a inoculação dos esporos em meio de cultura BDA (Figura 1A), o fungo Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries (Figura 1), iniciou o processo de germinação à partir de 17 horas de incubação (Figura 1B), tendo seu desenvolvimento estabelecido com 3 dias de incubação (Figura 1C).

Figura 1 Teste de germinação in vitro de Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries. (A) Esporos após a inoculação. (B) Início da

germinação dos esporos após 17 horas de incubação. (C) Estrutura formada com 3 dias de incubação.

B

C

A

78 Rocha (2006), utilizando meio completo (MC) (0.001g de FeSO4, 0.5g

de KCl, 1.5g de KH2PO4, 0.5g de MgSO4·7H2O, 6g de NaNO3, 0.001g de

ZnSO4, 1.5g de caseína hidrolizada, 0.5g de extrato de levedura, 10g de glicose,

2g de peptona, 20g ágar e 1000 mL de H2O destilada), determinou o início de

germinação dos esporos de Cladosporium cladosporioides (Fresen) de Vries com apenas 8 horas de incubação, e, assim, como também no presente estudo, em seu trabalho, a estrutura do fungo se completou com 3 dias de incubação. Como o meio de cultura utilizado pelo autor é rico em nutrientes pode ter contribuído para a germinação mais rápida do Cladosporium no MC, em relação ao BDA utilizado no presente estudo.

79 3.2.2 Aspergillus ochraceus G. Wilh

Na figura 2, exibe-se o teste de germinação in vitro do fungo Aspergillus ochraceus G. Wilh em meio de cultura BDA. Depois da inoculação dos conídios (Figura 2A), o fungo apresentou desenvolvimento do tubo germinativo após 23 horas de incubação (Figura 2B) com formação completa da estrutura aos 10 dias (Figura 2C).

Souza (2010) observou início da germinação de conídios de Aspergillus ochraceus G. Wilh, após 12 horas de incubação, em meio de cultura AA (Ágar Água), metade do tempo observado no presente estudo. Como esse meio de cultura é pobre em nutrientes, pode-se atribuir esse fato ao início mais rápido da germinação dos conídios do fungo em relação ao BDA. Frigo e Azevedo (1986) afirmam que substratos pobres induzem a esporulação de fungos com maior produção de conídios.

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Figura 2 Teste de germinação in vitro de Aspergillus ochraceus G. Wilh. (A) Conídios após a inoculação. (B) Início da germinação dos conídios após 23 horas de incubação. (C) Estrutura formada aos 10 dias de incubação.

B

A

81 3.2.3 Aspergillus niger Tiegh

No fungo Aspergillus niger Tiegh (Figura 3), depois da inoculação dos conídios no meio de cultura BDA (Figura 3A), iniciou-se o processo de germinação somente após 30 horas de incubação, porém apresentando um desenvolvimento muito mais rápido que os outros fungos testados. Com 36 horas já havia desenvolvido bastante (Figura 3B), tendo sua estrutura formada também em apenas 3 dias (Figura 3C).

Souza (2010), a exemplo de Aspergillus ochraceus G. Wilh, também observou para Aspergillus niger Tiegh o início mais rápido da germinação dos conídios (após 18 horas de incubação) em relação ao presente estudo. Como também foi utilizado o meio de cultura AA em seu estudo, mais uma vez se justifica ser a composição do meio, a responsável pelo menor tempo para o início da germinação dos conídios também para essa espécie fúngica.

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Figura 3 Teste de germinação in vitro de Aspergillus niger Tiegh. (A) Conídios após a inoculação. (B) Germinação dos conídios, após 36 horas de incubação. (C) Estrutura formada após 3 dias de incubação.

A

B

83 3.2.4 Fusarium verticilioides (Saccardo) Nirenberg

O fungo Fusarium verticilioides (Saccardo) Nirenberg (Figura 4), depois da inoculação em BDA (Figura 4A), apresentou início de germinação de conídios, após 24 horas de incubação (Figura 4B) e início do desenvolvimento da sua estrutura, aos 3 dias, apresentando somente microconídios (Figura 4C). Segundo Nelson, Toussoun e Marasas (1983), essa espécie apresenta abundância de microconídios, mas os macroconídios estão presentes, mesmo que algumas vezes sejam raros. Neste estudo, não foram detectados macroconídios talvez pelo pouco período de incubação. Souza (2010) também detectou o início da germinação de conídios de Fusarium verticilioides (Saccardo) Nirenberg, após 24 horas de incubação em meio de cultura AA (Ágar Água).

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Figura 4 Teste de germinação in vitro de Fusarium verticilioides (Saccardo) Nirenberg. (A) Conídios após a inoculação. (B) Germinação dos conídios, após 24 horas de incubação. (C) Início do desenvolvimento da sua estrutura com 3 dias de incubação.

Alterações na concentração de esporos fúngicos foram observadas por Melo (2009), ao utilizar diferentes meios de cultura para o fungo Corynespora cassiicola, agente causal da mancha-alvo da soja. Assim, somente após a determinação do melhor substrato para a esporulação, o autor determinou o tempo de germinação dos esporos nesse mesmo subtrato.

A B

85 Por isso, a exemplo do trabalho desse autor, no presente estudo, as diferenças no tempo de germinação comparadas com a literatura se justificam em função da utilização de diferentes meios de cultura.

Durante a discussão dos resultados, houve grande dificuldade em encontrar trabalhos que determinassem o tempo de início da germinação de conídios das espécies fúngicas utilizadas no presente estudo, ou seja, os estudos avaliam somente a concentração de esporos por meio de períodos definidos para a leitura das análises.

86 3.3 Competição in vitro entre o gênero Cladosporium e os outros fungos

3.3.1 Competição in vitro entre Cladosporium cladosporioides (Fresen) de