MODIFICAÇÕES QUÍMICAS DOS OLIGOSSACARÍDEOS ALDITÓIS.

3.6.1. Preparação de ββββ-D-Galp-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tetradecil-L-GalOH e 3-O-

tetradecil-ββββ-D-Galp-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tetradecil-L-GalOH.

Agarobiitol (0,3167 g ou 0, 9705 mmol), após ser cuidadosamente seco em pistola de pentóxido de fósforo, foi submetido à reação frente a 2,03 equivalentes

de Bu2SnO (0,4900 g ou 1,9683 mmol) como descrito no item 3.5.8. O meio reacional foi então evaporado sob pressão reduzida, sendo o acetal de dibutilestanileno submetido a reação de alquilação com 5,57 equivalentes de brometo de tetradecila (1,4 mL ou 5,4057 mmol) e 3,00 equivalentes de CsF (0,4423 g ou 2,9117 mmol) em DMF (~ 6mL). A reação de alquilação foi mantida por 72 h a 65 ºC. Os solventes da mistura reacional foram removidos sob pressão reduzida sendo o resíduo cromatografado em coluna de sílica tendo como fases móveis acetato de etila (eluição do composto dialquilado – 18%), seguido de uma mistura de acetato de etila:metanol:água (12:2:1) para a eluição do composto monoalquilado (38%).

3.6.2. Preparação de ββββ-D-Galp-(1→→→→4)-3,6-An-L-Galp-(1→→→→3)-ββββ-D-Galp-(1→→→→4)-3,6- An-1-O-tetradecil-L-GalOH

O tetrassacarídeo agarotetraitol (0,1630 g ou 0,2576 mmol) foi submetido à reação frente a 1,25 equivalentes de Bu2SnO (0,0800 g ou 0,3220 mmol) como descrito no item 3.5.8. O meio reacional foi então evaporado sob pressão reduzida, sendo o acetal de dibutilestanileno submetido à reação de alquilação com 5,57 equivalentes de brometo de tetradecila (0,4 mL ou 1,4348 mmol) e 3,00 equivalentes de CsF (0,1500 g ou o,7728 mmol) em DMF (~ 6mL). A reação de alquilação foi mantida por 72 h a 65ºC. Os solventes da mistura reacional foram removidos a pressão reduzida sendo o resíduo cromatografado em coluna de sílica tendo como fase móveis acetato de etila/metanol/H2O (8:2:1). O tetrassacarídeo monoalquilado foi obtido com um rendimento de 26%.

3.6.3. Preparação de 6-O-tritil-ββββ-D-Galp-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tritil-L-GalOH.

Agarobiitol (0,4353 g ou 1,3340 mmol) foi solubilizado em 2 mL de piridina sendo acrescentado cloreto de tritil (0,8182 g ou 2,9349 mmol – cloreto de trifenilmetil) solubilizado em 2 mL piridina, gota a gota, em banho de tetraclorocarbono/N2 líquido (~ -20 ºC). A mistura resultante foi levada à

temperatura de ~5 ºC por 24 h e, subseqüentemente, a temperatura ambiente e mantida sob agitação por 48 h. Após o tempo de reação, a mistura reacional foi evaporada e o resíduo resultante foi purificado através de “dry flash chromatography” em acetato de etila sendo o produto purificado obtido na forma de sólidos brancos (39% de rendimento).

3.6.4. Preparação de 3-O-tetradecil-6-O-tritil-ββββ-D-Galp-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tritil-

L-GalOH.

O composto 6-O-tritil-β-D-Galp-(1→4)-3,6-An-1-O-tritil-L-GalOH (0,2010 g ou 0,2478 mmol) foi primeiramente submetido à reação frente 1,30 equivalentes de Bu2SnO (0,0800 g ou 0,3221 mmol) como descrito no item 3.5.8. O meio reacional foi então evaporado sob pressão reduzida, sendo o acetal de dibutilestanileno submetido a reação frente a 4,37 equivalentes de brometo de tetradecila (0.3 mL ou 1,0829 mmol) e 2,66 equivalentes de CsF (0,1000 g ou 0,6591 mmol) em DMF (~ 6 mL). A mistura reacional foi então mantida a 65 ºC por 72 h seguindo-se de evaporação do meio reacional e cromatografia em sílica (hexano/acetato de etial, 3:1) para a obtenção do produto desejado (23% de rendimento).

3.6.5. Preparação de 6-O-tritil-ββββ-D-Galp 3-sulfato-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tritil-L- GalOH, sal sódico.

O composto 6-O-tritil-β-D-Galp-(1→4)-3,6-An-1-O-tritil-L-GalOH (0,1511 g ou 0,1863 mmol) foi primeiramente submetido à reação frente 1,08 equivalentes de Bu2SnO (0,0500 g ou 0,2012 mmol) como descrito no item 3.5.8. O meio reacional foi então evaporado sob pressão reduzida, sendo o acetal de dibutilestanileno submetido a reação frente a 1,92 equivalentes de Me3N.SO3 (0,0500 g ou 0,3577) em THF (~ 10 mL). A mistura reacional foi então mantida a temperatura ambiente por 15 h sob agitação. Após o tempo de reação, o solvente foi removido com o uso de vácuo e o resíduo ressuspenso em quantidade mínima de metanol (5 mL) sendo o mesmo aplicado em uma coluna de resina catiônica (Dowex 50X2-100,

Na+, 1.5x7 cm em metanol). O eluato foi concentrado e recromatografado em coluna de sílica com o uso de acetato de etila/metanol/H2O (40:2:1) para a obtenção do produto 3-O sulfatado na forma de sal sódico (78% de rendimento).

3.6.6. Preparação de 3-O-tetradecil-D-Galp-(1→→→→4)-3,6-An-L-GalOH.

O composto 3-O-tetradecil-6-O-tritil-β-D-Galp-(1→4)-3,6-An-1-O-tritil-L- GalOH (0,0193 g ou 0,0191 mmol) foi detritilado através de solubilização em solução de ácido acético 80 % em água (3 mL) sendo a mistura mantida por 1,5 h a 40 ºC. Após o tempo de reação, o meio reacional foi evaporado sob pressão reduzida sendo o resíduo cromatografado em coluna de sílica com o uso de acetato de etila/metanol/H2O (16:2:1). O composto detritilado foi obtido com rendimento de 81% após purificação.

3.6.7. Preparação de ββββ-D-Galp 3-sulfato-(1→→→→4)-3,6-An-L-GalOH, sal sódico. O composto 6-O-tritil-β-D-Galp 3-sulfato-(1→4)-3,6-An-1-O-tritil-L-GalOH, sal sódico (0,0212 g ou 0,0231 mmol) foi detritilado como descrito no item 3.6.6. Após o tempo de reação, o meio reacional foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo ressuspenso em quantidade mínima (1 mL) de metanol/H2O (3:1), sendo o mesmo aplicado em uma coluna de resina catiônica (Dowex 50X2-100, Na+, 1.5x7 cm em metanol/H2O – 3:1). O eluato foi concentrado e recromatografado em coluna de sílica com o uso de acetato de etila/metanol/H2O (6:3:1). O composto detritilado foi obtido na forma de sal sódico com rendimento de 69% após purificação.

3.6.8. Preparação de ββββ-D-Galp 3-sulfato-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tetradecil-L-GalOH, sal sódico.

O composto β-D-Galp-(1→4)-3,6-An-1-O-tetradecil-L-GalOH (0,0800 g ou 0,1530 mmol) foi primeiramente submetido à reação frente 1,10 equivalentes de

Bu2SnO (0,0419 g ou 0,1683 mmol) como descrito no item 3.5.8. O meio reacional foi então evaporado sob pressão reduzida, sendo o acetal de dibutilestanileno submetido à reação frente a 1,64 equivalentes de Me3N.SO3 (0,0350 g ou 0,2509 mmol) em THF (~ 5 mL). A mistura reacional foi então mantida a temperatura ambiente por 15 h sob agitação. Após o tempo de reação, o solvente foi removido com o uso de vácuo e o resíduo ressuspenso em quantidade mínima de metanol (2 mL) sendo o mesmo aplicado em uma coluna de resina catiônica (Dowex 50X2- 100, Na+, 1.5x7 cm em metanol). O eluato foi concentrado e recromatografado em coluna de sílica com o uso de acetato de etila/metanol/H2O (12:2:1) para a obtenção do produto 3-O sulfatado na forma de sal sódico (70% de rendimento).

3.6.9. Sulfatação de 3-O-tetradecil-ββββ-D-Galp-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tetradecil-L- GalOH.

O composto 3-O-tetradecil-β-D-Galp-(1→4)-3,6-An-1-O-tetradecil-L-GalOH (0,0618 g ou 0,0859 mmol) foi primeiramente submetido à reação frente 1,10 equivalentes de Bu2SnO (0,0235 g ou 0,0945 mmol) como descrito no item 3.5.8. O meio reacional foi então evaporado sob pressão reduzida, sendo o acetal de dibutilestanileno submetido à reação frente a 1,20 equivalentes de Me3N.SO3 (0,0144 g ou 0,1031 mmol) em THF (~ 5 mL). A mistura reacional foi então mantida a temperatura ambiente por 15 h sob agitação. Após o tempo de reação, o solvente foi removido com o uso de vácuo e o resíduo ressuspenso em quantidade mínima de metanol (2 mL) sendo o mesmo aplicado em uma coluna de resina catiônica (Dowex 50X2-100, Na+, 1.5x7 cm em metanol). O eluato foi concentrado e recromatografado em coluna de sílica com o uso de acetato de etila/metanol/H2O (24:2:1) para a obtenção de uma mistura de dois isômeros dialquilados monossulfatos que não puderam ser separados.

3.6.10. Preparação de ββββ-D-Galp 4-sulfato-(1→→→→4)-3,6-An-1-O-tetradecil-D- GalOH, sal sódico.

O oligossacarídeo naturalmente sulfatado, β-D-Galp 4-sulfato-(1→4)-3,6-An-

D-GalOH (0,1267 g ou 0,2957 mmol), após ser cuidadosamente seco em pistola de pentóxido de fósforo, foi submetido à reação frente a 1,85 equivalentes de Bu2SnO (0,1366 g ou 0,5470 mmol) como descrito no item 3.5.8. O meio reacional foi então evaporado sob pressão reduzida, sendo o acetal de dibutilestanileno submetido a reação de alquilação com 9.74 equivalentes de brometo de tetradecila (0,8 ml ou 2,8801 mmol) e 3,83 equivalentes de CsF (0,1726 g ou 1,1325 mmol) em DMF (~ 6 mL). A reação de alquilação foi mantida por 72 h a 65 ºC. Os solventes da mistura reacional foram removidos a pressão reduzida sendo o resíduo cromatografado em coluna de sílica tendo como fase móvel uma mistura de acetato de etila:metanol:água (12:2:1) para a eluição do composto monossulfatado e monoalquilado (36%).