5. RESULTADOS E DISCUSSÃO
5.2. Resultado da agitação do meio lipolítico com petróleo / biodiesel e micro-organismos
Para verificar o nível de atividade ocorrido em cada erlenmyer analisou-se visualmente o quanto de óleo residual, criando-se uma escala de degradação com níveis variando de 1 a 3, onde 1 corresponde a pouca degradadação, e 3, degradação avançada não havendo quantidade perceptível de óleo. O nível 2, intermediário, representa a escala onde o óleo apresentava-se em menor quantidade que o inicial.
Tabela 6. Escala de degradação do biodiesel e petróleo bruto
frente aos micro-organismos isolados de áreas contaminadas com hidrocarbonetos e cultivadas nos meios 4.1.2.1 e 4.1.2.2, durante 5 dias a 28ºC.
Número da amostra Escala de degradação
Biodiesel Petróleo Diferença 1 2 3 4 5 6 7 8 2 3 3 1 2 3 1 1 1 3 1 1 3 3 2 2 1 0 2 0 -1 0 1 1
As escalas de degradação definidas na tabela 3 consideraram o estado visual de degradação dos combustíveis utilizados como fonte de carbono. Pode-se verificar que nas amostras em que o solo foi contaminado com derivados de petróleo, que os micro-organismos aparentemente estão mais adaptados à biodegradação que quando o substrato é o biodiesel – um substrato para o qual não há históricos de derrames. A escala de observação dos erlenmeyers avaliou também o desenvolvimento dos micro-organismos no meio líquido.
5.3. Resultado dos plaqueamentos em meios PCA e Sabouraud
A partir das diluições decimais dos inóculos do biodiesel, efetuou-se plaqueamentos em meios PCA e Sabouraud. Verificou-se que houve desenvolvimento dos micro-organismos,
necessitando-se diluir as amostras 1;4;5;6;7;8 ao nível de 10-5 e as amostras 2 e 3 foram necessárias diluições até 10-7, para poder recuperar as culturas.
Na etapa de utilização do petróleo, as culturas foram diluídas a 10-5, e a amostra 2 na diluição a 10-7.
O número de colônias de diferentes biótipos variou de 2 a 3 em média por placa nas amostras correspondentes ao experimento do biodiesel. Em relação ao petróleo, o número de biótipos permaneceu nessa mesma média, porém maior número de placas contendo apenas um biótipo.
As placas após incubação revelaram baixa diversidade microbiana, indicando que os ambientes contaminados promoveram seleção com alto nível de inibição de muitas espécies.
5.4. Culturas isoladas e puras
As amostras cujos cultivos foram efetuados no erlenmeyers após a purificação dos micro- organismos estão descritos na tabela 5.
Após o plaqueamento as culturas foram examinadas no microscópio, identificadas como fungos ou bactérias, além da observação de características macroscópicas da cultura, para que depois fossem purificadas por estriamentos, e então preservadas em tubos nos meios pertinentes.
De acordo com a tabela 4, foram isoladas 46 diferentes biótipos de micro-organismos selecionados que estão preservados.
Tabela 7. Culturas microbianas isoladas e preservadas em tubos de culturas em meios PCA
(bactérias) e Sabouraud (fungos).
Biodiesel Petróleo
Amostra Cultura Fungos/Leveduras Bactérias Fungos/Leveduras Bactérias
1 C1 Isolada - Isolada Isolada
C2 - - Isolada Isolada
2 C1 Isolada Isolada Isolada Isolada
C2 - Isolada - -
3 C1 Isolada Isolada Isolada Isolada
C2 Isolada Isolada - Isolada
4 C1 - Isolada Isolada Isolada
C2 - Isolada Isolada -
5 C1 - - Isolada Isolada
C2 Isolada Isolada Isolada Isolada
6
C1 - Isolada Isolada Isolada
C2 Isolada Isolada Isolada Isolada
C3 - Isolada Isolada -
7 C1 Isolada - - Isolada
C2 - - - Isolada
8 C1 Isolada Isolada Isolada Isolada
C2 Isolada - Isolada
Porcentagem de sucesso
nos isolamentos 52,94% 64,70% 70,58% 82,35%
(-) indica ausência de cultura
5.5. Testes de biodegradação
A apresentação dos resultados dos testes utilizando o meio BH e o indicador redox DCPIP baseou-se no cálculo da diminuição média da absorbância, sendo o resultado final dado em porcentagem de absorbância como registrado nas tabelas 8, 9, 10, 11 e figuras 6, 7, 10, 11 para os substratos: biodiesel e petróleo.
Tabela 8: Absorbâncias dos líquidos metabólicos obtidos
das culturas de fungos e leveduras cultivados em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao biodiesel em estufa a 28ºC, durante 5 dias.
Figura 6: Representação gráfica da diminuição percentual média de absorbância para os
líquidos metabólicos obtidos dos fungos e leveduras cultivadas em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao biodiesel.
Culturas Absorbância (λ = 604nm) Diminuição Média (%)
A1 A2 Ā Controle 0,877 0,877 0,877 00,00 1C1 0,321 0,330 0,325 62,80 1C2 0,310 0,315 0,312 64,36 2C1 0,413 0,391 0,402 54,16 2C2 0,288 0,256 0,272 68,98 3C1 0,331 0,346 0,338 61,40 3C2 0,158 0,133 0,145 83,41 4 0,522 0,498 0,510 41,84 5C1 0,254 0,269 0,261 70,18 5C2 0,355 0,381 0,368 58,04 6C11 0,300 0,369 0,334 61,85 6C12 0,784 0,784 0,784 10,60 7 0,376 0,343 0,359 59,00 8C1 0,436 0,484 0,460 47,54 8C2 0,160 0,372 0,266 69,67
Tabela 9: Absorbâncias dos líquidos metabólicos obtidos
das culturas bactérias cultivadas em mio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao biodiesel em estufa a 35°C, durante 5 dias.
Culturas Absorbância (λ = 604nm) Diminuição Média (%)
A1 A2 Ā Controle 0,877 0,877 0,877 00,00 1C1 0,452 0,423 0,437 50,11 1C2 0,368 0,251 0,309 64,70 2C1 0,288 0,291 0,289 66,98 3C1 0,402 0,423 0,412 52,96 3C2,2 0,360 0,365 0,362 58,66 3C2,3 0,412 0,409 0,410 53,19 4 0,337 0,345 0,341 61,12 5C1 0,328 0,341 0,334 61,85 5C2 0,245 0,278 0,261 70,18 6C1 0,358 0,349 0,353 59,69 6C2 0,352 0,351 0,351 59,92 6C3 0,324 0,357 0,340 61,18 7 0,397 0,388 0,392 55,24 8C1 0,285 0,271 0,278 68,31 8C2 0,228 0,228 0,228 74,01
Figura 7: Representação gráfica da diminuição percentual média de absorbância para
bactérias cultivadas em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao biodiesel.
Comparando-se as figuras 6 e 7, verifica-se que dentre os micro-organismos empregados, os fungos apresentaram menor desempenho na degradação do biodiesel ao longo
do período. Quando se compara as culturas isoladas da mesma amostra de material analisado, este resultado relatado fica evidenciado na figura 8.
Figura 8: Comparação gráfica da descoloração percentual média entre culturas de fungos e
leveduras e culturas de bactérias em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao biodiesel.
Quando se faz a mesma comparação entre os micro-organismos selecionados cultivados frente ao petróleo, a atividade microbiológica das bactérias na degradação desse substrato demonstra também ter sido maior do que as culturas de fungos e leveduras, como pode ser visto, de acordo com a figura 9, abaixo.
Figura 9: Comparação gráfica da descoloração percentual média entre as culturas de fungos e
leveduras e culturas de bactérias em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol, frente ao petróleo.
Tabela 10: Absorbâncias dos líquidos metabólicos obtidos
das culturas de fungos e leveduras cultivadas em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao petróleo.
Culturas Absorbância (λ = 604nm) Diminuição Média (%)
A1 A2 Ā Controle 1,457 1,457 1,457 00,00 1C1 0,322 0,297 0,309 78,75 1C2 0,458 0,398 0,428 70,62 2C1 0,258 0,332 0,295 79,75 3C1 0,198 0,215 0,206 85,82 3C2 0,486 0,398 0,442 69,66 4C1 0,223 0,294 0,258 82,25 4C2 0,488 0,471 0,479 67,08 5C1 0,315 0,287 0,301 79,34 5C2 0,272 0,276 0,274 81,19 6C1 0,335 0,269 0,302 79,27 6C2 0,379 0,331 0,355 75,63 6C3 0,287 0,395 0,341 76,59 7C1 0,421 0,433 0,427 70,69 7C2 0,344 0,401 0,372 74,43 8C1 0,281 0,299 0,290 80,09 8C2 0,413 0,566 0,489 67,05
Figura 10: Representação gráfica da diminuição percentual média de absorbância para fungos
e leveduras cultivadas em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao petróleo.
Tabela 11: Absorbâncias dos líquidos metabólicos obtidos
das culturas de bactérias cultivadas em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao petróleo.
Culturas Absorbância (λ = 604nm) Diminuição Média (%)
A1 A2 Ā Controle 1,457 1,457 1,457 00,00 1C1 0,248 0,261 0,254 82,53 1C2 0,214 0,263 0,238 83,63 2 0,265 0,180 0,222 84,55 3C1 0,300 0,300 0,300 79,40 3C2 0,239 0,236 0,237 83,69 4C1 0,253 0,244 0,248 82,94 4C2 0,316 0,298 0,307 78,93 5C1 0,235 0,240 0,237 83,69 5C2 0,278 0,276 0,277 80,98 6C1 0,188 0,198 0,193 86,75 6C2 0,215 0,263 0,194 86,68 7C1 0,251 0,233 0,242 83,39 7C2 0,215 0,213 0,214 85,31 8C1 0,311 0,268 0,289 80,13 8C2 0,277 0,351 0,314 78,44
Figura 11: Representação gráfica da diminuição percentual média de absorbância para
bactérias cultivadas em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao petróleo.
Comparando-se as figuras 12 e 13, verifica-se uma maior atividade biodegradadora para as linhagens de fungos e bactérias selecionadas na utilização do petróleo como substrato. A atividade média de diminuição da cor do DCPIP é maior no petróleo bruto. Tal fato pode ser explicado pela presença do antioxidante terc-butilhidroquinona (TBHC), que quando presente inibe a atividade microbiológica, como demonstrou Soares Junior (2008).
Figura 12: Comparação da descoloração percentual média resultante da atividade
degradadora de bactérias em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao petróleo e biodiesel.
Figura 13: Comparação da descoloração percentual média resultante da atividade
degradadora de fungos e leveduras em meio Bushnell-Hass com 2,6-diclorofenol indofenol frente ao petróleo e biodiesel.
No mesmo estudo de Junior (2008), o autor considerou que ocorreu a seleção de micro-organismos provenientes de amostras de biodiesel comercial de duas usinas diferentes. Ainda que haja a presença do antioxidante, os micro-organismos permaneciam com sua atividade atenuada, garantindo assim a qualidade do biodiesel. Muito embora, nota-se que estes eram adaptados a presença do antioxidante e após a inativação do conservante, os micro- organismos atuariam degradando o combustível.
Com isso, justificam-se os resultados obtidos de que as linhagens de fungos e bactérias selecionadas no presente estudo degradem com mais facilidade petróleo e derivados que o biodiesel. As amostras de solo coletadas para seleção dos micro-organismos utilizados eram provenientes de ecossistemas impactados principalmente com derivados de petróleo. Dessa
forma, o ambiente previamente já elaborou uma seleção natural de micro-organismos de tal forma que foram adaptados à utilização de hidrocarbonetos provenientes do petróleo. Tal fato também explica a baixa diversidade de biótipos selecionados das amostras de solo, uma vez que os ecossistemas trabalhados demonstram uma grande diversidade de linhagens de micro- organismos.
6. CONCLUSÕES
Na avaliação comparativa da biodegradação do biodiesel com o petróleo, verificou-se que este foi degradado com mais eficiência que o primeiro.
A biodegradação ocorre pelo mecanismo de óxido-redução em condições aeróbias. Nos ensaios de biodegradação de biodiesel e petróleo bruto, pode-se inferir que a médio e longo prazo o solo se auto-recupera pela ação dos micro-organismos remanescentes.
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
AARONSON, S. Experimental Microbial Ecology. 1ed. New York: Academic press, 1970. 236 p.
ADMON, S.; GREEN, M.; AVNIMELECH, Y. Biodegradation kinetics of hydrocarbons in soil during land treatment of oily sludge. Bioremediation Journal. Philadelphia, v.5, n.3, p. 193-209, 2001.
Ambiente Brasil: Biorremediação. 2005. Disponível em: <http://www.ambientebrasil.com.br/composer.php3?base=./agropecuario/index.html&conteu do=./agropecuario/artigos/biorremediacao.html>. Acesso em 8 de dezembro de 2007
ASCON-CABRERA, M.A.; LEBEAUT, J.M. Cell hydrophobicity influencing the activity/stability of xenobiotic-degrading microorganisms in a continuous bifasic aqueous- organic system. Journal of Fermentation and Bioengineering. Osaka, Japão, v.80, n. 3, p. 270 – p. 275, 1995.
ATLAS, R. M. Petroleum biodegradation and oil spill bioremediation. Marine Pollution
Bulletin, v.31, n. 4-12, p. 178-182, 1995.
CAMPBELL, R. Microbial Ecology – Basic Microbiology. Blackwell Scientific Publications, 1977. v.5.
CAMPO, P.; ZHAO, Y.; SUIDAN, M. T.; VENOSA, A. D. E.; SORIAL, G. A.
Biodegratation kinectics and toxicity of vegetable oil triacylglycerols under aerobic conditions. Chemosphere: Oxford, Inglaterra, GB, v.68, n.11, p. 2054 – 2062, 2007.
CETESB ® Aspectos toxicológicos dos óleos. Disponível em: <http://www.cetesb.sp.gov.br/emergencia/acidentes/vazamento/oleo/a_toxicologicos.asp>, 2005. Acesso em: 9 de dezembro de 2007.
CETESB ® Aspectos físicos e químicos do óleo. Disponível em: <http://www.cetesb.sp.gov.br/emergencia/acidentes/vazamento/oleo/a_fisicos.asp>. 2005 . Acesso em: 9 de dezembro de 2007.
CETESB® - Companhia de Tecnologia e Saneamento Ambiental. Amostragem de solo. In: CETESB, Manual de Gerenciamento de áreas contaminadas – CETESB, GTZ. São Paulo, 2001, 2. ed. 389p.
CORTEZ, H.; LIMA, R. Estudo da Cetesb estima que o total de áreas contaminadas
subiu 10% em SP. Disponível em: <http://www.ecodebate.com.br/2009/03/03/estudo-da-
cetesb-estima-que-o-total-de-areas-contaminadas-subiu-10-em-sp> Acesso em 31/08/2009.
CUNHA, R. As mil e uma utilidades de um líquido negro que vale ouro. Disponível em: <http://www.comciencia.br/reportagens/petroleo/pet13.shtml>. 2004. Acesso em: 1 de dezembro de 2007.
DIFCO. Manual: Dehydrated culture media and reagents for microbiology. 10 ed. Detroit, Michigan, USA, 1984.
DOELMAN, P.; BREEDVELK, G. In situ versus on siste practices. In: ADRIANO, D. C. et al. (Ed). Bioremediation of Contaminated Soils. Madison: ASA/CSSA/SSSA, p. 539-558, 1999.
EWING, G. W. Instrumental methods of chemical analysis. New York: McGraw-Hill, 1960. 454p.
FERREIRA, A.L. BTEX e a sua problemática. Disponível em <http://geocities.yaoo.com.br/geoquimicaambiental2001/alexandre.htm>. 2004. Acesso em: 5 de dezembro de 2007.
FOGAÇA, M. N. Avaliação da capacidade de biodegradação de substâncias oleaginosas
por Candida viswanathii, 2007. 60f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em
Ecologia) – Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências de Rio Claro: [s.n.], 2007.
FURTADO, M.I. Ataque microbiano remedia áreas contaminadas. 2004. Disponível em: <http://www.quimica.com.br/revista/qd389/biotecnologia1.htm>. Acesso em 5 de dezembro de 2007.
GARRITZ, A.; CHAMIZO, J.A. Química. São Paulo: Pearson Education do Brasil, 2003.
GAYLARDE, C. C. Biorremediação de solos poluídos. MIRCEN, Depto de Solos, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, 6p. II Reunião Nacional de Microbiologia
Aplicada ao Meio Ambiente, UFSC – Florianópolis, SC. 1998.
GRAY, M. R.; BANERJEE, D. K.; DUDAS, M. J.; PICKARD, M. A. Protocols to enhance biodegradation of hydrocarbon contaminants in soil. Biorremediation Journal, Philadelphia, v.4, n.4, p. 249-257, 2000.
GROWNEWOLD, J.C., PICO, F.R., WATSON, K.S. Comparison of BOD relationships for typical dibble and petroleum oils. Journal of the water Pollution Control Federation, Alexandria, v.54, p. 398 – 405, 1982.
HENCKLEIN, F. A. Estabilização de “landfarming” de refinaria de petróleo e
aplicabilidade em solos com baixos teores de caborno. 62f. Trabalho de Conclusão de
Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas) – Instituto de Biociências de Rio Claro – SP. [s.n.]. 2005.
HIGGINS, I.S.; BURNS, R.G. The Chemistry and Microbiology of Pollution. London, 248f., 1975.
HOEPPEL, R. E.; HINCHEE, R. E. Enhanced biodegradation for on-site remediation of contaminated soils and groundwater, p. 311-431. In: WILSON, D. J.; CLARKE, A. N. (eds). Harzouds waste site oil remediation. Theory and Application of Innovative Technologies. New York, Marcel Dekker, Inc., 584p., 1994.
JACQUES, R. J. S.; BENTO, F. M.; CAMARGO, F. A. O. Biorremediação de solos contaminados com hidrocarbonetos aromáticos policíclicos. Ciência Rural, Santa Maria – RS, v.37, p. 1192-1201, 2007.
JUNIOR, J. S.; MARIANO, A. P.; ANGELIS, D. F. Biodegradation of biodiesel/diesel blends by Candida viswanathii. African Journal of Biotechnology. Vol 8 (12). P. 2774 – 2778. 2008.
KATAOKA, A.P.A. Biodegradação de resíduo oleoso de refinaria de petróleo por micro-
organismos isolados de “landfarming”. 202 p. Tese (Doutorado em Microbiologia
Aplicada) – Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro, 2001.
KNOTHE, G.; GERPEN, J.V.; KRAHL, J.; RAMOS L.P. Manual de biodiesel. 1.ª Edição, 2006, Centro de Pesquisa em Química Aplicada – CEPESQ, Departamento de Química, Universidade Federal do Paraná, Curitiba-PR, Brasil.
LACAZ, C. S. Introdução ao estudo dos fungos. Significado dos cogumelos na economia
humana. In: LACAZ, C. S.; MINAMI, P. S.; Purchio, a. et al. O grande mundo dos fungos.
LEAHY, J. G.; COLWELL, R. R. Microbial degradation of hydrocarbons in the environment.
Microbial Reviews, v.53, p. 305-315, 1990.
LYON, T. L.; BUCKMAN, H. O. The nature and proprieties of soils. 4th. Ed. New York. Macmillian, 1943.
MACLEOD, C. T.; DAUGULIS A. J. Interfacial effects in a two-phase partitioning bioreactor: degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) by a hydrophobic Mycobacteriu. Process Biochemestry, Oxon, v.40, n.5, p. 1799-1805, 2005.
MARIANO, A. P. Avaliação do potencial de biorremediação de solos e águas
subterrâneas contaminadas com óleo diesel. Tese (Doutorado em Geociências) – Instituto
de Geociências e Ciências Exatas, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro, 2006.
MARIANO, A. P.; ANGELIS, D. F.; BONOTTO, D. Monitoring of geochemical indicators
and biodegradation evaluation at a site contaminated with diesel oil. Revista de
Engenharia Sanitária e Ambiental. Vol. 12 n.° 3. Rio de Janeiro. Julho/Setembro. 2007.
MARIANO, A. P.; TOMASELLA, R. C.; OLIVEIRA, L. M.; CONTIEIRO, J.; ANGELIS, D. F. Biodegradability of diesel and biodiesel blends. African Journal of Biotechnology. Vol. 7. P. 1323 – 1328. 2008.
MARIANO, J. B. Impactos ambientais do refino de petróleo. Editora Interciência Ltda. Rio de Janeiro – RJ. 2005.
MARTINS, A. et al. Biorremediação. 2005. Disponível em:
<http://ceset.unicamp.br/Ite/Artigos/3fec2401.pdf>. Acesso em 10 de dezembro de 2007.
MELLO, G. S. L. Viabilidade da aplicação do método respirométrico de Bartha para determinação da biodegradação de poluentes ou resíduos em latossolos. Engenharia
METTING, F. B. Jr. Structure and physiological ecology of soil microbial communities. In: METTING, F. B. Jr. (Ed.) Soil microbial ecology. New York: Marcel Dekker, 1993, Cap. 1, p. 3-25.
MILANELLI, J. C. C. Biomonitoramento de costões rochosos do canal de São Sebastião –
Instrumento para a avaliação de impactos ambientais gerados por derrames de petróleo.
297p. 2003. Tese de Doutorado em Oceanografia. Universidade de São Paulo. USP. 2003.
MONGKOLTHANARUK, W.; DHARMISTHITI, S. Biodegradation of lipid-rich wastewater by a mixed bacterial consortium. International Biodegradation, Barking, Inglaterra, v.50, n.2, 2002.
MORAIS, E.B. Biodegradação de resíduos oleosos provenientes de refinaria de petróleo
através do sistema de biopilhas. 2005. 64f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas)
– Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro, 2005.
OLIVEIRA, D. M. Biodegradação de biodiesel de origem animal. 64f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) – Instituto de Biociências. Universidade Estadual Paulista. Rio Claro. São Paulo. 2008.
PAUL, E. A.; CLARK, F. E. Soil microbiology and biochemistry. 2nd. Ed. San Diego. Academic Press. 1989.
PASCHOA, G. O petróleo e a agressão ao meio ambiente. Disponível em <http://www.comciencia.br/reportagens/petroleo/pet09.shtml>. Acesso em: 8 de dezembro de 2007.
RAMASWAMI, A.; LUTHY, R. Measuring and modeling physicochemical limitations to bioavailability and biodegradation. In HURST, C. J.; KNUDSEN, G. R.; McINERNEY, M. J.; STETZENBACH, L. D.; WATER, M. V. (eds.). Manual of environmental Microbial. ASM Press, Washington DC, pp. 721-729, 1997.
RUSSEL, J.B. Química Geral. 2.ed. São Paulo: Pearson Education do Brasil, 1994. 2v.
SABATÉ, J.; VIÑAS, M.; SOLANAS, A. M. Laboratory-scale biorremediation experiments on hydrocarbon-contaminated soils. International Biodeterioration Biodegradation, Edinburg, v.54, n.1, p. 19-25, 2004.
SEABRA, P. N. C. Uso de tensoativos na mobilização e biodegradação de óleo diesel em
solos impactados. Dissertação (mestrado). COPPE – Universidade Federal do Rio de Janeiro.
Rio de Janeiro – RJ. 1997.
SESSITSCH, A.; WEILHARTER, A.; GERZABEK, M. H.; KIRCHMANN, H.; KANDELER, E. Microbial population structures in soil particle size fractions of a long-term fertilizer field experiment. Applied Environmental Microbiology, Washington, v.67, n.9, p. 4215-4224, 2001.
SILVA, O. C. Óleos vegetais. São Paulo, 2002.
SOARES JUNIOR, J. Verificação de contaminantes e a biodegradação de
biocombustíveis. 108 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado e Licenciatura em
Ciências Biológicas) – Instituto de Biociências de Rio Claro. [s.n.]. 2008.
SOLOMONS, T.W.G.; FRYHLE, C.B. Química orgânica 1. 7.ª ed. Rio de Janeiro. LTC, 2001.
SPILBORGHS, M. C. F. Biorremediação de aqüífero contaminado com hidrocarboneto. Dissertação (Mestrado) – Instituto de Geociências, Universidade de São Paulo, 1997.
SPOSITO, G. The chemistry of soils. New York: Oxford University Press, 1989.
STOLP, H. Microbial ecology organisms habitats activities. Cambridge University Press. 1988.
URURAHY, A.F.P., MARINS, M.D.M., VITA, R.L. et al. Efeito da aeração sobre a
biodegradação de resíduo de petróleo. Rev. Microbiol., Out/Dez 1998, vol. 29, n.º 4. ISSN
0001-3714.
WACKETT, L. P.; ELLIS, L. B. M. Predicting biodegradation. Environmental
Microbiology, Braunschweig, v.1, n.2, p. 119-124, 1999.
WIEDEMEIR, T. H. Aproximation of biodegradation rate constants for monoaromatic hydrocarbons (BTEX) in ground water. Ground Water Monitoring Remote and