PARTE TEGHNIGA - Diarrheias infantis : tentativa de sôrotherapia

O N S A G R A R E I esta parte á des- cripção dos différentes meios cul- turaes, por mim preparados em que o B. Colt encontra melhores condições de vitalidade, apresen- tando o modus-/asciendi que o Dr. Roux, o illustre discípulo de Pasteur, adopta no laboratório d'esté grande mestre. Começarei pelo principal meio de cultura o

CALDO

Para o preparar, cortam-se 500 grammas de carne em pequenos fragmentos, que se põem em maceração, durante algumas horas, n'um litro de agoa. Passado tempo, expremem-se n u m panno, deitando o liquido resultante n'um vaso; aquece-se lentamente até á ebullição, agitando constantemente o liquido para que a albumina não se colle ao fundo do vaso. No fim de 10 mi-

nutos de ebullição, filtra-se o liquido por papel molhado para deter toda a gordura que n'elle possa existir; junta-se-lhe depois, 10 grammas de peptona e 5 grammas de sal marinho. Depois de bem dissolvida a peptona, alcalinisa-se levemente o liquido pelo carbonato de soda a 10 %i o que se reconhece pelo papel vermelho de tornesol, leva-se novamente ao autoclave á temperatura de 120o durante 15 minutos, precipitan- do-se as matérias albuminóides e os phosphatos que a esta temperatura precipitam n'um meio alcalino. Filtra-se o liquido ainda quente e por ultimo, colloca-se no auctolave para esterilisar a 115o durante o mesmo tempo, deitando-se depois em tubos previamente esterilisados. Vê-se, por conseguinte, que além de ser um meio cultural muito nutritivo, é também absolutamente aseptico, o que é indispensável.

CALDO LACTOSADO COM CARBONATO DE CAL

Deita-se no caldo, precedentemente descripto, 2 % de carbonato de cal e outro tanto de lactose, seguindo-se depois o processo apresentado para o caldo peptonisado.

BATATA

Na preparação d'esté meio, segui o chamado Melhodo dos tubos do Dr. Roux. Para isso, cor- tam-se duas superficies planas parallelas, tirando as duas calotes oppostas ao grande diâmetro. Depois de ter collocado a batata sobre qualquer das duas superficies cortadas, tiram-se-lhe dois semi-cylindros, por meio d'um cortador especial;

lavam-se em agua commum, seccam-sc depois em papel e collocam-se, por ultimo, em tubos de vidro especiaes, mais largos que os tubos ordi- nários, impellindo-os até a um estrangulamento que o tubo apresenta no seu quarto inferior; os cylindros de batata são assim suspensos sem che- garem á agua, que lentamente vae escorrendo da batata, no momento da esterilisação. Os tubos tapam-se depois com algodão, e esterilisam-se no auctolave á temperatura de 120* durante um quarto d h o r a . Depois de sahirem do autoclave, conservam-se os tubos deitados, de modo que os semi-cylindros venham apoiar-se pela sua face plana, sobre a parede do tubo, isto com o fim de a batata se não deformar, o que tornava a semeadura ulterior difficil. Depois d'arrefecidos, os tubos são immediatamente tapados com um carapuço de borracha para evitar que os cylindros de batata se sequem. Este encarapuçamento deve ser feito com cuidado; o algodão e tubo elevem ser fortemente passados á lâmpada e co- bertos com os carapuços de cautchu, previamente desinfectados no sublimado fervente. Se não tomarmos todas estas precauções, poder-se- hiam desenvolver mucedinias no carapuço de algodão e os seus mycelios atravessariam o al- godão, seguindo as paredes húmidas do tubo, viriam esporular á superfície inferior e contami- nariam as culturas. Passemos em seguida á

GELATINA

Feito o caldo pelo processo já indicado, tomam-se 300 gr. e deitam-se-lhe 30 gr. de gelatina, cortada em pequenos fragmentos.

exceder a temperatura de 6o°, para dissolver bem a gelatina. Quando estiver bem dissolvida, alça- linisa-se com uma solução de bicarbonato de soda a io °/0, como foi para o caldo. Esta alcalinisa- ção favorece a precipitação dos phosphatos terrosos que turvariam o meio, se a reacção fosse acida; além d'isso, é necessário para a cultura ulterior da maior parte dos micróbios, que não vivem senão em meios alcalinos. Não se deve exagerar a alcalinisação porque aquecida n'um meio demasiadamente alcalino, a gelatina não faria -preza e seria transformada em glycocolla e outros produetos. Leva-se, em seguida, a gelatina para o autoclave, á temperatura de 100o, durante uma hora, contada a partir do momento em que o vapor sahe soprando. Depois d e s t e aquecimento, o liquido, deve, em geral, filtrar absolutamente límpido. Se assim não fôr, deixa-se arrefecer a gelatina a 5 ^ e juntam-se depois 50 grammas d'agua na qual se diluiu, ba- tendo, uma clara d'ovo; mistura-se, repartindo por agitação em toda a massa e por ultimo, aquece-se de novo, no autoclave, á temperatura de

100o, durante 1 hora. A esta temperatura, a albumina do ovo coagula, arrastando nas suas malhas, todas as impurezas contidas no meio cultural. Prepara-se o apparelho de filtração a quente, guarnecendo o funil d'um'filtro de papel. Passada uma hoia, retira-se a gelatina do autoclave, lança-se no filtro assim preparado e recebe-se em ballões, repartindo-se depois em tubos de cultura, previamente esterelisados á temperatura de 180". Para fazer a repartição, servi-me como meio mais commodo, d u m funil, termi- nado inferiormente por um tubo de cautchu, ligado, por sua vez, a uma pipeta de vidro ; uma pinça permitte interromper á vontade o escoa- mento da gelatina.

GELOSE

Depois de feito o caldo, pesamse 300 g r a m mas e verificase a sua reacção porque a gélose se não fôr aquecida n ' u m meio alcalino, seria transformada em assucar e galactose, d a n d o com o licor de Fehling a reacção caracteristica e a sua solução não seria já solidificavel pelo arrefeci m e n t o . Depois da alcalinisação, pesamse nove g r a m m a s da gélose que se cortam em pequenos fragmentos e se junctam ao caldo. Aquecese de pois lentamente a banhomaria, agitando sempre para evitar que a gélose se deposite e se carbo nise nas paredes do vaso.

Depois de completamente dissolvida, côase e deixase arrefecer o liquido resultante até á tem peratura de 5■50, juntandose, depois, uma clara d'ovo, previamente dissolvida em ço centimetros cúbicos d'agua. O vaso contendo a solução, l e vase ao autoclave, á temperatura de 120o a 125o, d u r a n t e três quartos d'hpra, a partir do momento em que o manómetro indique esta temperatura; a 120o todas as albuminas se coagulam e arras tam nas malhas do coagulo todas as substancias em suspensão e a gélose sahirá limpida. Durante o aquecimento no autoclave, preparase o appa relho de filtração a quente, empregando o papel Ghardin como o mais conveniente. O liquido que resulta deitase em matrazes ; e, se o quiz«rmos conservar em ballões, t a p a m s e estes com algo dão e cobremse com um invólucro de papel, aquecendose, em seguida, no autoclave á t e m peratura de 115o, d u r a n t e um quarto d'hora. Que rendo repartir a gélose para tubos de cultura, mantèmse na agua fervente o ballão que recebe a gélose filtrada, e q u a n d o a filtração está termi nada, deitase o liquido n ' u m funil, disposto do

mesmo modo que para a repartição da gelatina e enche-se o numero de tubos necessários. Estes são tapados depois com algodão e esterilisados durante um quarto de hora. Deixa-se arrefecer a gélose nos tubos, conservando-se uns inclinados, outros direitos, conforme se quer distribuir a substancia cultivada em estria ou por picada.

Ora, como a gélose não adhere ao vidro, mesmo no estado de solidificação, os tubos inclinados deformar-se-hiam immediatamente, se endi- reitássemos os tubos logo depois da solidifica- ção. Para evitar este inconveniente, addiciona- se á gélose uma pequena quantidade de gomma arabica que favorece perfeitamente a adherencia. Passo em seguida á descripção do modus-fa- ciendi da

GELOSE LACTOSADA COM TORNESOL Pezam-se 50 grammas de gélose, junta-sc 1 gramma de lactose e tintura de tornesol em quantidade sufficiente a dar á mistura uma côr verde amethysta. Colloca-se, em seguida, no autoclave para esterilisar. E' o processo seguido por W u r t z .

GELOSE LACTOSADA COM RUBINA ACIDA Peza-se o mesmo numero de gr. de gélose que as que empreguei na fabricação da gélose anterior e 2 grammas de lactose; aquece-se o tubo á temperatura de 80o; em seguida, deitam-se al- guns grãos de rubina acida e satura-se o liquido por meio de carbonato de soda. Sob a influen- cia da alcalinisação, ha a precipitação dos saes

terrosos e por isso filtra-se no papel-filtro ordi- nário. Recolhe-se assim uma gélose absolutamente descorada e transparente que se esterilisa á temperatura de 105o, durante 5 minutos.

Para obter este descoramento, basta deitar 2 gottas d'uma solução aquosa saturada de carbonato de soda á temperatura de 70o a 80o. A esta temperatura, a gélose descora quasi instantanea- mente ; a 50o é preciso, todavia, um certo tempo. Outro meio cultural importante é o

LEITE

Deita-se n'um ballão previamente esterilisado uma certa quantidade de leite, com reacção alca- lina ; colloca-se depois no autoclave e esterilisa-se a 115o, durante */4 d'hora. Deixa-se, em seguida, repousar, e pelo arrefecimento as partes gordas sobem á superficie. Recolhe-se, depois, o leite n'uma pipeta Chamberland esterilisada, tendo o cuidado de não apanhar a gordura. Para isso, basta mergulhar a ponta da pipeta até ao fundo do liquido e não aspirar desde o momento em que por baixo da camada gordurosa e superficial haja pouco liquido. Distribue-se, em seguida, o leite em qualquer recipiente, previamente esterilisado na estufa sêcca a 180o e por ultimo, colloca-se na estufa á temperatura de 37o. Passadas 24 a 48 horas examinam-se, não se aproveitando aquelíes cujo leite se coagulou ou se cobriu de bolores. Só então é que se podem utilisar os tubos para as culturas.

MEIO CORANTE DE NOEGGERATH

Tomei 2 c. c. d'uma solução saturada d'azul de methylena — 4 c. c. d"'uma solução saturada de violete de genciana—1 c. c. d'uma solução de verde methyla — 3 c. c. d'uma solução da chry- soïdina e 4 c. c. d'uma solução também saturada de fuchsina e finalmente 200 c. c. d'agua distil- lada. D e i x a s e repousar a mistura durante 15 dias, antes de se utilisar, tendo o cuidado, então, de o reconduzir á côr primitiva, addiccionando- lhe um pouco d'uma ou outra côr. — D'esté liquido emprega-se ordinariamente 7 a 8 gottas que se addicionam ao meio sobre que se quer semear o Ti.Coli.

MEIO DE MORPANN

Dissolve-se 1 gramma de verde-malachite em 100 grammas d'agua; junta-se, depois, bi-sul- fato de soda em solução concentrada, até desco- ração completa. A' gélose juntam-se 2 % d'esté liquido que lhe dá uma côr amarello-clara.

MEIO DE DUFLOCQ.

Junta-se á gélose uma solução saturada de Indolina até se formar um meio negro e opaco.

MEIO CORADO DE ROBIN

CALDO

Tomam-sc 5 grammas de peptona Collas — 5 centigrammas de phosphato de soda — 5 deci-

grammas de chloreto de sódio e finalmente 250 c. c. d'agua distillada. Leva-seáebullição, e junta-se 1 c. c. d u m a solução a 1 por cento d a z u l de methylena e gotta a gotta d'uma solução de potassa deci-normal até descóração completa. Deixa-se d'aquecer, juntam-se 20 grammas de lactose, filtra-se e distribue-se em tubos, tendo cada um IO c. c.

GELOSE

Pezam-se 8 grammas de gélose, 5 grammas de peptona Collas, 1 decigramma de phosphato de soda, 1 c. c. d'azul de methylena a 1 por cento, 250 c. c. d'agua e 35 c. c. d'um soluto deci- normal de potassa. Aquece-se a mistura á temperatura de 115o para dissolver a gélose. O meio deve então, mostrar-se ligeiramente corado de cinzento ; se assim não iòr, junta-se-lhe potassa, mantendo o liquido em ebullição até obter este resultado; juntam-se depois 10 grammas de lactose e distribue-se em tubos que se esterilisam a 105o e se deixam arrefecer depois de inclinados.

MEIO D ' E L S N E R

Tomam-se 500 grammas de batata ralada e deixa-se macerar durante 4 horas n u m litro d'agua, depois das quaes se côa o macerato por uma musselina—tecido de malhas largas — es- premendo. O liquido é abandonado em logar íresco, até ao dia seguinte em que se filtra por papel de filtro ordinário ; o liquido filtrado é acido. Junta-se, depois, 150 grammas de gelatina, que se funde em banho-maria, Dissolvida a

gelatina, junta-se soda, ordinariamente 10 c. c , até que a reacção se conserve ainda levemente acida, e esterilisa-se como a gelatina ordinária.

Se se quer usar o meio de Eslner, redissol- ve-se, por fusão, a banho-maria, a gelatina pre- parada, e em cada tubo deita-se 9 c. c. da gelatina e 1 c. c. da solução de iodeto de potássio a 10 °/0, previamente esterilisado. As pipetas com

que se fazem estas mensurações, sem duvida, devem ser perfeitamente esterilisadas.

BIBLIOGRAPHIA

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PROPOSIÇÕES

Anatomia — O coração não é mais do que dois troncos

vasculares, normalmente dilatados.

íPhysiologiu — A penetração do ar no vértice do pulmão

é mais fácil do que na base.

(Anatomia pathologica —Entre o CB. Coli e o D. Ty-

phico existem differenças profundas.

Therapeutica— A nova tuberculina de Kock foi, mais

uma vez, uma desillusão para o tratamento da tuberculose pulmonar.

(Medicina operatória — A radioscopia é imprescindível

na reducçáo das fracturas.

Pathologia interna — A morte na diphteria é devida, o

mais das vezes, a uma intoxicação chimica.

Pathologia geral — k doença é o resultado da pertur-

bação da nutrição cellular.

Pathologia externa — A maior parte dos symptomas

uremicos são devidos á absorpção das toxinas do ÇB. Coli. Partos e doenças das creanças — O diagnostico differen-

cial entre a gastro-enterite nas creanças e a febre typhoide infantil, só pôde ser feito pela bacteriologia.

Hyoiene — A agoa da lavagem das casas não deve ser

lançada á rua.

VISTO 1MPRIMA-SE Ricardo Jorge. T>. Lebre.

E R R A T A S

Pag;. L i n h a O n d e s e l ô L e i a - s e 8 ₉ a fluxo 0 fluxo 9 12 colorações corações *5 4 isolades isoladas 17 7 Coloração Coração 2 1 _ró tornada t o r n a d o 25 27 a e i o b í o q u e , acrobïo, quer 2 2 29 fruto frutos ? ' 35 m y s t a g m o s de , m y s t a g m o s e 34 22 e 23 t o s n a d a s r.. t o r n a d a s H 23 e 24 i n t i m a intimas. 36 8 s e g u n d o g r a u s e g u n d o 0 g r a u 37 9 a p p a r e l h o u r i n á r i o (meningites) a p p a r e l h o urinário 4 0 _'5 sobrs . ' •. sobre 43 17 e 18 virulentos *' ; '.{'OXLCOS t ó 6 _'5 M o r p a n n •■' v. ..'. ,'í\Céfrpmann

trc as linhas 12 e 13 da pag. 37 deve intercalarse o seguinte:

No documento Diarrheias infantis : tentativa de sôrotherapia (páginas 70-84)