Procedimento experimental

Para m elhor com preensão e aplicação do protocolo, o m esm o foi dividido em três etapas: 1) período pré- hem orrágico; 2) período hem orrágico; 3) período pós- hem orrágico.

4.4.1 Período pré-hemorrágico

Foram incluídos no experim ento apenas os anim ais hígidos, com livre acesso a água e alim entos sólidos até o m om ento do seu início.

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Todos os anim ais foram pesados ( kg) e receberam indução anestésica que consistiu de t iopental sódico na dose de 25 m g/ kg na veia m arginal da orelha.

Figura 2 - Coelho posicionado para punção da veia m arginal da orelha.

Após a adm inist ração da m edicação, os anim ais foram fixados à goteira de Claude Bernard e foi iniciada a m anutenção anestésica com isoflurano sob m áscara na concentração de 3,0% a 3,5% .

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Na sequência, foi realizada tricotom ia do pescoço e abdom e, traqueotom ia e intubação com sonda endotraqueal que m elhor se adaptou a traqueia do anim al, e continuidade da anestesia inalatória com isoflurano na concentração inspirada de 1,5% a 3% , em O2 a100% .

Figura 4 – Traqueotom ia.

O regim e vent ilatório ( Ventilador Datex Ohm eda m od. 7900) foi com pressão controlada obj etivando- se volum e corrente de 8 m L/ kg e frequência ventilatória aj ustada para um ETCO2 ( Datex Engstron AS3) de 40 m m Hg.

Para a m onitorização das variáveis hem odinâm icas foram realizadas as dissecções e cateterism os da veia j ugular esquerda com cateter n° 20 G para m onitoração da pressão venosa central ( PVC) ( Datex Engstron AS3); da artéria fem oral direita com cateter n° 20 G para m onitoração da pressão arterial m édia ( PAM)( Datex Engstron AS3) .

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Figura 5 - Dissecção vascular.

Para as coletas de sangue para dosagens, realização da hem orragia e reposição volêm ica foram realizadas as seguintes dissecções e cateterism os: da veia j ugular direita com cateter n° 20 G para realização da hidratação ( solução fisiológica 3,0 m L/ kg/ h) e da reposição volêm ica; da artéria carót ida esquerda com cateter n° 20 G para realização da hem orragia e coletas de sangue para dosagem do hem atócrito, do Neutrophil Gelat inase Associated Lipocalin ( NGAL) , do lactato plasm ático e da creatina quinase fração MB ( CPKMB) . Todos os cateteres foram previam ente heparinizados.

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Figura 6 - Cat et erização da veia j ugular direit a, da art éria carót ida esquerda e t raqueot om ia.

Foi realizada cistostom ia com sonda de nelaton núm ero 12 para o controle da diurese.

A m onitorização constou de registro a cada 5 m inutos ou m enos ( 2 em 2 m inutos durante a fase de reposição volêm ica) da pressão arterial m édia, pressão venosa central, diurese e hem atócrito. As variáveis NGAL, lactato plasm át ico e CPKMB foram colhidas nos m om entos M3 ( basal) e M26 ( final) .

4.4.2 Período hemorrágico

Todos os anim ais foram subm etidos à hem orragia, por m eio de aspiração do sangue da artéria carót ida esquerda. O volum e retirado foi de 25% do volum e total de sangue calculado para cada anim al, considerando- se 60 m L de sangue/ kg de peso vivo(59)_{. A velocidade de ret irada do sangue} foi de 5 m L/ m inuto. Durante todo o período de hem orragia foram colhidos

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os hem atócritos em intervalos de 5 m inut os, perfazendo um total de duas dosagens ( 10 m inutos) .

Figura 7 - Anim ais subm etidos à hem orragia de 25% da volem ia, considerada com o 60 m L de sangue/ kg de peso vivo, na velocidade de 5 m L/ m inut o.

4.4.3 Período pós-hemorrágico

Após a hem orragia houve um período de observação, onde foram realizadas as coletas de sangue para dosagem do hem atócrit o a cada 5 m inutos, num total de três dosagens ( 15 m inutos) , sem adm inistração de nenhum fárm aco, m antendo apenas a hidratação proposta com solução fisiológica no volum e de 3 m L/ kg/ h.

Depois desse período de observação, foi continuada a infusão de solução fisiológica de m anutenção nos grupos SH, CR e FI . Esta solução de m anutenção da hidratação foi associada às catecolam inas nos grupos NA ( noradrenalina 1,6 ug/ kg/ m in) , DB ( dobutam ina 10 µg/ kg/ m inuto) e NADB ( noradrenalina + dobutam ina nas m esm as doses) , diluídas conform e abaixo:

Dobutam ina ( DB) – foi diluído 1 mL (12.500 mcg) da solução 20 m L/ 250m g em 61,5 m L de solução fisiológica, tendo portanto um volum e final de 62,5 m L da solução a ser infundida.

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Noradrenalina ( NA) – foi diluído 1 mL (2.000 mcg) da solução noradrenalina 4 m L/ 8m g em 61,5 m L de solução fisiológica tendo um volum e final de 62,5 m L da solução a ser infundida.

Noradrenalina + Dobutam ina ( NA + DB – foi diluído 1 mL (12.500 m cg) de dobutam ina m ais 1 m L ( 2.000 m cg) de noradrenalina em 60,5 m L de solução fisiológica tendo tam bém volum e final de 62,5 m L da solução a ser infundida.

Os volum es de infusão foram baseados no peso do anim al e no volum e de hidratação de 3 m L/ kg/ h segundo a tabela 3.

Tabela 3 - Peso do anim al e volum e de hidrat ação

Peso do animal (kg) 3 mL/kg/h 1,0 3,0 1,5 4,5 2,0 6,0 2,5 7,5 3,0 9,0 3,5 10,5 4,0 12,0 4,5 13,5 5,0 15,0

A reposição volêm ica de todos os grupos com eçou 10 m inutos após o início da adm inistração de catecolam inas. No grupo SH não houve reposição da volem ia. Som ente foi m antida a hidratação com solução fisiológica a 0,9% . No grupo CR, a reposição foi feita com o sangue retirado do próprio anim al, m ant ido volum e idênt ico ao retirado. Nos grupos FI , NA, DB e NADB, a reposição foi realizada com solução fisiológica a 0,9% no volum e correspondente a 3 vezes o volum e de sangue retirado. A fase de reposição foi de 20 m inutos em todos os grupos, e, após o seu term ino, foi m ant ida a adm inistração de solução fisiológica de m anutenção ( 3 m L/ kg/ h) em todos os grupos. Nos grupos NA, DB e NADB foram m ant idas as soluções de m anutenção associadas as suas respectivas catecolam inas, por um período de 90 m inutos até o term ino do experim ento. Nesta etapa, foi realizada a eutanásia dos anim ais com o aprofundam ento da anestesia inalatória associado à adm inistração de altas doses ( 100 m g/ kg) de t iopental sódico

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endovenoso. I m ediatam ente após, foram colhidas am ostras de tecido pulm onar interessando o lobo inferior direito e o rim esquerdo para análise anatom opatológica com o obj etivo de verificar o grau de edem a pulm onar(60) _{e de lesão renal. Ainda, foi colhido o lobo pulm onar m édio} direito para verificar a relação entre o peso seco e o peso úm ido, tam bém , com o intuito de verificar a form ação de edem a(60).