Período de 72 horas

O período de 72 horas demonstrou resultados semelhantes para as amostras tratadas com Soro fisiológico, Hipoclorito de Sódio 5,25%, EDTA 17% e Hipoclorito de Sódio 5,25% combinado com EDTA 17%.

Foi observado um grande preenchimento celular, com células estreladas com prolongamentos evidentes (FIGURA 10).

A A

A B

Figura 10 - Fibroblastos 3T3 observados em Confocal.

Legenda: (A) Tratamento com Hipoclorito de Sódio, (B) Hipoclorito de Sódio e EDTA (C) Soro fisiológico, (D) EDTA.

As amostras tratadas com Clorexidina 2% demonstraram um aspecto mais estrelado e alongado no contato por 72 horas quando comparado a 24 horas de contato. Entretanto, o número de células foi menor quando comparado aos outros grupos. O mesmo se mostrou melhor quando o tratamento com Clorexidina 2% era seguido de tratamento com EDTA 17%. (FIGURA 11).

B

A

_D

C

Figura 11 - Fibroblastos 3T3 observados em Confocal.

Legenda: (A) Clorexidina 2% associada a EDTA 17% , (B)Tratamento com Clorexidina 2%. Coloração verde obtida com Alexa Flúor 488 Phalloidin representando região citoplasmática e coloração vermelha obtida com TO-PRO®-3 representando núcleo celular.

B

A

6 DISCUSSÃO

O tratamento de revascularização pulpar propõe a manutenção de um coágulo sanguíneo no interior do sistema de canais radiculares para estimular a adesão celular nas paredes dentinárias e a formação de uma matriz tecidual, permitindo assim reparo e regeneração tecidual (Banchs e Trope, 2004; Shah et al., 2008).

Desta forma torna-se importante que, além da capacidade antimicrobiana das substâncias químicas auxiliares utilizadas durante o tratamento endodôntico, exista uma interação favorável entre a substância e as células que participem do reparo tecidual no interior do sistema de canais radiculares.

Neste estudo, através da avaliação da superfície dentinária dos canais radiculares com Microscopia Eletrônica de Varredura, foi possível observar que a adesão tecidual inicial, após as primeiras 24 horas de contato entre células e dentina foi baixa. Essa adesão aumentou após 72 horas de contato.

A Clorexidina gel 2% demonstrou uma menor adesão celular, mesmo quando utilizada combinada ao tratamento com EDTA. Resultado semelhante foi encontrado em estudo realizado por Ring et al. em 2008, onde a adesão celular de células indiferenciadas foi prejudicada pela ação da Clorexidina 2% na forma líquida. Esta substância apresenta ação citotóxica quando em contato direto com células pulpares indiferenciadas (Ring et. Al., 2008). A manutenção desta ação pode ser relacionada à propriedade da substântividade que poderia interferir sobre a dentina e impedir a adesão celular mesmo após 72 horas de contato (White et al., 1997, Trevino et al., 2011). Entretanto, estudo publicado por Galler et al. em 2015, sugere que a utilização previa da Clorexidina 2% de forma prévia ao EDTA pode resultar em maior liberação de fatores crescimento, o que poderia aumentar as taxas de adesão celular.

Assim como ocorreu com o tratamento com Clorexidina 2%, o tratamento com Hipoclorito de Sódio apresentou baixa adesão celular para os tempos de 24h. Isso pode ser justificado devido à ação direta da solução sobre as células em cultura. Esta ação citotóxica também já foi demonstrada sobre células do ligamento periodontal e sobre células indiferenciadas (Trevino et al., 2011; Ring et al., 2018) .

Apesar destas conhecidas ações citotóxicas das soluções de Clorexidina 2% e de Hipoclorito de Sódio (em diferentes concentrações), a sua utilização é considerada segura tanto para o tratamento endodôntico convencional quanto para a técnica de revascularização

pulpar. As propriedades antimicrobianas das soluções de Clorexidina 2% e Hipoclorito de Sódio são capazes de atuar efetivamente sobre bactérias presentes no interior dos canais radiculares (Soares et al., 2013). A desinfecção do sistema de canais radiculares é um dos pilares para o sucesso da revascularização pulpar (Diogenes et al., 2016).

A literatura demonstra casos de sucesso da terapia revascularizadora, tanto para casos tratados com Clorexidina 2% (Reynolds et al., 2009; Shin et al., 2009; Soares et al., 2013) quanto para Hipoclorito de Sódio (Nosrat et al., 2011), e assim mais estudos precisam ser realizados para que se entendam o mecanismo de adesão celular em dentina.

A combinação da utilização do EDTA possibilitou uma maior adesão celular, sendo que algumas amostras chegaram a atingir 80 % de confluência após 72 horas de contato. A solução de EDTA é indicada clinicamente para a remoção do “smear layer” dentinário que é formado durante a instrumentação radicular, esta camada poderia tornar irreconhecível a superfície dentinária para as células, dificultando o processo de adesão celular na dentina (Galler et al, 2011).

O condicionamento dentinário com EDTA expõe fatores de crescimento presentes na matriz dentinária e estimula dessa forma a adesão celular (Graham et al,. 2006, Ring et al., 2008). Esse resultado se assemelha a estudos anteriores que mostraram a melhora da capacidade de adesão celular na parede dentinária tratada com EDTA e assim como para a combinação com outras substâncias químicas auxiliares (Trevino et al., 2011).

A combinação das soluções de Hipoclorito de Sódio com EDTA foi capaz de melhorar consideravelmente a capacidade de adesão celular após 3 dias de contato. Essa melhora se deve provavelmente a melhora da capacidade de adesão celular obtida pelo tratamento do EDTA (Trevino et al., 2011).

O preparo das amostras para avaliação em Microscopia Eletrônica de Varredura neste estudo buscou seguir os protocolos de instrumentação utilizados clinicamente, realizando o contato com as substâncias químicas auxiliares durante a instrumentação. Esta escolha pode ter gerado limitações metodológicas, sendo que após a instrumentação foi realizado o corte das amostras, o que poderia alterar a ação das substâncias químicas sobre a dentina. Entretanto, os resultados encontrados em avaliação Confocal, onde o contato com as substâncias estudadas foi realizado após o corte das amostras, seguiram os achados

encontrados em MEV, complementando os possíveis efeitos das substâncias estudadas sobre as células.

A avaliação em Microscopia Confocal Laser permitiu avaliar o preenchimento das amostras por células aderidas, assim como as suas características morfológicas. O preenchimento de células encontradas de forma geral foi maior do que encontrados em MEV, fato que se justifica na menor superfície amostral utilizada.

Os grupos tratados com Clorexidina 2% avaliados em Confocal, exibiram células arredondadas e isoladas. Essas células não possuíam as características naturais de Fibroblastos, sugerindo morte celular ou a sua não adesão á superfície dentinária. A característica em formato estrelado e alongado apareceu quando a avaliação foi feita após 72 horas de contato, mostrando uma possível diminuição na ação residual da Clorexidina sobre as células, entretanto, o padrão de morfologia celular não seguia o padrão encontrado para os grupos tratados com os outros grupos estudados.

O Hipoclorito de Sódio, assim como nos resultados apresentados em MEV, mostrou baixa adesão celular inicial, mas mostrou crescimento maior após 72 horas de contato, com melhores características de morfologia celular, sugerindo que sua ação citotóxica ocorre nas primeiras horas de contato.

Assim como nos resultados de Microscopia Eletrônica de Varredura, a microscopia Confocal mostrou os resultados de maior preenchimento e, morfologia celular mais adequada e adesão aos túbulos dentinários para os grupos tratados com EDTA isolado e quando combinado ao Hipoclorito de Sódio, ocorrendo uma menor adesão nas 24 horas iniciais e alta adesão quando observados em 72 horas. Esse resultado se justifica na capacidade de estímulo à adesão celular que o EDTA é capaz de promover (Trevino et al., 2011, Graham et al., 2006).

7 CONCLUSAO

As soluções de Hipoclorito de Sódio 5,25% e Clorexidina 2% afetam a capacidade de adesão celular em um período inicial de 24 horas.

O tratamento com Clorexidina 2% apresentou os resultados mais baixos de adesão celular e interferiu de forma negativa sobre a morfologia celular.

O EDTA foi capaz de melhorar a adesão celular quanto utilizado sozinho ou em combinação com Hipoclorito de Sódio 5,25% ou Clorexidina 2%.

A remoção do “smear leyer” e exposição de fatores de crescimento da dentina parecem interferir positivamente sobre a adesão e morfologia celular.

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