Os pesticidas organofosforados (OPs) são considerados neurotoxinas e são melhor caracterizados pelo aumento da atividade colinérgica e diminuição da acetilcolinesterase (Low et al., 2013). A exposição excessiva ao OP está associada à ocorrência de muitas doenças crônicas em humanos, como câncer, mal de Parkinson, mal de Alzheimer, esclerose múltipla, diabetes, doenças renais, cardiovasculares e crônicas (Goindin et al., 2017. O desconforto diário causado ao gado por mordidas freqüentes). levando a perdas significativas de produção (Bianchin et al., 2004; Byford et al., 1992; Foil; Hogsette, 1994).
No Brasil, estima-se que Haematobia irritans cause danos econômicos de aproximadamente US$ 3,24 bilhões por ano (Grisi et al., 2014). O controle desse ectoparasita continua a depender de inseticidas químicos que são aplicados diretamente nos hospedeiros e afetam principalmente as moscas adultas (Campos et al., 2008). Segundo Domingues et al. 2012), de todos os ectoparasiticidas aplicados em bovinos naturalmente infestados por moscas, destaca-se a pulverização corporal total.
No entanto, atualmente essa via está sendo substituída pelo uso de brincos impregnados com inseticida, que são colocados na orelha do gado, o que permite que a droga seja distribuída por difusão entre as partículas de gordura na pele do animal (Vechiato et al., 2013 ) ) . No entanto, o adiazinon afeta os órgãos reprodutivos de ratos, reduzindo o peso sexual, reduzindo a motilidade, a viabilidade e aumentando as anormalidades morfológicas do esperma (Abd el-Aziz et al., 1994). Nas fêmeas, o Diazinon demonstrou inibir o desenvolvimento oocitário em camundongos (Bonilla et al., 2008) e suínos, comprometendo a viabilidade, a maturação (Casas et al., 2010), a fertilização in vitro e o desenvolvimento embrionário (Ducolomb et al. . . , 2009).
A vitamina E é considerada um importante antioxidante natural com base em suas propriedades como a inibição da peroxidação lipídica, que é uma contribuição para a defesa antioxidante em membranas biológicas, sendo a primeira linha de defesa contra a peroxidação de ácidos graxos insaturados (Evstigneeva et al. , 1998).
PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS
17 técnica de aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassom Ovum Pick Up (OPU) (VARAGO et al., 2008). Após a realização desses procedimentos, os ovócitos serão expostos a três processos biológicos mimetizados em laboratório: maturação in vitro, fertilização in vitro e cultivo in vitro (MELLO et al., 2016). A maturação extrafolicular envolve uma série de alterações no citoplasma e no núcleo do oócito, que visam possibilitar a fecundação desse gameta (MELLO et al., 2016).
A fertilização in vitro consiste na interação entre o espermatozoide capacitado e o oócito para possibilitar a formação do zigoto (MELLO et al., 2016). O cultivo in vitro ocorre após a fertilização e consiste na transferência do zigoto recém-formado para um meio de cultura que atenda às suas necessidades nutricionais, permitindo o surgimento de múltiplas divisões até formar um blastocisto (GARCIA E FERNÁNDEZ, 2012).
MATURAÇÃO IN VITRO
18 As células do cumulus corona radiata participam ativamente do mecanismo de crescimento e maturação oocitária (CHAVES et al., 2010). In vivo, enquanto o ovócito está dentro de um folículo não ovulatório, a retomada da meiose não ocorre por inibição de fatores presentes no fluido folicular, mecanismo iniciado logo após o pico pré-ovulatório de LH (SIRARD et al., 1998). . No processo in vitro, os ovócitos voltam à meiose quando são retirados dos ovários, o que provavelmente se deve à retirada do sinal inibitório do folículo, tornando o tempo entre a aspiração e o início da maturação in vitro importante para não comprometer a capacidade de fertilização do oócito (SÁ et al., 2003) cultivado em meios específicos (MOTA, 2013).
Embora o cúmulo não seja essencial para a maturação nuclear do oócito, a maturação citoplasmática fica bastante comprometida na ausência desse tipo celular (GONÇALVES et al., 2008). Melhores resultados de maturação, fertilização e desenvolvimento embrionário são obtidos na presença dos cúmulos, fato que reforça a importância dessas células somáticas. Folículos ovarianos menores que 2 mm de diâmetro geralmente são incapazes de retomar a meiose, enquanto folículos maiores que 8 mm geralmente são incapazes devido ao fato de já estarem em processo de atresia ou maturação, comprometendo sua viabilidade (PAVLOK et al. , PAVLOK et al., 1992; GONÇALVES, 2008). Morfologicamente, os ovócitos com maior potencial de viabilidade devem apresentar um ooplasma homogêneo com granulações finas, de cor marrom e completamente circundado por múltiplas camadas de células do cúmulus compactamente arranjadas (GONÇALVES et al., 2002).
19 A maturação in vitro leva à capacitação de oócitos que sofrem modificações nucleares e citoplasmáticas, rearranjo de organelas, expressão de genes que serão traduzidos em proteínas, expansão de células do cumulus que podem sofrer alterações devido às condições de cultivo (WARZYCH et al., 2007; WATSON et al., 2000). In vitro, a expansão das células do cumulus é visível após 12 horas de cultivo (SUTOVSKY et al., 1993). A presença significativa de glicosaminoglicanos nas células do cumulus impede a ação do estresse oxidativo dos radicais livres nos oócitos, o que impede a redução da taxa de clivagem (LUVONI et al., 1996), e o choque térmico que bloqueia a síntese proteica (EDWARDS; HANSEN, 1997). .
Para reduzir os efeitos nocivos causados pela exposição ao ambiente atmosférico e aproximar as condições intrauterinas, a maturação in vitro é realizada em incubadoras a 38,5 °C em atmosfera de 5% de CO2 e umidade saturada por aproximadamente 24 horas (GONÇALVES et al., 2008). . O uso de fluido folicular e substâncias como butirolactona I (BLI), hipoxantina e roscovitina têm sido utilizados com sucesso para inibir temporariamente a maturação até o início do cultivo in vitro (GONÇALVES et al., 2008; SÁ et al., 2003). Oócitos cultivados in vitro são afetados por diversas condições fisiológicas específicas, como temperatura, pH, concentração de CO2 e O2 (GOTTARDI E MINGOTI, 2009).
A frequência de blastocistos, prenhez e criopreservação obtidos de oócitos maturados e fertilizados in vitro são menores do que os obtidos em sistemas in vivo, provavelmente devido à maturação citoplasmática incompleta, o que reflete na capacidade de obtenção de unidades embrionárias (GONÇALVES et al., 2008). A maturação inadequada do oócito, seja no núcleo ou no citoplasma, compromete o processo de fertilização e o desenvolvimento embrionário (LONERGAN et al., 2003). Outro parâmetro de avaliação indireta consiste na expansão das células do cumulus, tempo de extrusão do 1º CP, aumento do espaço perivitelino (KOTSUJI et al., 1994) e uso de substâncias fluorescentes que permitem visualizar a configuração da cromatina em os ovócitos.
FERTILIZAÇÃO IN VITRO
Os espermatozóides viáveis encontrados em uma palheta de sêmen devem ser separados do plasma seminal, crioprotetores, diluentes e espermatozóides mortos antes de serem cultivados com oócitos. Após a triagem, os espermatozóides são diluídos para uma concentração final de 1 a 5 x 106 espermatozóides viáveis/ml de meio.
CULTIVO IN VITRO
DIAZINON
Segundo a EPA (Agência de Proteção Ambiental), o diazinon foi o primeiro inseticida organofosforado sintético registrado nos Estados Unidos em 1956. É usado na agricultura para controlar insetos em diversas culturas, árvores frutíferas, cana-de-açúcar, arroz, milho e tabaco. . O mecanismo de ação dessa molécula consiste na inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE), que causa o bloqueio da hidrólise da acetilcolina (ACh), que causa o acúmulo de neurotransmissores, que causa paralisia neuromuscular, convulsões e causa a morte de insetos (VELKI et al., 2017).
O conhecimento das propriedades físico-químicas dos inseticidas é muito importante, pois permite prever seu comportamento no ambiente. No entanto, o uso do adiazinon foi proibido em 2004 pela Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos para todos os tipos de uso em residências, devido ao risco potencial à saúde humana, e na agricultura foi feito um acordo autorizando seu uso. com limitações (BRAGA e BARROS, 2004). É pouco miscível em água, mas completamente solúvel em alguns solventes orgânicos como acetona, benzeno, etanol, tolueno e xileno (HORNSBY et al., 1996).
TROLOX
Effects of hornworm, Haematobia irritans (L.) (Diptera: Muscidae) on body weight gain of Nellore cattle. Effects of the insecticides malathion and diazinon on early oogenesis in mice in vitro. Differential effects of the herbicides atrazine and fenoxaprop-ethyl and the insecticides diazinon and malathion on the viability and maturation of porcine oocytes in vitro.
In vitro maturation and fertilization of oocytes from unstimulated normal ovaries, polycystic ovaries and women with polycystic ovary syndrome. Status of production, preservation and transfer of in vitro produced embryos in small ruminants. The influence of morphology, follicle size, and Bcl-2 and Bax transcripts on the developmental competence of bovine oocytes.
Efeito in vitro de malathion e diazinon na fertilização oocitária e no desenvolvimento embrionário em suínos. Maturação in vitro de oócitos bovinos em meio suplementado com quercetina e seu efeito no desenvolvimento embrionário. Capacitância de espermatozóides touro e fertilização in vitro de ovócitos foliculares bovinos maturados em cultura.
Efeito do sêmen de diferentes touros na taxa de fertilização in vitro e no desenvolvimento embrionário. Alterações dinâmicas das junções comunicantes e do citoesqueleto durante o cultivo in vitro de complexos cumulus de oócitos bovinos. Produção in vitro de embriões bovinos: estado da arte e perspectiva de uma técnica em constante evolução.
Additions to in vitro maturation media affect bovine blastocyst production and their apoptotic index, but not the proportions of mature and apoptotic oocytes. Effect of bovine oocyte maturation media on oocyte transcript levels, blastocyst development, cell number and apoptosis.
CERTIFICADO DA COMISSÃO DE ÉTICA NO USO DE ANIMAIS
