3.5. Conclusões e Perspectivas
Primeiramente foram obtidos 24 derivados imidazolidínicos-3,5-dissubstituídos. Os compostos obtidos foram caracterizados através de técnicas espectroscópicas tendo suas estruturas confirmadas. Após a caracterização os derivados foram submetidos a análises quimiometricas, como a avaliação dos componentes principais (PCA), para a determinação dos compostos mais (dis)similares, com objetivo de submeter a menor quantidade a menor quantidade de compostos aos testes de atividade esquistossomicida.
Através da análise da PCA foram escolhidos 11 compostos, considerados os mais (dis)similares nos parâmetros escolhidos para o estudo, sendo eles o LPSF/PTS-2, LPSF/PTS-3, LPSF/PTS-4, LPSF/PTS-6, LPSF/PTS-10, LPSF/PTS-14, LPSF/PTS-18, LPSF/PTS-19, LPSF/PTS-21, LPSF/PTS- 23 e LPSF/PTS-25.
Os derivados tioxo-imidazolidínicos LPSF/PTS2, LPSF/PTS4, LPSF/PTS10, LPSF/PTS-14, LPSF/PTS-21 e LPSF/PTS-23 e LPSF/PTS25 não foram citotóxicos nas concentrações avaliadas. Os derivados tioxo-imidazolidínicos LPSF/PTS2, LPSF/PTS4, LPSF/PTS10 e LPSF/PTS23 foram os bastante ativos nos ensaios de viabilidade in vitro em vermes adultos de S. mansoni.
Os derivados LPSF/PTS6, LPSF/PTS18, LPSF/PTS19 e LPSF/PTS-21, embora não tenham causado mortalidade, foram capazes de causar alteração de motilidade, inibição de oviposição e acasalamento dos vermes.
Com relação às alterações tegumentares, foi possível observar alterações como destruição de tubérculos com perda de espinhos e formação de vesículas nos vermes machos, e, erosão do tegumento nos vermes fêmeas em vermes adultos de S. mansoni após incubação com LPSF/PTS23. Porém, o melhor derivado sintetizado neste trabalho foi o composto indolico-imidazolidinico LPSF/PTS-14. A alta taxa de mortalidade em baixas concentrações, aliadas a uma baixa citotoxicidade, alterações no acasalamento e oviposição, colocam a LPSF/PTS-14 como um promissor agente esquistossomicida.
Com os resultados da atividade biológica foi possível notar que apesar de não ser possível de se observer nenhum padrão referente à atividade esquistossomicida, um padrão na disperssão dos compostos no grafico da PCA foi observado referente aos valores de citotoxicidade.
Desejando-se verificar se o modelo de PCA obtido para os derivados 4-tioxo-imidazolidin-2-ona possui propriedades preditivas frente à citotoxicidade foram sintetizados 2 novos derivados imidazolidínicos, o LPSF/PTS-5 e LPSF/PTS-24. Contrariamente ao esperado no início do estudo, os derivados não se comportaram de acordo com o previsto pelo modelo. Tanto o LPSF/PTS-5 quanto o LPSF/PTS-24 obtiveram valores contrarios ao esperado. Concluiu-se que o modelo quimiométrico
obtido através da técnica PCA não apresenta complexidade o suficiente para prever a citotoxicidade dos compostos sintetizados, tendo em vista que as variáveis utilizadas no modelo possuem, possívelmente, uma baixa importância no fenômeno estudado.
Desejando-se obter informações mais precisas para a síntese de novos analogos e o desenvolvimento de modelos preditivos mais seguros, utilizou-se o software FLAP para a proposição dois modelos de farmacóforos dos derivados. O primeiro através dos dois melhores derivados sintetizados e identificados na etapa da atividade biológica, o LPSF/PTS-14 e o LPSF/PTS-23, juntamente com os derivados imidazolidinicos mais ativos sintetizados pelo nosso grupo durante um periodo de 20 anos. Pode-se evidenciar através das analises a existência de zonas doadoras e aceptoras de ligações de hidrogénio, assim como interações hidrofóbicas. Porém, visto que as moléculas possuem uma enorme similaridade química entre os derivados estes resultados não podem ser totalmente conclusivos na determinação do farmacóforo. Para o desenvolvimento de um modelo farmacóforo mais confiavel, faz-se necessária a identificação de compostos ativos com uma maior diversidade molecular.
O segundo modelo modelo foi realizado utilizando-se o derivado LPSF/PTS-14, e as moléculas de referência no tratamento da esquistossomose. modelo nenhum ponto de similaridade é encontrado entre as moléculas. Tal observação deve-se ao fato que apesar de todas as moléculas apresentarem uma boa ação esquistossomicida não necessáriamente apresentam o mesmo modo de ação no parasita. Sendo necessária a elucidação do modo de ação do derivado PTS-14 para a proposição de um modelo de farmacóforo.
Afim de se aumentar o espaço quimico dos derivados indolicos-imidazolidinicos, e contribuir para um maior entendimento do farmacóforo foi realizada a síntese 10 novos análogos indolicos- imidazolidinicos e indolicos-imidazolidinicos do derivado LPSF/PTS-14, através de pontos que após modificados nos levariam ao melhor entendimento da atividade a nível molecular. Em resumo, através de quatro principais modificações realizadas no derivado LPSF/PTS-14, foi concluido que: 1) A mudança do heteroátomo do anel heterocíclico central, para enxofre, ou seja, substituindo a imidazolidina por uma tiazolidina, não parece contribuir para ganho de atividade. Possívelmente o nitrogênio está encolvido na formação de ligações de hidrogênio; 2) o grupamento tionila parece desempenhar uma importante função na estrutura, tendo em vista que vários derivados sintetizados no laboratório que possuem atividade também o portam; 3) a inserção de grupos retiradores de elétrons na posição C5 do indol não aparente contribuir para ganho de atividade quando no caso de derivados imidazolidínicos; 4) a presença dos halogênios Cl e F na benzila em posição N-3 do anel imidazolidinico possui um papel ainda não evidenciado na atividade, porém essencial à atividade. Visto que a simples troca do fluoreto pelo cloreto reduz a atividade dos derivados.
Também foi avaliada a possibilidade da ocorrência de Reação de Michael como possível mecanismo de ação ou toxicidade do derivado. Para tanto, foram escolhidos dois derivados o LPSF/PTS-14,
devido à sua alta alta atividade e baixa citotoxicidade, e o LPSF/PTS-18, devido à sua alta alta citotoxicidade e baixa atividade. Apesar de realizada através da metodologia classica, com aumento de temperatura, e em meio fisiologico, em nenhuma das tentativas foi observada a formação dos produtos de Michael, e apos as etapas de purificação apenas os produtos de partida foram recuperados.Pode-se então concluir que os derivados imidazolidinicos sintetizados neste estudo, apesar de apresentarem pontos de possível ocorrencia da ligação de Michael, não produzem seus efeitos esquistossomicidas e/ou tóxicologicos reagindo com nucleofilos através deste mecanismo.
As principais perspectivas decorrentes deste trabalhos seriam:
1) A avaliação da importância da reatividade química da dupla ligação para a atividade e toxicidade dos derivados através da redução da mesma pela reação de hidrogenação catalítica. Tanto o derivado LPSF/PTS-14 quanto o LPSF/PTS-18 serão submetidos a estas reações e suas atividades esquistossomicidas e toxicidades serão avaliadas.
2) Um modelo de farmacóforo mais confiavel, através da identificação de novos compostos ativos obtidos pela modificação molecular nas sete posições susceptiveis do LPSF/PTS-14.
3) Os receptores de acetilconlina SmAACs, possiveis alvos biologicos dos compostos imidazolidinicos, devem ser avaliados para o entendimento de um possível mecanismo de ação. Caso possível, em seguida, a realização de um modelos de docking, desde que a proteina seja cristalizada. Através destas informações sera possível o desenvolvimento de moléculas mais ativas através da