XXXI Congresso de Iniciação Científica
Identificação de redes extracelulares de neutrófilos (NETs) em lesões de pacientes com hidradenite supurativa e avaliação in vitro de neutrófilos: correlação de NETs com gravidade da doença
Larissa de Carvalho, Amanda Manoel Della Coletta, Ana Laura Ortega Dezen, Kaio Shu Tsyr Yu, Yohan Ricci Zonta, Helio Amante Miot, Luciane Alarcão Dias-Melicio. Botucatu, Faculdade de Medicina e Instituto de Biociências, Ciências Biológicas, larissa_ltd@hotmail.com.
Palavras Chave: neutrophil extracellular Traps (NETs), hidradenite supurativa.
Introdução
A Hidradenite Supurativa (HS) é uma doença inflamatória cutânea supurativa crônica, caracterizada por inflamação perifolicular, especialmente em áreas de dobras cutâneas (axilas e períneo)1. Além da inflamação perifolicular, há hiperceratose do epitélio folicular, com consequente dilatação e oclusão dos folículos1. Em seguida, os folículos se rompem e liberam seu conteúdo na derme, causando um aumento do processo inflamatório nos tecidos adjacentes. Com o progresso da inflamação, há um influxo de neutrófilos, monócitos, mastócitos e macrófagos nos infiltrados inflamatórios das lesões dos pacientes, sendo essas células relacionadas à liberação excessiva de citocinas pró-inflamatórias, como IL- 17, IL-23, IL-23. 1β e TNF-α na pele lesada, exacerbando o processo inflamatório presente no HS2,3. No entanto, não existe na literatura descrição da presença das NETs e participação das estruturas na patogênese da doença.
Objetivo
Identificar a presença de NETs nas lesões excisadas de pacientes com HS.
Material e Métodos
Fragmentos das lesões excisadas de pacientes com HS foram fixados em formol tamponado e congelados em meio de transporte. Utilizando-se um micrótomo, foram realizados cortes de 4μm de espessura. As lâminas contendo os cortes histológicos foram marcadas para visualização dos componentes das NETs com anticorpos primários anti-histona e anti-elastase, seguida de incubação com anticorpos secundários conjugados com Texas Red e com FITC. O DNA foi marcado com DAPI. As imagens foram analisadas em microscópio confocal Leica TCS SP8 e a captura de imagens realizadas com auxílio do software LAS AF.Cortes sequenciais também foram corados com hematoxilina e eosina (H.E.).
Resultados e Discussão
As imagens revelaram a presença de NETs, evidenciadas pela presença de DNA, co-localizado com elastase e histona, confirmadas pela
sobreposição das 3 marcações. A análise histopatológica confirmou a presença de neutrófilos no local da lesão, além de DNA extracelular (positivo para hematoxilina), representando NETs.
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Conclusões
Identificamos NETs presentes por toda a lesão. A presença de NETs e neutrófilos no infiltrado inflamatório das lesões, demonstram um potencial papel na patogênese e gravidade da doença.
Estudos adicionais estão sendo conduzidos para verificação dessa hipótese.
Agradecimentos
À minha orientadora, ao LIAI – Laboratório de Imunopatologia de Agentes Infecciosos e aos alunos e funcionários da UNIPEX..
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1 Saunte DML, Jemec GBE. Hidradenitis Suppurativa: Advances in Diagnosis and Treatment. JAMA. 2017 Nov 28;318(20):2019–
32.
2 Lima AL, Karl I, Giner T, Poppe H, Schmidt M, Presser D, et al.
Keratinocytes and neutrophils are important sources of proinflammatory molecules in hidradenitis suppurativa. Br J Dermatol. 2016 Mar;174(3):514–21.
3 Shah A, Alhusayen R, Amini-Nik S. The critical role of macrophages in the pathogenesis of hidradenitis suppurativa.
Inflamm Res Off J Eur Histamine Res Soc Al. 2017 Nov;66(11):931–45.
Figura 1. Análise por Microscopia Confocal.
Lesão de paciente com HS marcadas com histona, elastase e DAP.Microscopia Confocal.
Figura 2. Análise Histopatológica.
Corte de lesão corada com hematoxilina e eosina (HE).
