Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
31a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
“Metodologias de extração e monitoramento por CLAE/UV de biflavonóides nos extratos botânicos de Cupressus lusitanica”
Luciana da Silva Amaral (PG)*1, Edson Rodrigues Filho (PQ)1
lu_samaral@yahoo.com.br,edino@pesquisador.cnpq.br
1 LaBioMMi - Departamento de Química - Universidade Federal de São Carlos Palavras Chave: biflavonoides, Cupressus lusitanica, CLAE/UV
Introdução
Os principais constituintes químicos relacionados à quimiotaxonomia do gênero Cupressus são os biflavonóides. Recentemente, foram encontradas várias árvores de Cupressus lusitanica no campus da UFSCar e pode-se perceber que estas estão infectas por fungos. Iniciou-se um estudo para verificar o paralelismo entre a infestação fúngica e a síntese de biflavonóides pela planta hospedeira. Em um primeiro estágio foram encontrados os biflavonóides cupressoflavona e amentoflavona. A partir deste resultado, foram desenvolvidas 3 metodologias de extração e monitoramento por CLAE/UV desta classe de compostos.
Resultados e Discussão
Cada método de extração utilizou 100mg de folhas de C. lusitanica secas e moídas. No método A, foram adicionados 2 mL de ACN ao material vegetal e sonicados por 15 minutos. O sobrenadante foi retirado e pré-purificado em cartucho de C18 e os compostos eluidos com 2 mL de THF. O extrato foi monitorado por CLAE/UV empregando o método cromatográfico polares 2. Já o método de extração B utilizou como extrator 2 mL de H2O: ACN (7:3) e ultrassom por 15 minutos. Removeu-se o sobrenadante e a este foi adicionado 2 mL CHCL3, para separação dos compostos de polaridade inferior.
A amostra foi concentrada em speed vac e analisada empregando o método cromatográfico polares 21. O último procedimento consistiu na extração ácido/base (método C) empregando MeOH e ultrassom por 2 min., seguido da adição de NH4OH 0,1 mol/L e ultassom por mais 5 min. Ao sobrenadante foi adicionado HCl concentrado até obtenção de pH ~ 4 e os compostos fenólicos foram extraídos com AcOEt. O extrato resultante foi analisado pelo método bf_ab.
E m todas as análises por CLAE/UV empregou-se fase estacionária Gemini 10µ C18 110A da marca Phenomenex. Utilizou-se modo reverso de eluição contendo como fase móvel MeOH/ACN 1:1 e H2O milli-Q, ambos acidificados com 0,1% de TFA. O método cromatográfico encontra-se na Tabela 1.
Apesar de possuir várias bandas cromatográficas, o método A não se mostrou eficiente, uma vez que não foram observados, no espectro no UV, absorções
características de biflavonóides (máximos de absorção em ~ 270nm e 330 nm). Enquanto que os métodos B e C apresentaram várias bandas com espectros no UV característicos destes compostos.
Destacou-se, porém, o método de extração AB, devido a grande quantidade de bandas cromatográficas referentes aos compostos fenólicos em estudo.
Tabela 1. Métodos cromatográficos Polares 21 Apolares 2 Bf_ab Tempo
(min)
%B Tempo (min)
%B Tempo (min)
%B
0,01 15 0,01 60 0,01 25
10 40 30 100 35 100
35 40 40 100 40 100
36 100 40,01 60 40,01 25
40 100 60 60 45 25
41 15
50 15
Figura 1. Cromatogramas a 232 nm e espectros no UV dos extratos obtidos pelos métodos A, B e C
Conclusões
O método de ácido/base mostrou-se o mais eficiente na extração de biflavonóides.
Agradecimentos
A FAPESP pela bolsa concedida e ao CNPQ e CAPES.
_______________________
1 Romane, A., Galardi, C., Pinelli, P.,Mulinacci, N., Heimler, D., Chromatographia, 56, 465-474, 2002.
M i n u t e s
5 10 1 5 20 25 30 35 40 4 5 5 0
mAU
0 2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 0
mAU
0 200 400 600 800
Spectrum at time 8.13 min.
n m
2 2 52502753003 2 53 5 0
8.13 min
Spectrum at time 9.33 min.
n m
2 2 52502753003 2 53 5 0
9.33 min
Spectrum at time 16.34 min.
n m
2252 5 02753 0 03253 5 0
16.34 min
Spectrum at time 17.07 min.
n m
2 2 52502753003 2 53 5 0
1 7 . 0 7 m i n
Spectrum at time 19.33 min.
n m
2 2 52502753003 2 53 5 0
1 9 . 3 3 m i n
Spectrum at time 20.58 min.
n m
2 2 52502753003 2 53 5 0
2 0 . 5 8 m i n
CLA
M i n u t e s
5 10 1 5 20 25 30 35 40 4 5 5 0
mAU
0 2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 0
mAU
0 200 400 600 800
S p e c t r u m a t t i m e 8 . 6 7 m i n .
nm
2 0 02252502 7 53003 2 53 5 0
8.67 min
S p e c t r u m a t t i m e 1 0 . 6 1 m i n .
n m
2002 2 52 5 02753 0 03 2 5350
1 0 . 6 1 m i n
Minutes
5 10 15 2 0 2 5 30 35 40 45 5 0
mAU
0 50 100
0 50 100
S p e c t r u m a t t i m e 2 4 . 3 1 m i n .
nm
2 6 0280300320340360
Spectrum at time 25.09 min.
nm
2 6 02803003 2 0340360
S p e c t r u m a t t i m e 2 6 . 2 8 m i n .
nm
2602803003203 4 0360
Spectrum at time 27.01 min.
nm
2602 8 0300320340360
Spectrum at time 29.07 min.
n m
2 6 02803 0 03203 4 0360
Spectrum at time 29.80 min.
nm
2 8 0300320340360
S p e c t r u m a t t i m e 3 0 . 2 5 m i n .
n m
2 6 02803 0 03203 4 03 6 0
CLB
CLC
