As colónias não fermentadoras da lactose resistentes aos antibióticos de selecção, estreptomicina (500µg/mL) e cefotaxima (2µg/mL) incorporados no meio de MacConkey, foram reisoladas no referido meio de selecção, para verificar o crescimento e confirmar a morfologia da colónia transconjugante.
A confirmação da transferência da BLEA por conjugação foi realizada através de antibiograma para detecção da BLEA e determinação do pI do transconjugante por focagem isoeléctrica. Comparou-se com o antibiograma e pI da espécie dadora, de forma a comprovar a presença de BLEA nos transconjugantes.
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A recolha das amostras de fezes, não repetidas, de residentes de lares de idosos da zona norte do País, foi realizada entre Janeiro e Julho de 2008.
Foram estudadas 184 amostras de fezes provenientes de residentes dos lares de idosos, nomeadamente: lar FFUP1 - 9 amostras; FFUP2 - 21 amostras; FFUP3 - 37 amostras; FFUP4 - 25 amostras; FFUP5 - 51 amostras; FFUP6 - 41 amostras.
O estudo permitiu detectar 58 isolados de bacilos de Gram negativo produtores de
BLEA da família Enterobacteriaceae, colonizadores do tracto intestinal de residentes autónomos e dependentes nos seis lares de idosos. Na tabela 2 encontra-se o número de amostras de fezes provenientes de cada lar de idosos e respectivo número de isolados produtores de BLEA, não repetidos, detectados no presente estudo.
Tabela 2 - Amostras de fezes provenientes dos lares de idosos e respectivo número de isolados produtores de BLEA detectados
Embora, não fosse objectivo do estudo detectou-se a presença de 15 isolados bacterianos produtores de carbapenemases do tipo metalo-β-lactamases em amostras provenientes de três lares de idosos, nomeadamente quatro isolados bacterianos no lar FFUP3, sete isolados bacterianos no lar FFUP5 e quatro isolados bacterianos no lar FFUP6.
Lar de idosos Amostras de fezes Isolados produtores de BLEA FFUP1 9 1 FFUP2 21 1 FFUP3 37 1 FFUP4 25 2 FFUP5 51 42 FFUP6 41 11
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1 – Caracterização dos lares de Idosos
Os seis lares de idosos FFUP1, FFUP2, FFUP3, FFUP4, FFUP5 e FFUP6, foram seleccionados aleatoriamente na zona norte do País. As instituições distinguem-se quanto ao número de residentes dependentes e autónomos e características inerentes à prestação de cuidados de saúde como hospitalização, procedimentos médicos e técnicas invasivas de diagnóstico e terapêutica e consumo de antibióticos.
Os lares FFUP1, FFUP2 e FFUP3 caracterizam-se pela presença de maior número de residentes autónomos comparativamente aos residentes dependentes. As três instituições apresentam serviço médico e de enfermagem (regime diurno), porém os residentes costumam recorrer às instituições hospitalares, quando necessário. Aquando da recolha de amostras no lar FFUP3, alguns residentes dependentes tiveram hospitalizações recentes, assim como um dos residentes dependentes do lar FFUP1. O lar FFUP4 apresenta maior número de residentes dependentes do que autónomos, comparativamente aos lares de idosos referidos anteriormente. Nesta instituição, com serviço médico e de enfermagem (regime diurno e nocturno), existe uma política restrita do consumo de antibióticos, assim como evitam recorrer a serviços hospitalares.
Os lares de idosos FFUP5 e FFUP6 diferenciam-se das restantes pelo elevado número de residentes dependentes, os quais se encontram separados, relativamente ao espaço físico da instituição, dos residentes autónomos. Os residentes dependentes destas instituições apresentam elevado grau de debilidade, procedimentos médicos e técnicas invasivas e elevado consumo de antibióticos, particularmente o lar FFUP5. Nestas instituições de saúde existem equipas de enfermagem de forma a assegurar a
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2 – Contagem de UFC/mL nos meios de cultura de MacConkey e
MacConkey selectivo com antibiótico β-lactâmico
Os bacilos de Gram negativo da família Enterobacteriaceae produtores de BLEA, apresentam resistência ou redução da susceptibilidade aos oximino-β-lactâmicos, nomeadamente cefotaxima e ceftazidima, e/ou aztreonamo. Utilizou-se para detecção destas espécies produtoras de BLEA, meios de cultura de MacConkey contendo antibiótico β-lactâmico de selecção adequado.
A inoculação das amostras de fezes a partir do caldo BHI em meio de MacConkey com antibiótico de selecção sofreu a adição de outros meios de selecção, no decorrer do estudo. Aos meios de cultura de MacConkey com antibiótico, cefotaxima (2µg/mL) e
ceftazidima (2µg/mL) utilizados nas primeiras abordagens metodológicas,
nomeadamente lar FFUP1, FFUP2 e FFUP3, adicionou-se meios de MacConkey com aztreonamo (2µg/mL) e imipenemo (2µg/mL). O objectivo consistiu em aumentar a probabilidade de detecção de espécies bacterianas resistentes aos respectivos antibióticos β-lactâmicos incorporados no meio de cultura, que não seja detectada nos meios de cultura selectivos com cefotaxima e ceftazidima.
Aos meios de cultura inoculados para cada amostra, após o período de incubação de 24 a 48h a 37°C, efectuou-se contagem do crescimento bacteriano, sendo os resultados expressos em UFC/mL. A figura 5 ilustra um exemplo típico do crescimento bacteriano, amostra FFUP521 do lar FFUP5, nos meios de cultura de MacConkey com antibiótico β-lactâmico adequado à selecção de estirpes produtoras de BLEA.
61 Figura 5 - Aspecto macróscopico do crescimento bacteriano em meio de MacConkey com antibiótico β- lactâmico de selecção. I - colónias fermentadoras da lactose em meio de MacConkey com cefotaxima (2µg/mL) proveniente do sobrenadante do caldo BHI; II - colónias fermentadoras da lactose em meio de MacConkey com ceftazidima (2µg/mL) proveniente do sobrenadante do caldo BHI; III - colónias fermentadoras da lactose em meio de MacConkey aztreonamo (2µg/mL) proveniente do sobrenadante do caldo BHI; IV - colónias fermentadoras da lactose em meio de MacConkey cefotaxima (2µg/mL) proveniente do sedimento do caldo BHI; V - colónias fermentadoras da lactose em meio de MacConkey ceftazidima (2µg/mL) proveniente do sedimento do caldo BHI; VI - colónias fermentadoras da lactose em meio de MacConkey aztreonamo (2µg/mL) proveniente do sedimento do caldo BHI.
Os resultados da contagem de UFC/mL de fermentadores da lactose em meio de MacConkey e meio de MacConkey com antibiótico cefotaxima (2µg/mL), ceftazidima (2µg/mL), aztreonamo (2µg/mL) e imipenemo (2µg/mL) para as amostras provenientes dos seis lares de idosos, são apresentados respectivamente nas tabelas 3 a 8. A contagem de UFC/mL de não fermentadores da lactose oxidase positivo e presença de leveduras é apresentada nas referidas tabelas.
I
IV VI
III
V II
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