4. RESULTADOS e DISCUSSÃO
4.6 Interação Fungo/Poliéster (Poliácido lático PLLA)
Com os resultados de esterificação obtidos com Thermomyces lanuginosus encapsulado em gel de alginato de cálcio, um experimento adicional foi conduzido com o fungo termofílico, com a inoculação de Thermomyces lanuginosus em meios de cultura contendo poliácido lático, como fonte de grupamentos éster. Este procedimento permitiu observar se a presença de uma grande concentração de ésteres poderia levar a uma maior produção de lipases.
Após o crescimento de Thermomyces lanuginosus em meio de cultura YpSs variante XI (fonte de carbono = Dioleato de 1,6-Hexanodiol), o mesmo teve um esfregaço de hifas inoculadas em outro meio YpSs variante XI esterilizado, contendo um disco de filme de poliácido lático previamente preparado de aproximadamente 10 cm de diâmetro e 100 µm de espessura. O filme de PLLA foi obtido pela evaporação de soluções diluídas de dicloroetano a 60 ºC, secado em dessecador à vácuo durante 48 horas e em seguida incubado no meio sugerido (Campos & Martins-Franchetti, 2005).
O poliácido lático (um polímero contendo uma altíssima densidade de grupamentos éster) foi introduzido no meio com o objetivo de funcionar como um indutor à produção de enzimas (Figura 63).
Resultados e Discussão - 128
No meio YpSs variante XI (fonte de carbono = Dioleato de 1,6-Hexanodiol) a inoculação de Thermomyces lanuginosus apresentou grande formação de biofilme, conforme ilustra a figura 64.
Figura 64. Biofilme obtido após a inoculação de Thermomyces lanuginosus em meio
YpSs variante XI (fonte de carbono = Dioleato de 1,6-Hexanodiol), contendo disco de PLLA.
Por sua vez, o disco de PLLA ficou completamente destruído após o período de incubação proposto (Figura 65).
Resultados e Discussão -129
Após a lavagem do biofilme formado com acetona e secagem do mesmo em estufa microbiológica a 50 °C, os resultados FTIR mostraram o seguinte espectro obtido em pastilhas de KBr (Figura 66).
Figura 66.FTIR de biofilme obtido após a inoculação de Thermomyces lanuginosus
em YpSs variante XI contendo disco de PLLA.
Neste espectro nota-se de maneira bastante evidente a presença de uma banda em 1.737,7 cm-1 .
Os grupamentos ésteres possuem duas bandas de absorção bastante intensas provenientes de deformações axiais de C=O e C-O. A banda de absorção de ésteres alifáticos saturados ocorre na região de 1.750 a 1.735 cm-1. Os ésteres e lactonas possuem duas bandas de absorção bastante intensas provenientes de deformações axiais de C=O e C-O.
Resultados e Discussão - 130
No caso do biofilme formado, que é uma mistura complexa e de composição variada em polímeros, água, enzimas e microrganismos, não é portanto possível a afirmação de que o material formado trata-se de um polímero natural contendo grupamentos éster, mas as evidências encontradas indicam claramente esta possibilidade.
Os resultados obtidos com o encapsulamento das hifas de Thermomyces
lanuginosus que foram incubados em meios contendo discos de poliácido lático, apenas
confirmaram uma vez mais a tendência a queda do Índice de Acidez do meio, mas não mostraram valores significativamente diferentes dos já discutidos anteriormente.
Nenhuma modificação nas características morfológicas do fungo termofílico também foi observada quando o mesmo cresce na presença de PLLA.
Entretanto, em todos os meios avaliados neste trabalho, apenas observou-se a presença de um biofilme, quando Thermomyces lanuginosus foi inoculado e incubado a 50 °C, com um polímero que apresenta repetidos grupamentos éster em sua macromolécula.
Conclusões - 131
5. CONCLUSÕES
Diante do reduzido conhecimento da imensa diversidade micológica existente e disponível no meio ambiente, este estudo permitiu evidenciar o grande potencial a ser explorado em estudos de biocatálise com microrganismos vivos, em particular fungos termofílicos.
Não foram notadas alterações nas características morfológicas do fungo quando submetido a crescimento nas fontes de carbono escolhidas, o que ratificou a grande capacidade adaptativa de Thermomyces lanuginosus. Não restaram dúvidas sobre a capacidade deste fungo termofílico quando devidamente acondicionado, em promover e catalisar algumas reações de esterificação de compostos orgânicos utilizados na indústria química em geral (resultados de índice de acidez e cromatografia).
Efetivamente também foi comprovado pelos valores de índice de Acidez obtidos, que a eficácia da lipase produzida por Thermomyces lanuginosus em reações de esterificação está diretamente ligada a presença de água no meio reacional, sendo que condições anidras provavelmente favoreceriam o deslocamento da reação no sentido desejado (esterificação), mas exigiriam também a purificação da enzima (processo oneroso) numa primeira etapa.
Houve tendência à queda do Índice de Acidez e os cromatogramas evidenciaram o aparecimento de Dioleato de 1,6-Hexanodiol, porém a reação atinge um estado de equilíbrio (hidrólise) mesmo existindo ainda hidroxilas e ácidos carboxílicos para serem esterificados. A causa foi atribuída como sendo inativação do efeito reverso da esterificação, pela presença de água (Figura 67).
Conclusões - 132
Figura 67. Efeito inibidor da água sobre a atividade catalítica (esterificação) da lipase
produzida por Thermomyces lanuginosus encapsulado.
Em diferentes meios e na presença de fosfatos, Thermomyces lanuginosus é capaz de produzir um pigmento potencialmente importante para futuras aplicações tecnológicas, como por exemplo, fontes alternativas de materiais para corar alimentos, na indústria de cosméticos, na indústria têxtil e na indústria de tintas.
As matérias-primas que foram avaliadas como eventuais fontes de carbono disponíveis ao microrganismo são comumente encontradas na indústria química como intermediários clássicos na síntese de diversos ésteres com as mais variadas aplicações. Muitos fungos termofílicos são conhecidos como sendo produtores de lipases e o potencial destas nas reações de esterificação (reação inversa à hidrólise), há muito tem sido reconhecido. Estes estudos sugerem que Thermomyces lanuginosus é capaz de utilizar matérias-primas usadas na indústria química de síntese de macromoléculas, produzir pigmentos e interagir com macromoléculas biodegradáveis (PLLA). Desse modo, concluiu-se que este fungo é altamente promissor para futuros trabalhos de biocatálise, com microrganismos vivos.
Referências Bibliográficas - 133
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