A quantificação da IL-1β nos homogenatos cerebrais mostrou que antes da infecção malárica, os animais das três linhagens produziram quantidade semelhante dessa citocina (p=0,336, Kruskal-Wallis), porém uma vez infectados com o Plasmodium berghei ANKA, a produção tornou-se diferente entre os grupos (p=0,030, Kruskal-Wallis). O camundongo C57BL/6 foi a linhagem que produziu a menor quantidade de IL-1β (89,4 pg/mL), sendo esse resultado oposto aos animais CBA infectados (306,5 pg/mL), que também apresentam a forma cerebral da doença
e que produziram a maior quantidade dessa citocina entre as 3 linhagens. Os camundongos BALB/c não suscetíveis à forma cerebral apresentaram produção intermediária (123,6 pg/mL) da citocina (Figura 10).
Quando os grupos infectados foram comparados aos seus grupos controle não infectados, observou-se que o padrão de produção da citocina foi diferente entre os animais que desenvolvem a forma neurológica. Enquanto, os camundongos C57BL/6 infectados diminuíram a produção dessa citocina em relação ao seu controle (C57= 338,7 pg/mL versus iC57= 89,4 pg/mL, p=0,008, Mann- Whitney), os camundongos CBA não alteraram a produção dessa citocina (p=0,690, Mann-Whitney). Nos camundongos BALB/c também não houve diferença entre os grupos infectados e não infectado (p=0,690, Mann-Whitney).
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BAL iBAL CBA iCBA C57 iC57
0 250 500 750 1000 1250 1500 p=0,008 p=0,032 In te rl eu ci n a 1 ( p g /m L )
Figura 10. Quantificação da Interleucina-1β no homogenato do cérebro e cerebelo de camundongos BALB/c, C57BL/6 e CBA, não infectados (BAL, C57 e CBA) e infectados com o
P. berghei ANKA (iBAL, iC57 e iCBA) no sexto dia da infecção. Camundongos BALB/c e CBA:
não houve diferença estatística na produção de IL-1β entre os grupos de animais infectados e não
infectados. Camundongos C57BL/6: os animais infectados apresentaram produção de IL-1β menor do
que os não infectados. Entre os animais infectados, os camundongos CBA apresentaram uma
produção maior da IL-1β do que os animais C57BL/6. Os dados estão representados em medianas,
quartis superiores e inferiores, valores mínimos e máximos. Os valores de p foram apresentados na figura. A comparação entre 2 grupos foi feita pelo teste de Mann-Whitney. Grupos com n=5.
5.5.2.
Determinação de interleucina-4 nos homogenatos dos
cérebros e cerebelos de camundongos suscetíveis (CBA e
C57BL/6) ou não (BALB/c) à malária cerebral na infecção pelo
Plasmodium berghei ANKA
O padrão de produção da IL-4 entre as diferentes linhagens de camundongos infectados ou não infectados foi diferente (p=0,005, Kruskal-Wallis). Observou-se que os camundongos CBA produziram 5,66 vezes mais IL-4 (142,3 pg/mL) do que os camundongos BALB/c (25,1 pg/mL; p=0,008, Mann-Whitney) e 1,45 vezes mais do que os camundongos C57BL/6 (98,4 pg/mL; p=0,032, Mann- Whitney). Já os camundongos BALB/c não infectados produziram 3,9 vezes menos IL-4 do que os camundongos C57BL/6 (p=0,032, Mann-Whitney). Assim, os camundongos CBA produziram a maior quantidade de IL-4, seguido pelo C57BL/6 e depois pelos camundongos BALB/c. Após a infecção pelo Plasmodium berghei esse padrão se manteve entre as linhagens (iBAL: 33,5 pg/mL, iC57: 84,8 pg/mL e iCBA: 110,1 pg/mL; p=0,032, Kruskal-Wallis). Contudo, após a infecção pelo plasmódio não houve modificação na produção dessa citocina em relação aos seus controles por nenhuma das linhagens (p>0,05, Mann-Whitney). Figura 11.
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BAL iBAL CBA iCBA C57 iC57
0 50 100 150 200 250 p=0,008 p=0,032 p=0,032 p=0,032 In te rl eu ci na 4 ( pg /m L)
Figura 11. Determinação de Interleucina-4 no homogenato do cérebro e cerebelo de camundongos BALB/c, C57BL/6 e CBA, não infectados (BAL, C57 e CBA) e infectados com o
P. berghei ANKA (iBAL, iC57 e iCBA) no sexto dia após infecção. Camundongos BALB/c, CBA e
C57BL/6: não houve diferença estatística na produção de IL-4 entre os grupos de animais infectados e não infectados. A quantidade da IL-4 variou entre as linhagens de camundongos não infectados (Kruskal-Wallis, p=0,005; Segundo Dunn: BAL<C57<CBA;) e infectados (Kruskal-Wallis, p=0,032; seguido do método de Dunn: iBAL<iCBA). Os dados estão representados em medianas, quartis superiores e inferiores, valores mínimos e máximos. Os valores de p foram apresentados na figura. Grupos com n=5.
5.5.3.
Determinação de interleucina-10 nos homogenatos dos
cérebros e cerebelos de camundongos suscetíveis (CBA e
C57BL/6) ou não (BALB/c) à malária cerebral na infecção pelo
Plasmodium berghei ANKA
O padrão de produção da IL-10 foi variável nas diferentes linhagens de camundongos antes e após a infecção. Antes da infecção, os camundongos BALB/c que são resistentes à malária cerebral produziram uma quantidade muito maior (16443 pg/mL) de IL-10 do que os camundongos suscetíveis (CBA= 7901 pg/mL e C57= 314 pg/mL; p=0,002, Kruskal-Wallis). Já quando os camundongos suscetíveis foram comparados entre si, a produção basal da citocina nos animais CBA foi 25,16 vezes maior do que nos camundongos C57BL/6 (p=0,009, Mann-Whitney). No sexto dia da infecção, houve alteração desse padrão no grupo de animais infectados (p=0,01, Kruskal-Wallis). Os camundongos C57BL/6 infectados passaram a produzir 21,79 vezes mais IL-10 (13.562 pg/mL) do que os camundongos CBA infectados (622 pg/mL; p=0,016, Mann-Whitney) e 16,58 vezes mais do que os camundongos BALB/c (818 pg/mL; p=0,009, Mann-Whitney).
Comparando os animais infectados com seus controles observamos que enquanto nos camundongos BALB/c e nos CBA a produção de IL-10 diminuiu no sexto dia de infecção nos animais infectados (p=0,008 e p=0,016, respectivamente,
64 Mann-Whitney), nos animais C57BL/6, a infecção provocou um aumento na produção desta citocina no mesmo período (p=0,008, Mann-Whitney; Figura 12).
BAL iBAL CBA iCBA C57 iC57
0 5000 10000 15000 20000 p=0,008 p=0,008 p=0,008 p=0,008 p=0,016 p=0,008 p=0,008 p=0,016 In te rl eu ci n a 10 ( p g /m L )
Figura 12. Determinação de Interleucina-10 no homogenato do cérebro e cerebelo de camundongos BALB/c, C57BL/6 e CBA, não infectados (BAL, C57 e CBA) e infectados com o
P. berghei ANKA (iBAL, iC57 e iCBA) no sexto dia após a infecção. Camundongos BALB/c, CBA
e C57BL/6: houve diferença estatística na produção de IL-10 entre os grupos de animais infectados e não infectados (Mann-Whitney, BAL>iBAL: p=0,008, CBA>iCBA :p=0,016 e C57<iC57: p=0,008). A quantidade da IL-10 variou entre as linhagens de camundongos não infectados (Kruskal-Wallis, p=0,002; seguido pelo método de Dunn: BAL>CBA>C57) e infectados (Kruskal-Wallis, p=0,011; seguido pelo método de Dunn: iBAL=iCBA<iC57). Os dados estão representados em medianas, quartis superiores e inferiores, valores mínimos e máximos. Os valores de p foram apresentados na figura. Grupos com n=5.
5.5.4.
Determinação de interleucina-12 nos homogenatos dos
cérebros e cerebelos de camundongos suscetíveis (CBA e
C57BL/6) ou não (BALB/c) à malária cerebral na infecção pelo
Plasmodium berghei ANKA
Nas diferentes linhagens, a produção da IL-12 foi semelhante entre os animais não infectados (p=0,218, Kruskal-Wallis) e entre os animais infectados com o Plasmodium berghei ANKA (p=0,184, Kruskal-Wallis). Após a infecção, não foi observada alteração na quantidade de citocina nos homogenatos do tecido cerebral, avaliada no sexto dia da infecção malárica (BAL x iBAL: p=0,218; CBA x iCBA: p=0,095 e C57 x iC57: p=0,548, Mann-Whitney; Figura 13).
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BAL iBAL CBA iCBA C57 iC57
0 500 1000 1500 2000 2500 In te rl eu ci n a 12 ( p g /m L )
Figura 13. Determinação de Interleucina-12 no homogenato do cérebro e cerebelo de camundongos BALB/c, C57BL/6 e CBA, não infectados (BAL, C57 e CBA) e infectados com o
P. berghei ANKA (iBAL, iC57 e iCBA) no sexto dia da infecção. Não houve diferença estatística entre os grupos não infectados e infectados (Mann-Whitney e Kruskal-Wallis, p>0,05). Os dados estão representados em medianas, quartis superiores e inferiores, valores mínimos e máximos. Grupos com n=5.
5.5.5.
Determinação de interleucina-17 nos homogenatos dos
cérebros e cerebelos de camundongos suscetíveis (CBA e
C57BL/6) ou não (BALB/c) à malária cerebral na infecção pelo
Plasmodium berghei ANKA
A mediana da produção basal da IL-17 nos homogenatos do tecido cerebral dos camundongos C57BL/6 não infectados foi de 212 pg/mL, semelhante ao dos camundongos BALB/c (203 pg/mL; p=0,548, Mann-Whitney), enquanto a mediana da IL-17 presente no cérebro dos camundongos CBA foi de 334 pg/mL, significantemente maior do que os camundongos C57BL/6 (p=0,008, Mann-Whitney) e do que os camundongos BALB/c (p=0,008, Mann-Whitney). Contudo, quando os animais foram infectados com o Plasmodium berghei ANKA, não houve diferença estatística entre os grupos (p=0,184, Kruskal-Wallis; Figura 14).
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BAL iBAL CBA iCBA C57 iC57
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 p=0,008 p=0,008 In te rl eu ci n a 17 ( p g /m L )
Figura 14. Determinação de Interleucina-17 no homogenato do cérebro e cerebelo de camundongos BALB/c, C57BL/6 e CBA, não infectados (BAL, C57 e CBA) e infectados com o
P. berghei ANKA (iBAL, iC57 e iCBA) no sexto dia após infecção. Não houve diferença estatística na quantidade de IL-17 entre os grupos não infectados e infectados (Mann-Whitney, BAL x iBAL: p=0,690, CBA x iCBA: p=0,095 e C57 x iC57: p=1,000.). A produção basal de IL-17 foi maior pelos camundongos CBA (Kruskal-Wallis, p=0,008; seguido pelo método de Dunn para comparação entre os grupos: BAL=C57<CBA). Os dados estão representados em medianas, quartis superiores e inferiores, valores mínimos e máximos. Os valores de p foram apresentados na figura. Grupos com n=5.