Capítulo IV – Resultados
3. Testes Suscetibilidade aos Antifúngicos
3.2 Resultados da determinação da CMI 50 fluconazole
Na determinação da CMI-50 com o antifúngico fluconazole, isto é, concentração em que se verifica uma redução de 50% de crescimento de leveduras mediante a ação do referido fármaco, registou-se para a espécie C. albicans uma redução em 80% da amostragem. Nas restantes 20% não se verificou alteração perante a ação de antifúngico (figura 8).
Já no caso das estirpes não-albicans, em particular na espécie glabrata, verifica-se uma redução em 66% e em contraste não há redução nas restantes 33%. No cômputo da C.
tropicalis, em duas identificadas, apenas uma se revelou resistente, sendo que no caso desta
se determinou uma redução no seu crescimento.
29
Capítulo V – Discussão
Embora, a levedura do género Candida seja um microrganismo pertencente à população microbiana normal do ser Humano, o surgimento de uma tendência crescente na incidência e prevalência da CVV, tem sido seguida com bastante apreensão. Os números são preocupantes e no contexto geral atingem percentagens alarmantes, provocando ainda consequências mais adversas decorrentes do aumento das taxas de resistência. Este panorama é desolador e deve ser alvo de debate e práticas de vigilância (76, 77). Estas ações devem cada vez mais ser valorizadas e apoiadas.
No universo de amostras consideradas e alvo de análise no presente trabalho de investigação, obtiveram-se um total de 118 provenientes de exsudados vaginais, de 48 casos clínicos.
No respeitante à discriminação e distribuição das amostras por espécies, os dados vão de encontro ao descrito na literatura, ou seja, verifica-se uma percentagem predominante de
C. albicans – 67% (n=79) (literatura aponta para um intervalo entre – 50 a 90%) e uma
tendência crescente de aumento em espécies não-albicans – 33% (7, 31, 78). No caso das espécies não-albicans, nesta investigação, aquilata-se que a C. glabrata é a predominante, seguindo-se a C. tropicalis e a C. krusei. É de todo interessante observar que o binómio espécies-percentagens obtido é similar, e se posiciona num intervalo que se vem registando nos dados de outras investigações. Estes reflectem exactamente a crescente incidência das espécies não-albicans, situação que é adicionalmente reflectida no panorama internacional através de diversos estudos. As indicações de outros autores e estudos corroboram, os dados obtidos na presente investigação em análise(79-81).
A alteração deste panorama nos casos de CVV pode dever a sua génese, ao aumento das resistências ao fluconazole, por parte das espécies não-albicans, que provocam uma alteração do agente etiológico levando à sua predominância em relação à C. albicans (82). Outros motivos válidos averiguados e que podem explicar a tendência descrita são: o uso a longo prazo de diversos azoles e o uso insistente de compostos antifúngicos que provocam uma seleção de espécies (83).
Sem dúvida que a ilação a reter e de acordo com o defendido por vários autores é o facto de parecer haver uma alteração do paradigma, isto é, diminuição de percentagens de prevalência de C. albicans e consequente aumento das outras espécies (20). O que se pode verificar na presente investigação, em que a percentagem de espécie C.albicans não atinge um valor tão elevado no intervalo defendido por alguns autores – 50% a 90%; dando lugar a um valor considerável de outras espécies.
Relativamente aos testes de suscetibilidade antifúngica das 118 amostras, 110 foram alvo de teste in vitro a dois compostos, fluconazole e clotrimazole. Das restantes oito
30
amostras, duas ao serem identificadas como C. krusei foram automaticamente excluídas do teste, já que são intrinsecamente resistentes aos azoles (83). A totalidade da S. cerevisae (5) revelaram-se suscetíveis e a C. lypolitica também se mostrou suscetível ao fluconazole. As provas de suscetibilidade revestem-se de uma pertinência inestimável, já que proporcionam dados que permitem direccionar a acção clínica acerca da terapêutica a administrar.
A análise dos dados redundou numa evidência preocupante, no caso particular da espécie C. albicans a resistência atingiu os 56% (n=44), sendo que a percentagem de amostras que revelaram sensibilidade ao fluconazole atingiu os 40%. Esta alteração considerável no padrão de resistência de C. albicans a este azole pode ter explicação na alteração do
breakpoint levada a cabo pelo CLSI e com implicações diretas na interpretação dos intervalos de suscetibilidade. A preocupação é patente se se atentar noutros artigos que referem elevadas taxas de sensibilidade ao fluconazole sempre com valores próximos dos 80% (84, 85). Nas espécies não – albicans, ao registar-se 33% de prevalência, pode inferir-se que tal como acima mencionado, existe uma tendência similar ao panorama internacional, isto é, uma crescente incidência de espécies que não-albicans (1, 79, 80, 86). O aumento das resistências, que é comum em casos de terapêutica prolongada, deve ser observado com evidente preocupação e também com prudência, sendo que a implementação de medidas de prevenção e a elaboração de estudos como o exposto é de todo recomendável por forma a entender da melhor forma o assunto em estudo.
Já no que ao estudo da suscetibilidade ao clotrimazole concerne, tendo por base os valores obtidos de 54% de suscetibilidade e 46% de resistência no caso de C. albicans, 55% de sensibilidade e 45% de resistência, na espécie C. glabrata e 50% de resistência e 50% de sensibilidade no caso de C. tropicalis, pode inferir-se que existem evidências de elevadas percentagens de resistência a este imidazole.
Os valores que se situam num intervalo percentual entre 45% e os 50% vão de encontro a publicações sugestivas de valores similares, tendo por base um valor similar ou intervalo de CMI mais elevado (87, 88). Conclui-se que o clotrimazole pode atingir elevadas percentagens de ineficácia no controlo das candidoses vaginais, tal é também afirmado categoricamente por Claire S. Danby et al (89).
Passando a outro campo de análise dos dados obtidos, outro foco de particular interesse na observação dos dados é o número de pacientes que apresentam prevalência de cada uma das diversas espécies de Candida na primeira colheita. Assim é verificável que existem 44 indivíduos cuja presença de C. albicans foi detectada na primeira colheita. No caso da C. glabrata apenas se registaram 3 pacientes com infeção provocada por esta espécie no primeiro episódio e 2 pacientes com C. tropicalis na primeira colheita. No caso da espécie C.
parapsilosis verificou-se uma doente com presença da levedura no primeiro episódio
patológico. Esta análise permite afirmar de forma claro e inequívoca que a C. albicans é a espécie, que regista maior prevalência num momento inicial do episódio clínico.
A evidência de alteração de espécie no espaçamento temporal é outro dado significativo e de relevo no contexto clínico. Esta situação ocorreu em sete do universo total
31
de pacientes incluídos no estudo. Não se pode afirmar categoricamente que houve uma tendência clara neste item em particular já que se verificaram casos de alteração de espécie
albicans para leveduras de espécies não-albicans como se verifica em três dos casos,
alteração de espécie não-albicans para albicans, em dois casos, alteração de espécie albicans para não-albicans e nova conversão para espécie albicans, em um caso. Assim, num total de 48 casos clínicos, existe uma taxa de 12,5% em que houve conversão de espécie. Este dado permite concluir que a grande maioria dos pacientes permanecem colonizados ao longo do tempo, com a mesma espécie que provocou o processo infecioso inicial. Desta forma, prova-se a grande utilidade da investigação e caracterização dos casos de CVV, pois permite adequar e direccionar o tratamento de forma a evitar administração de antimicóticos que não se revelem eficazes; por conseguinte diminuição de taxas de resistência.
A mudança de suscetibilidade, isto é, alteração de sensibilidade ou resistência e vice- versa ao agente terapêutico é também dado alvo de análise na investigação e tal situação ocorreu em sete pacientes. Esta última situação pode estar relacionada com alterações de espécies causadoras da patologia, resistência crescente ao fármaco administrado entre outas hipóteses.
Interessante também, é averiguar a existência de diferenças significativas entre as estirpes no que toca à sensibilidade. Mediando a análise no gráfico da figura 7 e no teste estatístico de
Kruskal-Wallis,
conclui-se que na C. albicans a sensibilidade tem o maior valor, seguida da C. troplicalis. Há uma diminuição na sensibilidade na C. glabrata, outras leveduras e onde se verifica a menor sensibilidade é na C. parapsilosis. O resultado é que se comprova que existem diferenças assinaláveis, entre estirpes, em relação à suscetibilidade.Da análise dos resultados obtidos neste ensaio e tendo em consideração o facto de todos estes casos terem sido de isolados durante processos de tratamento clínico não eficaz sabendo que 48% do total de isolados se apresentaram susceptíveis ao agente antifúngico mais utilizado no seu tratamento – o fluconazole - pelo que se poderá inferir que o insucesso terapêutico não está relacionado unicamente com o perfil de resistência ao antifúngico mas também com outros mecanismos de virulência associados a esta espécie, nomeadamente a formação de biofilmes. Efectivamente, dada a reduzida capacidade destes compostos para penetrarem a matriz complexa do biofilme, o antifúngico azolico não é considerado um agente antifúngico eficaz quando este mecanismo de protecção esta presente.
Pode-se constar pela análise do estudo e variáveis obtidas que existe uma relação entre a ineficácia clínica do tratamento da patologia, por azoles e a suscetibilidade revelada nos casos crónicos. A diminuição da suscetibilidade leva a consequências nefastas no
tratamento e a um aumento das resistências. Enfatize-se uma vez mais, a necessidade de adoção de políticas preventivas e de investigação, de forma a debelar a crescente incidência da CVV.
32
Capítulo VI – Conclusão
Neste estudo pode constatar-se que a prevalência das infecções vaginais causadas por espécies do género Candida contínua a ser elevada. A sua incidência contínua a ser alvo de preocupação pelas diversas entidades, contudo é difícil obter dados redundantes quanto a este aspecto, já que não raras as vezes o diagnóstico é liminarmente decretado sem evidências clínicas e microbiológicas (micológicas).
É fundamental uma sensibilização crescente e contínua para que haja recurso aos métodos de diagnóstico, disponíveis e para que se evite a terapêutica empírica.
Outro dado adquirido através dos resultados obtidos e anteriormente discutidos é que, pelo menos no caso particular desta investigação, se verifica uma taxa considerável de resistência aos antifúngicos testados. Este dado pode ser indicativo de que medidas de prevenção e cuidados na administração de antimicóticos não estão a ser consideradas ou a ser adequadamente acauteladas. Contudo, esta situação deve ser alvo de prudência e de uma investigação mais alargada e profunda. Consideramos também que tendo sido incluídos no estudo isolados clínicos de casos de insucesso terapêutico, o estudo também evidencia que a resistência aos azoles não é o único factor envolvido neste mecanismo de resistência clinica.
Outra ilação interessante é o facto de a percentagem de espécies não-albicans estar em crescendo, corroborando estudos e dados de outros países.
Deste modo, e em grande plano pode concluir-se que se justifica um grande estudo que trace um panorama da situação das infeções fúngicas vaginais em Portugal. A implementação de medidas de cariz investigacional e de pesquisa em contexto clínico pode revelar-se um aliado na diminuição das taxas de resistência e serem a longo prazo responsáveis por uma diminuição de custo associados.
34
Referências
1.
Kumari V, Banerjee T, Kumar P, Pandey S, Tilak R. Emergence of non-albicans
Candida among candidal vulvovaginitis cases and study of their potential virulence
factors, from a tertiary care center, North India. Indian J Pathol Microbiol. 2013 Apr-
Jun;56(2):144-7. PubMed PMID: 24056652. Epub 2013/09/24. eng.
2.
Almeida AA, Mesquita CS, Svidzinski TI, Oliveira KM. Antifungal
susceptibility and distribution of Candida spp. isolates from the University Hospital in
the municipality of Dourados, State of Mato Grosso do Sul, Brazil. Rev Soc Bras Med
Trop. 2013;46(3). PubMed PMID: 23856873. Epub 2013/07/17. eng.
3.
Eggimann P, Garbino J, Pittet D. Epidemiology of Candida species infections in
critically ill non-immunosuppressed patients. Lancet Infect Dis. 2003 Nov;3(11):685-
702. PubMed PMID: 14592598. Epub 2003/11/01. eng.
4.
Buchta V, Spacek J. [Pitfalls of the current laboratory diagnosis and treatment of
vulvovaginal candidiasis]. Klin Mikrobiol Infekc Lek. 2011 Oct;17(5):158-63. PubMed
PMID: 22161751. Epub 2011/12/14. Uskali soucasne laboratorni diagnostiky a terapie
vulvovaginalni kandidozy. cze.
5.
Corsello S, Spinillo A, Osnengo G, Penna C, Guaschino S, Beltrame A, et al. An
epidemiological survey of vulvovaginal candidiasis in Italy. Eur J Obstet Gynecol
Reprod Biol. 2003 Sep 10;110(1):66-72. PubMed PMID: 12932875. Epub 2003/08/23.
eng.
6.
Tortorano AM, Kibbler C, Peman J, Bernhardt H, Klingspor L, Grillot R.
Candidaemia in Europe: epidemiology and resistance. Int J Antimicrob Agents. 2006
May;27(5):359-66. PubMed PMID: 16647248. Epub 2006/05/02. eng.
7.
Bauters TG, Dhont MA, Temmerman MI, Nelis HJ. Prevalence of vulvovaginal
candidiasis and susceptibility to fluconazole in women. Am J Obstet Gynecol. 2002
Sep;187(3):569-74. PubMed PMID: 12237629. Epub 2002/09/19. eng.
8.
Marr KA. Invasive Candida infections: the changing epidemiology. Oncology
(Williston Park). 2004 Dec;18(14 Suppl 13):9-14. PubMed PMID: 15682589. Epub
2005/02/03. eng.
9.
Bedini A, Venturelli C, Mussini C, Guaraldi G, Codeluppi M, Borghi V, et al.
Epidemiology of candidaemia and antifungal susceptibility patterns in an Italian
tertiary-care hospital. Clin Microbiol Infect. 2006 Jan;12(1):75-80. PubMed PMID:
16460550. Epub 2006/02/08. eng.
10.
Sobel JD. Vulvovaginal candidosis. Lancet. 2007 Jun 9;369(9577):1961-71.
PubMed PMID: 17560449. Epub 2007/06/15. eng.
11.
Paiva LC, Vidigal PG, Donatti L, Svidzinski TI, Consolaro ME. Assessment of
in vitro biofilm formation by Candida species isolates from vulvovaginal candidiasis
and ultrastructural characteristics. Micron. 2012 Feb;43(2-3):497-502. PubMed PMID:
22001373. Epub 2011/10/18. eng.
12.
Abi-Chacra EA, Souza LO, Cruz LP, Braga-Silva LA, Goncalves DS, Sodre CL,
et al. Phenotypical properties associated with virulence from clinical isolates belonging
to the Candida parapsilosis complex. FEMS Yeast Res. 2013 Dec;13(8):831-48.
PubMed PMID: 24103069. Epub 2013/10/10. eng.
13.
Sardi JC, Scorzoni L, Bernardi T, Fusco-Almeida AM, Mendes Giannini MJ.
Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural
antifungal products and new therapeutic options. J Med Microbiol. 2013 Jan;62(Pt
1):10-24. PubMed PMID: 23180477. Epub 2012/11/28. eng.
35
14.
Linhares LM, Witkin SS, Miranda SD, Fonseca AM, Pinotti JA, Ledger WJ.
Differentiation between women with vulvovaginal symptoms who are positive or
negative for Candida species by culture. Infect Dis Obstet Gynecol. 2001;9(4):221-5.
PubMed PMID: 11916179. Pubmed Central PMCID: 1784657. Epub 2002/03/28. eng.
15.
Nyirjesy P. Vulvovaginal candidiasis and bacterial vaginosis. Infect Dis Clin
North Am. 2008 Dec;22(4):637-52, vi. PubMed PMID: 18954756. Epub 2008/10/29.
eng.
16.
(SPG) SPdG. Revisão dos Consensos em Infecções Vulvovaginais. 2012 Junho
12.
17.
Hong E, Dixit S, Fidel PL, Bradford J, Fischer G. Vulvovaginal candidiasis as a
chronic disease: diagnostic criteria and definition. J Low Genit Tract Dis. 2014
Jan;18(1):31-8. PubMed PMID: 23760143. Epub 2013/06/14. eng.
18.
Nucci M, Queiroz-Telles F, Alvarado-Matute T, Tiraboschi IN, Cortes J, Zurita
J, et al. Epidemiology of candidemia in Latin America: a laboratory-based survey. PLoS
One. 2013;8(3):e59373. PubMed PMID: 23527176. Pubmed Central PMCID: 3601956.
Epub 2013/03/26. eng.
19.
Kent HL. Epidemiology of vaginitis. Am J Obstet Gynecol. 1991 Oct;165(4 Pt
2):1168-76. PubMed PMID: 1951572. Epub 1991/10/01. eng.
20.
Kennedy MA, Sobel JD. Vulvovaginal Candidiasis Caused by Non-albicans
Candida Species: New Insights. Curr Infect Dis Rep. 2010 Nov;12(6):465-70. PubMed
PMID: 21308556. Epub 2011/02/11. eng.
21.
Spinillo A, Capuzzo E, Gulminetti R, Marone P, Colonna L, Piazzi G.
Prevalence of and risk factors for fungal vaginitis caused by non-albicans species. Am J
Obstet Gynecol. 1997 Jan;176(1 Pt 1):138-41. PubMed PMID: 9024104. Epub
1997/01/01. eng.
22.
Anson JJ, Allen KD. Evaluation of CHROMagar Candida medium for the
isolation and direct identification of yeast species from the female genital tract. Br J
Biomed Sci. 1997 Dec;54(4):237-9. PubMed PMID: 9624731. Epub 1998/06/13. eng.
23.
Richter SS, Galask RP, Messer SA, Hollis RJ, Diekema DJ, Pfaller MA.
Antifungal susceptibilities of Candida species causing vulvovaginitis and epidemiology
of recurrent cases. J Clin Microbiol. 2005 May;43(5):2155-62. PubMed PMID:
15872235. Pubmed Central PMCID: 1153777. Epub 2005/05/06. eng.
24.
Ozcan K, Ilkit M, Ates A, Turac-Bicer A, Demirhindi H. Performance of
Chromogenic Candida agar and CHROMagar Candida in recovery and presumptive
identification of monofungal and polyfungal vaginal isolates. Med Mycol. 2010
Feb;48(1):29-34. PubMed PMID: 19191167. Epub 2009/02/05. eng.
25.
Pirotta MV, Garland SM. Genital Candida species detected in samples from
women in Melbourne, Australia, before and after treatment with antibiotics. J Clin
Microbiol. 2006 Sep;44(9):3213-7. PubMed PMID: 16954250. Pubmed Central
PMCID: 1594690. Epub 2006/09/07. eng.
26.
Costa-de-Oliveira S, Pina-Vaz C, Mendonca D, Goncalves Rodrigues A. A first
Portuguese epidemiological survey of fungaemia in a university hospital. Eur J Clin
Microbiol Infect Dis. 2008 May;27(5):365-74. PubMed PMID: 18204871. Epub
2008/01/22. eng.
27.
Correia A, Sampaio P, Almeida J, Pais C. Study of molecular epidemiology of
candidiasis in portugal by PCR fingerprinting of Candida clinical isolates. J Clin
Microbiol. 2004 Dec;42(12):5899-903. PubMed PMID: 15583336. Pubmed Central
PMCID: 535247. Epub 2004/12/08. eng.
28.
Vazquez-Gonzalez D, Perusquia-Ortiz AM, Hundeiker M, Bonifaz A.
Opportunistic yeast infections: candidiasis, cryptococcosis, trichosporonosis and
36
geotrichosis. J Dtsch Dermatol Ges. 2013 May;11(5):381-93; quiz 94. PubMed PMID:
23621330. Epub 2013/04/30. eng.
29.
Pfaller MA, Messer SA, Hollis RJ, Boyken L, Tendolkar S, Kroeger J, et al.
Variation in susceptibility of bloodstream isolates of Candida glabrata to fluconazole
according to patient age and geographic location in the United States in 2001 to 2007. J
Clin Microbiol. 2009 Oct;47(10):3185-90. PubMed PMID: 19656983. Pubmed Central
PMCID: 2756923. Epub 2009/08/07. eng.
30.
Patrick R. Murray KSR, Michael A. Pfaller. Medical Microbiology. In: Elsevier,
editor. Medical Microbiology. 6th ed2008. p. 779 - 81
31.
Ilkit M, Guzel AB. The epidemiology, pathogenesis, and diagnosis of
vulvovaginal candidosis: a mycological perspective. Crit Rev Microbiol. 2011
Aug;37(3):250-61. PubMed PMID: 21599498. Epub 2011/05/24. eng.
32.
Taylor BN, Staib P, Binder A, Biesemeier A, Sehnal M, Rollinghoff M, et al.
Profile of Candida albicans-secreted aspartic proteinase elicited during vaginal
infection. Infect Immun. 2005 Mar;73(3):1828-35. PubMed PMID: 15731084. Pubmed
Central PMCID: 1064921. Epub 2005/02/26. eng.
33.
Mayer FL, Wilson D, Hube B. Candida albicans pathogenicity mechanisms.
Virulence. 2013 Feb 15;4(2):119-28. PubMed PMID: 23302789. Pubmed Central
PMCID: 3654610. Epub 2013/01/11. eng.
34.
Ombrella AM, Racca L, Ramos L. [Protease and phospholipase activities of
Candida albicans isolated from vaginal secretions with different pH values]. Rev
Iberoam Micol. 2008 Mar;25(1):12-6. PubMed PMID: 18338921. Epub 2008/03/15.
Actividades proteinasa y fosfolipasa de aislamientos de Candida albicans provenientes
de secreciones vaginales con distintos valores de pH. spa.
35.
Achkar JM, Fries BC. Candida infections of the genitourinary tract. Clin
Microbiol Rev. 2010 Apr;23(2):253-73. PubMed PMID: 20375352. Pubmed Central
PMCID: 2863365. Epub 2010/04/09. eng.
36.
Whiteway M, Bachewich C. Morphogenesis in Candida albicans. Annu Rev
Microbiol. 2007;61:529-53. PubMed PMID: 17506678. Epub 2007/05/18. eng.
37.
Porman AM, Hirakawa MP, Jones SK, Wang N, Bennett RJ. MTL-independent
phenotypic switching in Candida tropicalis and a dual role for Wor1 in regulating
switching and filamentation. PLoS Genet. 2013 Mar;9(3):e1003369. PubMed PMID:
23555286. Pubmed Central PMCID: 3605238. Epub 2013/04/05. eng.
38.
Cullen PJ, Sprague GF, Jr. The regulation of filamentous growth in yeast.
Genetics. 2012 Jan;190(1):23-49. PubMed PMID: 22219507. Pubmed Central PMCID:
3249369. Epub 2012/01/06. eng.
39.
Kumar CP, Kumar SS, Menon T. Phospholipase and proteinase activities of
clinical isolates of Candida from immunocompromised patients. Mycopathologia. 2006
Apr;161(4):213-8. PubMed PMID: 16552483. Epub 2006/03/23. eng.
40.
Vediyappan G, Rossignol T, d'Enfert C. Interaction of Candida albicans biofilms
with antifungals: transcriptional response and binding of antifungals to beta-glucans.
Antimicrob Agents Chemother. 2010 May;54(5):2096-111. PubMed PMID: 20194705.
Pubmed Central PMCID: 2863626. Epub 2010/03/03. eng.
41.
d'Enfert C. Biofilms and their role in the resistance of pathogenic Candida to
antifungal agents. Curr Drug Targets. 2006 Apr;7(4):465-70. PubMed PMID:
16611034. Epub 2006/04/14. eng.
42.
Cheng SC, Joosten LA, Kullberg BJ, Netea MG. Interplay between Candida
albicans and the mammalian innate host defense. Infect Immun. 2012 Apr;80(4):1304-
13. PubMed PMID: 22252867. Pubmed Central PMCID: 3318407. Epub 2012/01/19.
eng.
37