Preparo dos extratos

As diferentes partes das plantas (folhas e caules) foram separadas e secas em estufa ventilada, a 40 ºC. Após secagem do material vegetal, foi realizada a moagem em moinho de facas para pulverização do material sendo então acondicionados, os pós, em frascos de vidro.

O pó dos diferentes órgãos da planta foi submetido à extração exaustiva, percolação a frio, com etanol 92,8° INPM. Os extratos etanólicos obtidos foram concentrados por destilação do solvente em evaporador rotatório sob pressão reduzida a 45 ºC (BRANDÃO et al., 2017). Para completa remoção do solvente os extratos concentrados foram transferidos para frascos previamente pesados e secos em estufa, com temperatura controlada, sendo então pesados os extratos de caules e folhas secos das espécies de Jacaranda para cálculo do rendimento. O rendimento está apresentado na Tabela 5 em Resultados (pág. 56).

5.2.3 Prospecção fitoquímica

A cromatografia em camada delgada (CCD) é uma técnica muito eficaz para a separação de constituintes químicos de um extrato e para sua identificação. A CCD é uma

importante ferramenta analítica na separação, identificação e estimativa de diferentes classes de metabólitos secundários. Nesta técnica, utilizando-se a sílica gel, os diferentes componentes são separados pela migração diferencial do soluto entre duas fases sendo uma fase estacionária e uma fase móvel. O princípio da separação é a adsorção e a fase estacionária atua como um adsorvente (WAGNER; BLADT, 1996).

Realizou-se uma prospecção fitoquímica dos extratos das diferentes espécies de

Jacaranda e suas partes para comparação entre elas através de cromatografia em camada

delgada (CCD), sendo utilizadas placas analíticas (10 x 10 cm) manufaturadas com sílica gel, Kieselgel 60 G (Merck) como fase estacionária, preparadas com 0,5 mm de espessura sendo realizada no Laboratório de Química Medicinal e Bioensaios da Escola de Farmácia na Universidade Federal de Ouro Preto.

5.2.3.1 Detecção de geninas flavônicas Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10) Fase eluente: clorofórmio - acetato de etila (60:40)

Revelação: observar a placa à luz UV365 e UV254, após revelação com NP/PEG e aquecimento a 100 ºC, por 5 min.

Geninas flavônicas: bandas de cor amarela (visível) e fluorescências amarelo- esverdeadas (UV365 e UV254).

Amostras de referência: acacetina e quercetina

5.2.3.2 Detecção de heterosídeos flavônicos Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10)

Fase eluente: acetato de etila – ácido fórmico – ácido acético – água (100:11:11:27) Revelação: observar a placa à luz UV365 e UV254, após revelação com NP/PEG e aquecimento a 100 ºC, por 5 min.

Flavonoides: banda de cor amarela (visível) e fluorescências amarelo-esverdeadas (UV365 e UV254).

5.2.3.3 Detecção de geninas antraquinônicas e naftoquinônicas Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10) Fase eluente: tolueno – acetona – clorofórmio (40:5:35)

Revelação: observar a placa à luz UV365 e UV254, após revelação com hidróxido de potássio a 5%, em metanol, e aquecimento a 100 ºC, por 5 min.

Antraquinonas e naftoquinonas: bandas de cor laranja a vermelho (vis) e fluorescências de coloração do alaranjado ao vermelho (UV365 e UV254).

Antronas e antranóis: bandas amarelas (visível) e fluorescências de coloração do alaranjado (UV365 e UV254).

Amostras de referência: 1,8-di-hidróxi-antraquinona e lapachol.

5.2.3.4 Detecção de heterosídeos antracênicos Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10) Fase eluente: acetato de etila – metanol – água (81:11:8)

Revelação: observar a placa à luz UV365 e UV254, após revelação com hidróxido de potássio a 5%, em metanol, e aquecimento a 100 ºC, por 5 min.

Antraquinonas: bandas de coloração laranja ao vermelho (visível) e fluorescências laranja ao vermelho (UV365 e UV254).

Antronas, antranóis: bandas amarelas (visível) e fluorescências de coloração do alaranjado ao vermelho (UV365 e UV254).

Amostra de referência: aloína.

5.2.3.5 Detecção de triterpenos e esteroides Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10) Fase eluente: hexano – acetato de etila (40:20)

Revelação: Uma placa revelada com reagente de Liebermann-Burchard; observar a placa, imediatamente, à luz visível, ou após aquecimento a 100 ºC, por 10 min e outra placa revelada com Anisaldeído Sulfúrico.

Triterpenos e esteroides: bandas marrons ou acinzentadas (visível) e fluorescências do alaranjado ao vermelho (UV365 e UV254).

Amostras de referência: ácido oleanóico (triterpeno) e -sitosterol (esteroide).

5.2.3.6 Detecção de cumarinas Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10)

Fase eluente: tolueno – éter saturado com 5 gotas de ácido acético (80:20)

Revelação: observar a placa à luz UV366 e UV254, após revelação com hidróxido de potássio a 5%, em metanol, e aquecimento a 100 ºC, por 5 min.

Cumarinas: bandas de cor verde azulada sob UV365 e UV254; coloração intensificada após tratamento com hidróxido de potássio; a cumarina não substituída apresenta fluorescência amarelo-esverdeada apenas após o tratamento com hidróxido de potássio.

Amostras de referência: cumarina e escopoletina.

5.2.3.7 Detecção de saponinas Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10)

Fase eluente: clorofórmio – ácido acético glacial - metanol – água (15:8:3:2)

Revelação: observar a placa à luz visível após revelação com anisaldeído sulfúrico e aquecimento a 100 ºC, por 5 min.

Saponinas: bandas de coloração azul ou azul-violeta e zonas amarelas (visível). Amostra de referência: digitonina.

5.2.3.8 Detecção de heterosídeos cardiotônicos Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10) Fase eluente: acetato de etila – metanol – água (81:11:8)

Revelação: observar a placa a luz visível após revelação com o reativo de Kedde (preparo vide apêndice A).

Cardenolídeos: apresentam imediatamente, bandas de coloração rosa ou azul-violácea (visível).

Amostras de referência: digitoxina e lanatosídeo C.

5.2.3.9 Detecção de alcaloides Sistema cromatográfico

Fase estacionária: sílica gel 60 G, sobre placa de vidro (10 x 10)

Fase eluente: acetato de etila – ácido fórmico – ácido acético - água – etilmetilcetona (50:7:3:10:30)

Revelação: observar a placa após revelação com o reagente de Dragendorff (visível). Alcaloides: bandas de cor marrom ou alaranjada (visível).

Amostras de referência: atropina e estricnina.

Observação: Os resultados das CCD´s estão apresentados em Resultados (pág. 54 a 62).